王金凤
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：复旦大学放射医学研究所骨代谢研究室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 成纤维生长因子(FGF)23基因沉默对甲状旁腺激素(PTH)促成骨细胞分化作用的影响被引量：2
- 2013年
- 目的研究内源性成纤维生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)对甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)促成骨细胞分化作用的影响。方法采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,应用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术(RNAi)沉默成骨细胞FGF23表达,应用MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性,应用real-time RT-PCR法检测其FGF23、ALP和骨钙素(osteocalcin,OCN)等基因mRNA水平,研究PTH对培养成骨细胞和FGF23基因沉默细胞的作用。结果 rhPTH1-34对培养成骨细胞增殖促进作用明显,分化促进作用弱。1×10-10～1×10-8mol/L rhPTH1-34作用3天,细胞增殖率增加31.6%～50.5%(P<0.05),而细胞比活性未见明显改变。同时其ALP和OCN转录水平轻度上调,分别较对照组增加35%(P<0.05)和16%(P>0.05)。rhPTH1-34上调成骨细胞FGF23mRNA水平(4倍),该作用可被针对FGF23特异的shRNA转染所抑制。FGF23基因沉默后PTH促分化作用明显增强,其ALP和OCN mRNA水平分别较对照组增加1.8倍(P<0.05)和5.8倍(P<0.05),显示内源性FGF23对PTH促分化的干扰作用。结论内源性FGF23可能参与PTH促分化作用的调节,FGF23上调可干扰PTH的促成骨细胞分化作用。
- 王金凤徐小雅丁巧灵周轶金慰芳王洪复高建军
- 关键词：RNA干扰(RNAI)
- 雌激素水平对大豆苷原(DAI)促成大鼠骨细胞分化作用的影响
- 2015年
- 目的 观察基础雌激素（estrogen）水平对大豆苷原（daizein,DAI）促成骨细胞分化作用的影响。方法采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,通过培养液中添加17β-雌二醇改变培养微环境（包括空白对照）雌激素水平,应用MTT法和对硝基苯磷酸盐（p-nitropheny-phosate,PNPP）法检测细胞增殖率和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,应用real-time PCR法检测其雌激素受体α（ERa）、雌激素受体β（ERβ）和过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR）γ的mRNA水平变化,研究雌激素基础水平变化对DAI促成骨细胞分化作用的影响。结果 培养环境中雌二醇水平升高致DAI的促分化作用减弱。其中100nmol/L DAI组ALP比活性较对照组的增幅由雌激素补充前的23%分别降至8%（17β-雌二醇为100pmol/L）和-11%（17β-雌二醇为1 000pmol/L）,显示基础雌激素水平对DAI促分化的拮抗作用。为避免培养液中血清雌激素的可能影响,进一步采用去激素血清培养（含2%去激素胎牛血清）。此时补充17β-雌二醇至100pmol/L,DAI各剂量组细胞ALP比活性较对照组明显增加（16%~21%,P〈0.05）。继续补充雌激素至1 000和10 000pmol/L时,其作用反而减弱。该结果显示,DAI促成骨细胞分化作用与雌激素基础水平有关,低雌激素状态（≤100pmol/L）可增强其作用。为进一步探索其作用机制,我们初步观察了雌激素（100pmol/L）和DAI（100nmol/L）单独或联合作用下成骨细胞ERa、ERβ和PPARγ受体表达变化。结果显示,100pmol/L 17β-雌二醇明显上调ERβ表达,并部分抵抗DAI下调ERβ的作用。结论 DAI的促成骨分化作用与基础雌激素水平有关,低雌激素（≤100pmol/L）状态有利于DAI的促分化作用,而雌激素水平升高可减弱其促分化作用。
- 丁巧灵王金凤徐小雅周轶金慰芳王洪复高建军
- 关键词：雌激素
- 大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制被引量：1
- 2011年
- 目的:研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1(steroid receptorcoactivator-1,SRC-1)和核受体辅抑制因子(nuclear receptor corepressor,NcoR)表达的调节作用及其机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞于含2%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的α最低必须培养基(α-minimal essential medium,α-MEM)中,给予不同浓度大豆苷原或10^(-8)mol/L的雌二醇作用3 d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182780(Faslodex,ICI,10^(-7) mol/L)和雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)特异性拮抗剂(methyl-piperidino-pyrazole,MPP,10^(-6) mol/L)干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果:大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^(-7)mol/L和10^(-5)mol/L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2.5倍(P<0.05)和2倍(P<0.05)。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35%(P<0.05)。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^(-7)mol/L和10^(-5) mol/L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1.8倍(P<0.05)和2.4倍(P<0.05)。结论:大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1/NcoR比值。ERβ参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1/NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。
- 王立芳王金凤金慰芳王洪复张绍芬高建军
- 关键词：大豆苷原成骨细胞受体雌激素
- 大豆苷原(DA)对成骨细胞雌激素受体(ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调节作用及其受雌激素的影响(英文)被引量：4
- 2012年
- 目的研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2%FBS)培养,分别用0.1和10μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10μmol/L的DA分别下调ERα蛋白水平44%和38%(P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31%(P<0.05),上调PPARγ74%和78%(P<0.05)。ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβmRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。
- 王立芳徐小雅周轶王金凤金慰芳王洪复张绍芬高建军
- 关键词：成骨细胞雌激素
- 内源性FGF23对PTH促成骨细胞分化作用的影响
- 目的: 甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)的促成骨作用是其治疗骨质疏松症的重要药理基础，然而对其促进成骨细胞分化的细胞基础和影响因素等尚存争议，其作用机制也未完全阐明。PTH有调节成纤维生长...
- 王金凤
- 关键词：甲状旁腺激素
- 文献传递
