俞继华
- 作品数：14 被引量：15H指数：2
- 供职机构：西南交通大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 植物磷酸乙醇胺甲基转移酶的生物信息学分析被引量：2
- 2013年
- 运用生物信息学的方法,对已在Genbank数据库中注册的菠菜、甜菜、拟南芥、陆地棉和辽宁碱蓬等中磷酸胆碱合成的关键酶磷酸乙醇胺甲基转移酶(PEAMT)的氨基酸序列进行分析。结果显示:植物PEAMT属于稳定蛋白质,含有较丰富的赖氨酸和亮氨酸;不同植物PEAMT的氨基酸序列具有较高的同源性,含有与SAM结合的保守结合域及Tyr-His氨基酸对;植物PEAMT属于胞质酶,不与膜结合;分子进化研究表明PEAMT可作为植物遗传分化和分子进化研究的重要依据;氨基酸序列中不存在信号肽;分子中不存在跨膜结构域,可能受蛋白激酶C的磷酸化;无规则卷曲是多肽链中的主要结构元件;蛋白质保守区域包含两个AdoMet-MTase区域,属于典型的SAM依赖性甲基转移酶功能结构域。本研究还初步构建了菠菜PEAMT的三维模型,能够认识植物中PEAMT的特异性及催化分子机制,并为通过分子改造创造出具有更强抗逆效能的PEAMT提供理论参考。
- 冯斌俞继华张宝宋志磊陈劲松廖海周嘉裕
- 关键词：生物信息学磷酸胆碱S-腺苷甲硫氨酸
- 川芎咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2016年
- 克隆川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)咖啡酸-O-甲基转移酶(COMT)基因并做序列分析。采用RT-PCR方法,以新鲜的川芎嫩叶c DNA为模板,克隆出川芎COMT基因的c DNA序列。此基因全长1328 bp,编码360个氨基酸。将得到的序列提交Gen Bank,序列号为KU942388。此川芎COMT具有植物O-甲基转移酶家族特征性的功能结构域,与中粒咖啡、牵牛花COMT的氨基酸序列同源性分别为70%、69%,推测其能够催化咖啡酸的氧甲基化反应。该川芎COMT基因的成功克隆为下一步活性验证及利用生物技术来生产阿魏酸奠定坚实基础。
- 朱建全向缅李洋洋俞继华张赶王万军廖海周嘉裕
- 关键词：川芎克隆
- 决明胰蛋白酶抑制剂1活性相关残基的定点突变与抑制活性分析被引量：2
- 2016年
- 决明胰蛋白酶抑制剂1(Co TI1)属于Kunitz胰蛋白酶抑制剂家族成员,通过序列比对预测Arg86、Leu84和Thr88等3个氨基酸残基可能是Co TI1发挥抑制作用的关键残基。通过定点突变的方法将Arg86、Leu84与Thr88残基分别突变为Asp残基,并考察各突变体对胰蛋白酶及棉铃虫等鳞翅目害虫消化酶的抑制作用。与Co TI1相比,Co TI1^(R86D)、CoTI1^(T88D)与CoTI1^(L84D)突变体对胰蛋白酶的抑制活性分别下降了93%、64%与59%;对棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾等3种鳞翅目害虫消化酶的平均抑制活性分别下降了88.7%、57%与60.7%。以上结果表明Arg86、Leu84与Thr88是Co TI1发挥抑制作用的关键残基,这为Co TI1的抑制分子机制及抗虫研究提供了重要的理论依据。
- 向缅朱建全俞继华李洋洋李娟娟刘祖碧王万军廖海周嘉裕
- 关键词：决明胰蛋白酶抑制剂定点突变
- 决明胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其原核表达载体构建被引量：1
- 2015年
- [目的]克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体。[方法]从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序列,并将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/COTI。[结果]决明胰蛋白酶抑制剂基因核苷酸长度为630bp,编码一条长度为209个氨基酸的多肽。决明胰蛋白酶抑制剂与不同植物来源的Kunitz蛋白酶抑制剂有高度的同源性,表明其属于Kunitz蛋白酶抑制剂家族成员。所获重组质粒pET-28a(+)/COTI经过双酶切鉴定,其含有目的片段,且重组质粒构建正确。[结论]克隆了决明胰蛋白酶抑制剂的全长cDNA序列,并成功构建了含有该基因的原核表达载体,这为该基因的进一步表达及功能鉴定奠定了基础。
- 李洋洋阿尔古丽俞继华吴鹏飞许维嘉李娟娟刘祖碧王万军周嘉裕谭睿廖海
- 关键词：决明克隆原核表达载体
- 决明不同组织莽草酸激酶基因的表达模式与蒽醌含量分析被引量：2
- 2016年
- 分析莽草酸激酶基因在决明(Cassia obtusifolia L.)不同组织中的表达模式,同时测定不同组织中总蒽醌的含量,为研究莽草酸激酶在决明蒽醌生物合成中的作用提供理论依据。提取决明种子、愈伤组织与成熟叶等10个不同组织的总RNA,反转录合成c DNA,采用荧光定量PCR检测莽草酸激酶基因在不同组织的表达情况。同时,采用超声波强化法提取决明不同组织的总蒽醌,通过分光光度法测定其含量。莽草酸激酶基因在决明的根、愈伤组织与子叶中的表达量较高,在种子、果荚与茎中表达量较低。决明的种子、果荚、花及根中蒽醌类化合物含量较高,而成熟叶和胚轴则不含。决明中蒽醌的生物合成涉及多个组织,其生物合成的早期阶段(包括莽草酸激酶催化的反应)主要发生在根与子叶等组织,形成的中间产物运输到种子等组织中,完成生物合成的后期阶段并积累蒽醌终产物,为合理利用决明不同药用部位提供理论依据。
- 李洋洋李卓彬俞继华李娟娟王万军周嘉裕廖海
- 关键词：决明总蒽醌
- 川芎α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因(LASI)的克隆、表达与分析
- 川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)为四川省著名的道地药材，具有祛风止痛、活血行气的功效，其指标成分为川芎嗪和阿魏酸，常用于治疗心脑血管、呼吸系统、泌尿系统等方面的疾病。目前已从多种植物中分离得到...
- 俞继华
- 关键词：川芎Α-淀粉酶枯草杆菌蛋白酶原核表达酶活性
- 文献传递
- 决明丙二酰CoA:ACP转酰基酶基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2015年
- [目的]克隆决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)基因并做序列分析。[方法]采用RACE法从c DNA中扩增出决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)的CDS全长序列,推测出MCAT基因编码的氨基酸序列并进行序列分析。[结果]分析结果显示MCAT的CDS全长1 253bp,编码405个氨基酸。通过序列比对分析发现决明MCAT蛋白包含一个酰基转移酶超家族结构域,并且发现了一段高度保守的七肽模序。[结论]获得了决明MCAT的CDS全长,其编码的蛋白可能催化丙二酰Co A的转酰基反应,为决明脂肪酸的合成通路的阐明以及后期的决明脂肪酸的基因工程研究打下了坚实的基础。
- 张赶刘祖碧李娟娟俞继华李洋洋廖海周嘉裕谭睿
- 关键词：决明
- 川芎α‑淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因及表达产物的纯化方法
- 本发明公开了一种川芎α‑淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因SEQ ID NO.1及其编码的蛋白SEQ ID NO.2，以及表达产物的纯化方法。与水稻(Oryza sativa(L.)Genbank:P29421)α‑淀粉酶...
- 廖海周嘉裕俞继华李洋洋向缅朱建全
- 一种酶法合成阿魏酸的方法
- 本发明公开了一种酶法合成阿魏酸的方法，将S-腺苷甲硫氨酸(SAM)上的甲基转移至咖啡酸上，最终形成产物阿魏酸，包括以下步骤:a)通过大肠杆菌的发酵高效表达川芎咖啡酸-O甲基转移酶COMT，通过离心收集菌体，用Tris-H...
- 廖海周嘉裕张赶李娟娟俞继华李洋洋黄新河
- 文献传递
- 决明胰蛋白酶抑制剂2基因的克隆与不同胁迫条件下的表达模式
- 2017年
- 克隆决明胰蛋白酶抑制剂2(Cassia obtusifolia trypsin inhibitor 2,COTI2)基因序列,并考察其在不同环境下的表达模式。利用RACE方法克隆了COTI2基因的部分序列,利用定量PCR考察其在盐、低温、干旱及ABA处理下的表达模式。从决明种子c DNA中克隆出了长度为565 bp的基因片段,该片段具有典型的Kunitz蛋白酶抑制剂基因家族的结构域。将得到的序列提交GenBank,序列号为ku745416。对获得的COTI2的氨基酸序列进行比较分析,发现COTI2的P1位残基为Ser38。COTI2与其它植物KTI的氨基酸序列的进化分析表明,其与杨树的同源性较近。定量PCR结果表明COTI2在不同环境下具有不同的表达模式。这为研究COTI2基因的功能及分子调控机制奠定了基础。
- 丁超琼李娟娟李洋洋俞继华王万军廖海周嘉裕
- 关键词：决明克隆
