程萱
- 作品数：82 被引量：209H指数：9
- 供职机构：军事医学科学院毒物药物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>
- 利用杆状病毒早期启动子在昆虫细胞中持续表达人β－干扰素
- 1994年
- 在含苜蓿尺蠖核多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）早期基因启动子的载体ｐＡｃＩＥ１中，插入人β－干扰囊（ＨｕＩＦＮ－β）基因，构建成转移载休ｐＩＥ１－ＩＢ；ｐＩＥ１－ＩＢ与含新霉素抗性基因（ＮＥＯ￣ｒ）的质粒ｐＩＥＩ－ＮＥＯ共转染秋粘虫细胞（Ｓｆ９细胞），使ＨｕＩＦＮ－β基因和ＮＥＯ￣ｒ基因整合到细胞基因组上产生转化细胞，含Ｇ４１８的培基分离新霉素抗性克隆，并增殖传代；转化细胞株传至５０代以上，不同传代水平细胞ＤＮＡ的点杂交证实ＨｕＩＦＮ－β基因已整合在细胞ＤＮＡ分子上，同时检测出干扰素（ＩＦＮ）的持续稳定表达，活性为５００—４０００ＩＵ／１０￣６细胞。抗天然ＨｕＩＦＮ－β抗体能完全中和所表达ＩＦＮ的抗病毒活性。
- 杨琴邓继先王少飞程萱
- 关键词：杆状病毒干扰素
- 牛β-乳球蛋白基因调控成分的克隆和用以制备小鼠乳腺生物反应器的研究
- 乳腺生物反应器,或称动物个体乳腺表达系统,即用于在乳腺中生产生物活性物质的转基因动物,将某种具有重要价值的生物活性蛋白的基因导入动物的受精卵中培养出转基因动物,使外源基因在动物的乳腺中高效表达并分泌到乳汁中,再从乳汁中提...
- 陈红星程萱杨晓邓继先苏国富黄培堂
- 文献传递
- 牛β-乳球蛋白基因的克隆及其调控外源基因表达的研究
- 2001年
- 目的 制备乳腺生物反应器所必需的乳腺特异性表达的调控序列 ,并验证其指导外源基因表达的能力。方法 用PCR法从奶牛染色体上分 5段扩增出了全长 8 2Kb的牛 β 乳球蛋白基因 ,包括 1 8Kb的 5′侧翼区、1 7Kb的 3′侧翼区及 4 7Kb的gDNA区。扩增出的各片段克隆到T 载体上 ,酶切鉴定及序列分析均证实了所扩增片段的正确性。将五个片段与荧光素酶cDNA拼接成荧光素酶瞬时表达载体并在小鼠乳腺中瞬时表达。结果 注射荧光素酶瞬时表达载体的小鼠乳汁中明显测出了荧光素酶活性。结论 所克隆的牛 β 乳球蛋白基因表达调控序列能够指导外源基因在小鼠乳腺中表达。
- 陈红星程萱杨晓邓继先苏国富黄培堂
- 关键词：乳腺荧光素酶外源基因表达Β-乳球蛋白基因
- La-tPA/G-CSF双转基因鼠的建立及在乳腺的表达研究被引量：2
- 1999年
- 分别以小鼠乳清酸蛋白 (WAP)基因 5′区 2 .6kb和羊β 乳球蛋白 (BLG)基因5′区 5kb为调控序列 ,构建了乳腺表达人集落剌激因子 (G CSF)及组织纤溶酶原激活剂突变体 (La tPA)载体 .利用显微注射法分别建立了G CSF和La tPA的转基因小鼠 ,在获得G CSF和La tPA表达基础上 ,采用 2种转基因小鼠交配的方式 ,对后代仔鼠进行了双引物同步PCR检测 ,筛选并建立了La tPA和G CSF的双转基因鼠 ,研究了不同转基因在小鼠体内共表达的情况 .Northernblot分析表明 ,在一些双转基因鼠中表达出La tPA和G CSF .后代鼠的一些基本特征为 ,产仔数明显低于正常鼠 ,双转基因占 46 .1 %,雌雄比例基本正常 .双转基因鼠的建立为未来利用转基因动物生产多种蛋白质提供依据 .
- 卢一凡田靫邓继先程萱黄培堂
- 关键词：G-CSF乳腺基因表达
- 129/ter小鼠胚胎干细胞系GLDD-1的建立
- 收集129/ter小鼠3.5天的囊胚94枚,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层培养4-6天后,内细胞团(ICM)增殖明显的囊胚数为39个。ICM经胰酶离散后继续培养,其中10株形成胚胎干细胞(ES细胞)样细胞集落。将这些胚胎...
- 侯宁程萱孙彦洵程竞杨晓
- 文献传递
- 小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的构建小鼠Bpi条件基因打靶载体,为建立Bpi条件基因打靶小鼠模型和深入研究Bpi基因功能奠定基础。方法采用Cre/LoxP系统,选择小鼠Bpi基因第2、3外显子作为条件性敲除的目的片段,并在其两侧插入LoxP位点;运用LA-PCR技术,以129品系小鼠ES细胞基因组DNA为模板分步扩增包括Bpi第2、3外显子(中间同源臂)和上游同源臂在内的3.1 kb基因片段以及下游同源臂4.9 kb基因片段;构建pBSKⅡ-5SLoxP和ploxPFRTNeo-3L重组质粒,将前者酶切产物(3.1 kb)与酶切后的ploxPFRTNeo-3L质粒相连获得Bpi条件基因打靶载体。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBSKⅡ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L重组质粒和Bpi条件基因打靶载体结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Bpi条件基因打靶载体。
- 康赟林福玉滕艳侯宁程萱吕喆孔庆利安云庆
- 关键词：同源重组CRE/LOXP系统
- 重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备被引量：1
- 1995年
- 本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了４株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系ＢⅡ１Ｂ５、ＤⅡ６Ｂ９、ＭⅡ１Ｈ４和ＧＩ３Ｅ７。用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的类分别是ＩｇＭ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ。间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞上清的效价为１×１０－２～１．２５×１０－４，腹水效价为１×１０－２～１×１０－８。培养上清经ＥＬＩＳＡ鉴定，与ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α等细胞因子均无交叉反应，只与ｒＨｕＥＰＯ特异性结合。
- 杨琴邓继先程萱
- 关键词：红细胞生成素抗体单克隆抗体免疫测定
- Cre重组酶在心肌细胞特异性转基因小鼠中的功能检测
- 2005年
- 目的:检测Cre重组酶在心肌细胞特异性Cre重组酶转基因小鼠(α-MHC-Cre)中的组织分布及其在体内介导基因重组的作用。方法:将α-MHC-Cre转基因小鼠与ROSA26报告小鼠交配,利用LacZ染色对双转基因阳性子代小鼠进行检测。然后,将α-MHC-Cre小鼠与Sm ad4条件基因打靶小鼠交配,利用PCR和Southern杂交对Cre重组酶介导重组的组织特异性进行检测。结果:LacZ染色表明,Cre重组酶只在心肌细胞中特异性表达并介导ROSA位点LoxP序列间的重组。PCR和Southern结果显示Cre重组酶只在心肌细胞中特异地剔除了Sm ad4基因,进一步验证了Cre重组酶在心肌细胞中发挥介导LoxP位点重组的作用。结论:α-MHC-Cre转基因小鼠具有良好的组织特异性,只在心肌细胞中表达Cre重组酶,并能在体内成功地介导心肌细胞基因组上LoxP位点间的重组,是一种理想的研制心肌细胞特异性基因剔除小鼠的工具小鼠。
- 王剑张继帅侯宁滕艳程萱杨晓
- 关键词：心肌细胞CRE重组酶
- 小鼠β-酪蛋白基因序列调控人-tPA突变体基因在小鼠乳腺的表达被引量：3
- 2002年
- 为验证克隆的小鼠 β -酪蛋白基因序列调控外源基因表达的能力 ,将人t PA突变体基因的信号肽 -前肽编码序列用小鼠 β -酪蛋白的信号肽编码序列替换 ,人t PA突变体成熟肽cDNA融合到小鼠 β -酪蛋白基因的第 2外显子中 ,从而构建成旨在应用小鼠 β -酪蛋白基因序列调控人t PA突变体基因在小鼠乳腺中表达的载体。融合基因经显微注射至小鼠的受精卵中 ,2 85枚注射的受精卵移植到 13只受体小鼠。经PCR和Southern杂交鉴定 ,4 2只出生小鼠中有 12只为转基因阳性鼠。 7只转基因阳性鼠乳汁中表达人t PA突变体 ,最高表达水平为 3.6 5 93μg/ml,证明小鼠 β-酪蛋白基因序列能够调控人t PA突变体基因在转基因小鼠的乳汁中表达出具有生物活性的人t PA突变体 ,为进一步制备人t PA突变体基因敲入小鼠模型提供了理论和实验依据。
- 林福玉程萱陈红星谭晓红程竞杨晓邓继先黄培堂
- 关键词：小鼠Β-酪蛋白突变体基因乳腺
- 遗传修饰小鼠胚胎干细胞种系嵌合体小鼠的研制被引量：4
- 2003年
- 利用显微注射的方法,分别将三株不同类型的经过遗传修饰的中靶ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,通过胚胎移植将注射后的囊胚引入受体小鼠子宫中,分别获得了不同整合度的嵌合体小鼠,将高嵌合度小鼠与C57BL/6J小鼠杂交,对这些仔鼠进行PCR及Southern鉴定的结果表明,三株修饰后的ES细胞均能整合入生殖系,得到了棕褐色子代鼠,表明获得了种系嵌合体小鼠。
- 程萱周江谭晓红程竞杨晓
- 关键词：遗传修饰胚胎干细胞显微注射
