李银
- 作品数：214 被引量：511H指数：12
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 一步法SYBR Green实时定量RT-PCR检测坦布苏病毒方法的建立被引量：7
- 2015年
- 为建立快速检测坦布苏病毒（Tembusu virus，TMUV）的一步法SYBRGreen实时定量RT-PCR方法，本研究根据TMUVNS2A基因的保守序列，设计并合成了1对特异性引物，以体外转录的NS2A基因作为标准品，采用一步法实时定量RT-PCR方法检测TMUV。结果显示该方法标准曲线的决定系数为0．997，具有良好的线性关系；灵敏度为1ul10拷贝，是常规RT-PCR方法的100倍；并且与其他病毒无交叉反应，批内和批间变异系数分别为0．11％～0．30％和0．88％～1．31％，具有良好的特异性和稳定性。该方法对于TMUV人工感染鸭泄殖腔棉拭子的检测阳性率为100％，而常规RT-PCR检测的阳性率只有71％。因此，本研究所建立的一步法实时定量RT-PCR方法灵敏度高、重复性、特异性好，可以用于TMUV的临床检测。
- 刘青涛李银赵冬敏刘宇卓黄欣梅杨婧韩凯凯安凤娇
- 关键词：实时定量RT-PCR
- 抗猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：5
- 2000年
- 用 PEG60 0 0沉淀和蔗糖密度梯度离心从细胞培养物中纯化猫泛白细胞减少症病毒 ( FPV) ,以纯化FPV免疫 BALB/c小鼠 ,运用淋巴细胞杂交瘤技术 ,获得了 4株抗 FPV的特异性单克隆抗体 ( Mc Ab)。其腹水 Mc Ab的 ELISA效价在 1 0 - 4～ 1 0 - 5之间 ,其中 1株具有血凝抑制能力。经 ELISA阻断试验及 ELISA交叉反应性试验测定 ,这 4株 Mc Ab可与 FPV、犬细小病毒 ( CPV)和水貂肠炎病毒 ( MEV)呈特异性反应 ,因此可作为检测 FPV、CPV和
- 钱建飞陈溥言蔡宝祥张振兴凌雯李银
- 关键词：猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体生物学特性
- 鸭H9亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立
- H9亚型禽流感病毒无论在分子学特性上还是致病性上都被归类为低致病性病毒。它可以感染各种各样的物种,包括鸡,鹌鹑,火鸡,鸭,鹅,猪和人类。在亚洲,20世纪90年代前期就已经从鸭中分离出H9N2亚型禽流感病毒。而水禽尤其是鸭...
- 魏雪涛李银刘宇卓张敬峰
- 文献传递
- 鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选被引量：3
- 2021年
- 为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。
- 田宇杰嵇辛勤章丽娇刘青涛韩凯凯杨婧刘宇卓赵冬敏刘娜王梦瑶李银
- 关键词：灭活疫苗
- 鹅黄病毒囊膜蛋白的原核表达及抗原性分析被引量：3
- 2012年
- 选取鹅黄病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断和可作为亚单位疫苗的重组蛋白。根据鹅黄病毒JS804株全基因序列设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了鹅黄病毒的E基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-E,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。结果表明,鹅黄病毒E基因在大肠杆菌中获得高效表达,融合蛋白分子量约为70 kDa,主要以包涵体形式存在于菌体中。Western Blot和间接免疫荧光试验发现,重组E蛋白具有较好的反应原性和良好的免疫原性。鹅黄病毒E蛋白的原核表达为进一步研究该蛋白功能、建立血清学检测方法及研制亚单位疫苗奠定了基础。
- 黄欣梅李银赵冬敏刘宇卓张敬峰韩凯凯钮慧敏
- 关键词：E蛋白原核表达抗原性
- 鸭源H9亚型禽流感病毒的分离及其生物学特性的研究
- 禽流感(Avianinfluenza,AI)是由正粘病毒科A型流感病毒(AIV)引起的禽类疾病,曾在许多国家和地区流行,已成为世界性传染病,导致了巨大的经济损失,严重危害养殖业的发展甚至人类健康.为此,本实验室对AIV在...
- 张敬峰李银刘宇卓杨秀华魏雪涛王磊
- 关键词：禽流感流感病毒生物学特性病毒分离
- 文献传递
- 鸡γ—干扰素基因的克隆及表达
- 应用逆转录多聚酶链式反应(RT—PCR)技术,以自行设计合成的一对引物,从ConA激活的SPF鸡外周血淋巴细胞中,扩增出了鸡γ—干扰素(ChIFN—γ)基因。将ChIFN—γ基因插入pMD18—T栽体,构建成pMDChI...
- 钱建飞刘宏梅凌雯李银张则斌
- 关键词：基因克隆基因表达
- 雏鹅新型病毒性肠炎的初步分离和鉴定被引量：5
- 2008年
- 从南京某地具典型雏鹅新型病毒性肠炎病变的死亡雏鹅体内分离到一株病毒。用12日龄鹅胚增殖病毒,通过电镜观察到腺病毒样粒子,直径70-120 nm;经与小鹅瘟阳性血清进行中和作用后,接种鹅胚后仍出现死亡。人工感染4日龄健康易感雏鹅,引起发病和死亡,并具有典型雏鹅新型病毒性肠炎的临床症状和剖检特征。用此株病毒感染的鹅胚尿囊液制备的沉淀抗原,经琼脂扩散试验,不能与小鹅瘟病毒阳性血清发生特异性沉淀反应。
- 刘宇卓李银魏雪涛张敬峰
- 关键词：小鹅瘟病毒
- 鸭坦布苏病毒RNA依赖RNA聚合酶的真核表达及生物信息学分析
- 2021年
- 旨在对鸭坦布苏病毒NS5蛋白功能基团RNA依赖RNA聚合酶进行真核表达,同时对其蛋白结构和功能进行生物信息学分析。首先查找GenBank数据库中收录的DTMUV基因序列,以RdRp基因为研究对象,通过软件设计并合成特异性引物,RT-PCR技术扩增RdRp基因,回收PCR产物并与pCMV-N-Flag真核表达载体相连接,构建真核表达质粒pCMV-Flag-RdRp,将测序无误的质粒转染至BHK-21细胞,通过Western Blot和间接免疫荧光技术检测该蛋白在BHK-21细胞内的表达。同时针对RdRp蛋白,利用生物信息学软件进行序列分析、结构解析及功能预测。通过PCR方法成功扩增RdRp基因,构建的真核表达质粒pCMV-Flag-RdRp经双酶切鉴定证明正确,进一步通过间接免疫荧光技术与Western Blot检测发现,重组质粒pCMV-Flag-RdRp在BHK-21细胞内正常表达,生物信息学分析发现,RdRp蛋白编码606个氨基酸,分子式为C_(3091)H_(4810)N_(870)O_(894)S_(41),编码蛋白亲水性平均系数为-0.536,不稳定指数为42.15,含有丰富的磷酸化位点及O-糖基化位点。其二级结构包含46.37%的α-螺旋、12.54%的延伸链以及35.31%的无规则卷曲。上述结果为进一步研究坦布苏病毒致病性打下了基础。
- 韩凯凯严若峰严若峰刘宇卓刘青涛刘宇卓李银章丽娇赵冬敏付晨
- 关键词：生物信息学
- 一种H9N2亚型禽流感灭活疫苗的生产方法及其制品
- 本发明公开了一种H9N2亚型禽流感灭活疫苗的生产方法及其制品，属于H9N2亚型禽流感灭活疫苗的生产及应用领域。本发明公开了一种H9N2亚型禽流感灭活疫苗的生产方法，包括：(1)利用细胞工厂培养MDCK细胞；(2)接种H9...
- 李银刘宇卓李彥伟滕颖黄欣梅赵冬敏韩凯凯杨婧
- 文献传递
