廖海
- 作品数：116 被引量：312H指数：10
- 供职机构：西南交通大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省应用基础研究计划项目中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 决明胰蛋白酶抑制剂1活性相关残基的定点突变与抑制活性分析被引量：1
- 2016年
- 决明胰蛋白酶抑制剂1(Co TI1)属于Kunitz胰蛋白酶抑制剂家族成员,通过序列比对预测Arg86、Leu84和Thr88等3个氨基酸残基可能是Co TI1发挥抑制作用的关键残基。通过定点突变的方法将Arg86、Leu84与Thr88残基分别突变为Asp残基,并考察各突变体对胰蛋白酶及棉铃虫等鳞翅目害虫消化酶的抑制作用。与Co TI1相比,Co TI1^(R86D)、CoTI1^(T88D)与CoTI1^(L84D)突变体对胰蛋白酶的抑制活性分别下降了93%、64%与59%;对棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾等3种鳞翅目害虫消化酶的平均抑制活性分别下降了88.7%、57%与60.7%。以上结果表明Arg86、Leu84与Thr88是Co TI1发挥抑制作用的关键残基,这为Co TI1的抑制分子机制及抗虫研究提供了重要的理论依据。
- 向缅朱建全俞继华李洋洋李娟娟刘祖碧王万军廖海周嘉裕
- 关键词：决明胰蛋白酶抑制剂定点突变
- 决明子中丝氨酸蛋白酶抑制剂的分析被引量：3
- 2006年
- 目的确定决明子中丝氨酸蛋白酶抑制剂的种类和数量。方法材料经过明胶-PAGE和明胶-SDS-PAGE后,分别用胰蛋白酶进行酶解,考马斯亮兰染色。结果电泳胶板经胰凝乳蛋白酶处理后,观察到一条清晰的蛋白染色带。结论决明子中含有一种胰凝乳蛋白酶抑制剂,该抑制剂有较强的抗还原能力,但在强酸环境中易发生变性。
- 廖海任炜周嘉裕康庄杜林方
- 关键词：决明子丝氨酸蛋白酶抑制剂抗肿瘤
- 暗紫贝母IPI基因的克隆与功能分析
- 2023年
- 从暗紫贝母(Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia.)中克隆异戊烯焦磷酸异构酶(isopentenyl-diphosphate delta isomerase,IPI)基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),命名为FuIPI,并开展生物信息学及功能分析。结果表明,FuIPI基因的ORF长度为825 bp,编码蛋白包括274个氨基酸残基,相对分子质量约为31 kD,理论等电点为5.61。序列比对表明FuIPI具有IPI家族特有的保守结构域及参与催化的关键氨基酸残基。系统进化分析表明FuIPI与姜、小果野蕉等植物的IPI具有较近的亲缘关系。实时荧光定量PCR分析表明,FuIPI在暗紫贝母不同组织中均有分布,但在叶中表达量最高,其次是茎、鳞茎,花中最低。随后,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,过量表达FuIPI基因,获得的FuIPI重组蛋白能有效转化异戊烯基二磷酸(isopentenyl diphosphate,IPP)形成二甲基烯丙基二磷酸(dimethylallyl pyrophosphate,DMAPP)。本研究为进一步探究FuIPI在生物碱类物质生物合成中的分子作用奠定了理论基础。
- 陈娇宋思敏唐婕辛锦秀张倩赵虹杰陈欣周嘉裕廖海
- 关键词：暗紫贝母基因克隆异源表达体外活性
- 川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶的同源建模与分子模拟对接被引量：4
- 2015年
- [目的]分析川芎咖啡酸-3-O甲基转移酶(Caffeic acid-3-Omethyltransferase,COMT)序列特征、蛋白结构和活性位点。[方法]以紫花苜蓿中COMT的晶体结构为模板,利用同源建模构建川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)COMT的三维模型。[结果]经过动力学优化后,川芎COMT的三维模型与紫花苜蓿COMT的结构极为相似,主要由α-螺旋和β-折叠构成,其中α-螺旋占37.26%、β-折叠占10.41%、无规卷曲占52.33%。川芎COMT含有两个重要的结构域:咖啡酸结合域与S-腺苷甲硫氨酸结合域,主要通过氢键与范德华力结合,其中咖啡酸与川芎COMT分子中的Asp208和Gly210形成氢键,S-腺苷甲硫氨酸与川芎COMT分子中的Ser186、Thr213、Ala215、Thr216、Trp268及Asp272等残基形成氢键。[结论]该文得到川芎COMT的序列特征、蛋白结构和活性位点,为该类COMT的催化机理研究和分子工程改造奠定基础。
- 宋涛冯斌李娟娟唐迪王万军廖海周嘉裕谭睿
- 关键词：同源建模川芎
- 川芎甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及序列分析被引量：9
- 2011年
- 以川芎(Liqusticum churning Franch Hort)为材料,采用RT-PCR和RACE方法,从新鲜的嫩叶中克隆出甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)基因的cDNA序列。克隆到的cDNA序列全长为2 211 bp,编码一条由508个氨基酸残基组成的多肽,其核酸序列与人参的BADH基因的cDNA序列同源性为86%,对应编码氨基酸序列同源性为91%。将得到的序列提交GenBank,序列号为HM352764。与其他植物BADH的氨基酸序列比对,川芎BADH具有相同功能区域,包括N-端信号肽、底物结合及酶催化位点,因而可以参与甜菜碱的合成反应。对川芎BADH与其他植物BADH的氨基酸序列的进化分析表明,其与五加科人参的同源性较近。
- 周嘉裕廖海
- 关键词：川芎甜菜碱醛脱氢酶克隆
- 太白贝母的Indel标记引物及其应用
- 本发明提供一种快速鉴定太白贝母的Indel标记引物、方法及用途，属中药材来源品种鉴定技术领域。本发明首次发现以该Indel标记引物为核心的PCR方法能够特异性鉴定太白贝母，仅有太白贝母在302bp位置显示阳性结果，其它贝...
- 廖海周嘉裕张田王威威蒋瑞平
- 文献传递
- 一种川芎咖啡酸-O-甲基转移酶的突变体及其用途
- 本发明提供一种川芎咖啡酸‑O‑甲基转移酶突变体及其用途，属于生物工程技术领域。突变体的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；突变体的获得是基于发现318位氨基酸是影响活性的一个关键位点并用定点突变将其318位的异亮氨酸...
- 周嘉裕廖海严子成廖东颖陈安琪李秋娥
- 决明胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其原核表达载体构建被引量：1
- 2015年
- [目的]克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体。[方法]从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序列,并将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/COTI。[结果]决明胰蛋白酶抑制剂基因核苷酸长度为630bp,编码一条长度为209个氨基酸的多肽。决明胰蛋白酶抑制剂与不同植物来源的Kunitz蛋白酶抑制剂有高度的同源性,表明其属于Kunitz蛋白酶抑制剂家族成员。所获重组质粒pET-28a(+)/COTI经过双酶切鉴定,其含有目的片段,且重组质粒构建正确。[结论]克隆了决明胰蛋白酶抑制剂的全长cDNA序列,并成功构建了含有该基因的原核表达载体,这为该基因的进一步表达及功能鉴定奠定了基础。
- 李洋洋阿尔古丽俞继华吴鹏飞许维嘉李娟娟刘祖碧王万军周嘉裕谭睿廖海
- 关键词：决明克隆原核表达载体
- 决明不同组织莽草酸激酶基因的表达模式与蒽醌含量分析被引量：2
- 2016年
- 分析莽草酸激酶基因在决明(Cassia obtusifolia L.)不同组织中的表达模式,同时测定不同组织中总蒽醌的含量,为研究莽草酸激酶在决明蒽醌生物合成中的作用提供理论依据。提取决明种子、愈伤组织与成熟叶等10个不同组织的总RNA,反转录合成c DNA,采用荧光定量PCR检测莽草酸激酶基因在不同组织的表达情况。同时,采用超声波强化法提取决明不同组织的总蒽醌,通过分光光度法测定其含量。莽草酸激酶基因在决明的根、愈伤组织与子叶中的表达量较高,在种子、果荚与茎中表达量较低。决明的种子、果荚、花及根中蒽醌类化合物含量较高,而成熟叶和胚轴则不含。决明中蒽醌的生物合成涉及多个组织,其生物合成的早期阶段(包括莽草酸激酶催化的反应)主要发生在根与子叶等组织,形成的中间产物运输到种子等组织中,完成生物合成的后期阶段并积累蒽醌终产物,为合理利用决明不同药用部位提供理论依据。
- 李洋洋李卓彬俞继华李娟娟王万军周嘉裕廖海
- 关键词：决明总蒽醌
- 黄连N-甲基乌药碱-3′-羟化酶基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2008年
- 目的克隆黄连Coptischinensis N-甲基乌药碱-3′-羟化酶[(S)-N-methylcoclaurine-3′-hydroxylase]基因并做序列分析。方法采用RT-PCR方法,以新鲜的黄连嫩叶cDNA为模板,克隆出黄连N-甲基乌药碱-3′-羟化酶基因的全部序列。结果克隆到的基因(命名为CYP80B3)全长为1680bp,编码一个488个氨基酸残基组成的多肽。其氨基酸序列与日本黄连、唐松草、罂粟和花菱草的N-甲基乌药碱-3′-羟化酶的氨基酸序列同源性分别达95%、82%、70%、68%。将得到的序列提交Genbank,序列号为EF492879。通过与日本黄连的氨基酸序列比对,具有相同功能区域,因而可以参与N-甲基乌药碱的3′位羟基化反应。结论黄连N-甲基乌药碱-3′-羟化酶基因的成功克隆为黄连植物中原小檗碱型苄基异喹啉类生物碱的基因工程等研究打下了良好的基础。
- 周嘉裕彭书明雷泞菲廖海陈放
- 关键词：黄连克隆
