刘士辉
- 作品数：34 被引量：60H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 组织型纤溶酶原激活剂（t－PA）cDNA序列的测定
- 1995年
- 已经从ｍｅｌａｎｏｍａ细胞系中成功地获得了人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ，在此基础上用双脱氧终止法测定了ｔ－ＰＡｃＤＮＡ编码区全序列及３′非编码区部分序列，并发现与Ｐｅｎｎｉｃａ等发表的ｔ－ＰＡｃＤＮＡ序列相比，有两处差异，其一是第１７２５位核苷酸残基为Ｃ而非Ａ，并使此处序列与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比新产生一个ＳｔｙＩ切点，但由于差异发生在密码子第三位，没有引起编码的氨基酸变化；其二是第１７７７位核苷酸残基（终止密码子后第４位核苷酸残基）为Ｔ而非Ｇ，使与终止密码子相隔３个核苷酸残基处产生了一个新的ＴＧＡ，与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比此处的ＢｓｔＮＩ切点也消失了。
- 刘士辉黄培堂黄翠芬
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂CDNA
- 从SDS－PAGE中提纯t－PA及其抗原特性分析被引量：2
- 1995年
- 从ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中提纯ｔ－ＰＡ及其抗原特性分析陈琳，徐秀英，刘士辉，朱恒奇，黄培堂（北京军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１）组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）是一种蛋白类溶栓药。与尿激酶、链激酶相比，ｔ－ＰＡ以其与纤维蛋白有特异亲和力，能高...
- 陈琳徐秀英刘士辉朱恒奇黄培堂
- 关键词：链激酶尿激酶抗原SDS-PAGET-PA
- 纤溶系统及其异常与血栓性疾病的关系及溶栓药物研究发展方向被引量：1
- 1994年
- 纤维蛋白溶解系统与凝血系统活性的动态平衡是维持血液在血管中正常流动的基础。纤溶系统的异常,尤其是PAI-1水平的升高所致的纤溶活性的下降,是血栓性疾病的重要诱因之一。本文系统地介绍了纤溶系统的生理作用及其调节,以及它的异常在血栓性疾病发病中的作用。同时介绍了溶栓药物的现状及最新研究方向。
- 刘士辉
- 关键词：纤维蛋白血栓性疾病溶栓剂
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体FrGGI的构建、表达及特性分析被引量：5
- 1995年
- 为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAI—1抗性的新型t-PA溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术成功地构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44～Ser50置换为纤粘蛋白Ⅰ型F区间连接序列GluSerLysProGluAlaGluGlu的t-PA的组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,FrGGI在大鼠血浆中的半衰期延长了15倍,特异活性提高了40％,并获得了PAI-1抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。
- 刘士辉黄培堂赵庆国朱恒奇徐秀英陈琳黄翠芬
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体半衰期
- 鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片断的三维结构模建被引量：3
- 1996年
- 用Biosym公司开发的计算机辅助分子设计系统模建了鼠抗人纤维蛋白抗体Fv片断的三维结构。Fv是由重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vl)两个结构域组成的具有抗原结合能力的最小抗体片断。先分别模建了Vh和Vl两个结构域,然后搭建出Fv片断的整体三维结构,并对模建的结构进行了分子力学和动力学优化。对结构的合理性验证显示模建结构是合理的。本研究为鼠抗人纤维蛋白抗体Fv片断的人源化的分子设计打下了基础。
- 王国力刘士辉黄君健俞炜源黄培堂黄翠芬
- 关键词：同源模建
- 鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片段的人源化分子设计
- 1996年
- 产生免疫原性的残基都是位于蛋白表面的暴露残基,为了消除鼠抗体对人的免疫原性,利用表面再塑方法对本室克隆的鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片断进行了人源化分子设计。首先确定了鼠及人Fv表面残基,在此基础上分析了鼠与人Fv间表面残基的差异,将有差异的鼠表面残基换成人的。提出了残基最高频率人源化及最相似链人源化两种人源化方案。人源化后鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv的结构经Profile-3D验证是合理的,置换的表面残基溶液可及性未变,且未影响CDRs的结构,应不会影响与纤维蛋白的亲和力,为鼠抗体人源化实验研究奠定了基础。
- 王国力刘士辉黄君健俞炜源黄培堂黄翠芬
- 关键词：单克隆抗体人源化分子设计
- 宋内氏福氏2a双价痢疾菌株FS54-7Ⅰ相大质粒(pSS_(120)::Tn_5)上转座子Tn_5的去除
- 1990年
- 本文利用 RP_1质粒的温度敏感突变体 pMR_5::Tn_(132)的温敏特性,以及 pMR_5::Tn_(132)上所携带的转座子 Tn_(132)与宋内氏Ⅰ相大质粒 pSS_(120)::Tn_5上转座子 Tn_5两端插入序列的同源性,将 Tn_5置换成 Tn_(132),从而将 pSS_(120)::Tn_5携带的卡那霉素抗性换成了 Tn_(132)所携带的四环素抗性,进而又在 Bochner 培养基上选到了四环素敏感的突变体,得到了宋内氏Ⅰ相大质粒 pSS_(120)上无任何抗药性标记的宋内氏福氏2a 双价痢疾菌株。
- 刘士辉毛培基牟兆钦
- 关键词：痢疾杆菌
- 半衰期延长获得PAI-1抗性的t-PA突变体的构建、表达及特性分析被引量：10
- 1995年
- 用基因重组及定位突变技术成功地构建了t-PA的K1区缺失突变体t-PAdelK1、PAI-1结合位点缺失突变体t-PA del(296—302)及两者的组合突变体t-PA del(K1,296—302),并在COS-7细胞中实现三者的暂时性表达,在CHO细胞中实现了t-PA del(K1,296—302)的稳定性表达。对表达产物的生物学特性分析表明,t-PA del(296—302)及t-PA del(K1,296—302)获得了PAI-1抗性,因时t-PA del(K1,296—302)在大鼠体内的半衰期延长约5倍,而与纤维蛋白的亲和力只略有下降。因此,此组合突变体有可能成为优于野生t-PA的新型溶栓剂候选株。
- 刘士辉黄培堂黄翠芬
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体半衰期PAI-1
- 组织型纤溶酶原激活剂突变体的构建、表达及特性分析被引量：13
- 1995年
- 利用寡核苷酸诱导的定位突变技术及DNA重组技术构建了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的PAI-1结合位点Lys296～Gly302缺失的突变体de1(296～302),K1,K2区去糖基化突变体N117Q/N184Q,以及两者的组合突变体GGI,并在COS-7细胞中获得了暂时性表达,并进一步在CHO细胞中稳定表达了组合突变体GGI.在此基础上对表达产物的生物学特性进行了分析,结果显示de1(296～302)和组合突变体GGI获得了PAI-1抗性,组合突变体GGI在与纤维蛋白亲和力未受损害的同时,特异活性约提高46％,半衰期延长约1倍.此组合突变体很可能成为优于野生t-PA的新型溶栓剂候选株.
- 刘士辉黄培堂黄翠芬
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体PAI-1T-PA
- tPA K_2编码区mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响研究
- 1994年
- 序列分析中发现ｔＰＡＫ２编码区结构基因中存在一段反转重复序列，富含Ｇ、Ｃ。利用计算机预测ｔＰＡｍＲＮＡ二级结构证明ｔＰＡｍＲＮＡ在此处可以形成△Ｇｍ＝－２５．５ＫＣａｌ／ｍｏｌ的发夹结构。本研究利用定点突变技术消除了这段反转重复序列，在大肠杆菌中进行了消除前后ｔＰＡ转录和翻译水平的比较。结果表明消除之后，细菌总ＲＮＡ中ｔＰＡ特异ｍＲＮＡ含量减少，细菌表达产物中ｔＰＡ蛋白占破菌沉淀物的百分比却基本不变。提示大肠杆菌中基因编码区ｍＲＮＡ二级结构一般不构成转录的终止，但有利于ｍＲＮＡ的稳定性，对翻译表达无影响。
- 顾利群刘士辉熊凌霜黄培堂
- 关键词：TPA纤溶酶原激活剂
