朱恒奇
- 作品数：36 被引量：60H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 转录因子CTCF的克隆、表达及其抗体制备被引量：6
- 2004年
- 用RT-PCR方法从HeLa细胞总RNA中扩增转录因子CTCF的cDNA序列,克隆至pGEM-TEasy载体上。将CTCF蛋白N段的编码序列亚克隆至pET22b(+)载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用镍柱进行亲和纯化。用纯化后的CTCFN段蛋白免疫家兔,获得CTCF的多克隆抗体,进而用于细胞内CTCF蛋白的免疫印迹检测。
- 何莉朱旭东毛志勇朱恒奇黄培堂
- 关键词：转录因子抗体制备亚克隆CDNA序列总RNA
- 重组人IL-1ra在大肠杆菌中的可溶性表达
- 2004年
- 利用PCR技术从含有IL-1ra的质粒上扩增IL-1ra基因,经过序列测定后插入表达载体pTIG-Trx,并转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。经SDS-PAGE分析显示,IL-1ra表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达产物出现相对分子量大约为17000的一条新生蛋白质带,其大小与预期结果一致,经Western和ELISA分析,证明该带即为目的蛋白,SDS-PAGE显示目的蛋白全部以可溶性蛋白的形式存在。超声破碎后,上清经金属螯和层析纯化获得纯度约为98%的蛋白样品。
- 杨志新周晓巍朱恒奇徐秀英黄培堂
- 关键词：IL-1RA大肠杆菌ELISA表达质粒可溶性表达IPTG
- 重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)及其突变体的纯化被引量：9
- 2003年
- 稳定高效表达重组人组织型纤溶酶原激活剂 (rht PA)的CHO细胞株和表达组合突变体的细胞株进行了 3L转瓶培养 .将培养上清分别进行了Lys Sepharose 4B亲和层析和Zn2 + Sepharose 4B层析两步纯化 ,rht PA纯度提高了 5 34倍 ,比活达 2 5× 10 5IU mg ,产率为 73% ;突变体纯度提高了1119倍 ,比活达 5 9× 10 5IU mg ,产率为 6 9% .纯化产物SDS PAGE分析显示 ,rht PA和突变体基本都呈单一条带 ,扫描分析均达到 98%以上纯度 .rht PA和突变体在纯化系统中的行为作对照分析发现 ,突变体的构建思想在Lys Sepharose 4B亲和层析过程中有充分体现 .这两步层析组合是很好的纯化t PA及其突变体的方法 ,尤其是Lys Sepharose
- 朱恒奇徐秀英黄培堂
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体纯化
- H5N1亚型高致病性禽流感病毒NS1基因的克隆及其序列分析
- 2007年
- 目的:克隆H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因,并分析其序列特性。方法:通过RT-PCR方法克隆H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并对该基因片段进行测序,将此序列与数据库中不同时间、地点、宿主来源的H5N1亚型流感毒株NS1基因序列进行同源性比较。结果:获得了678 bp的NS1全长基因,可编码225个氨基酸;其与毒株A/chicken/Jilin/hq/2003的同源性最高,二者的核酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和99.1%。比对分析发现,该毒株NS1基因在第238-252位有15个核苷酸的缺失;进化树分析表明,它与1997年香港流行的H5N1亚型禽流感病毒毒株分别属于2个不同的分支。结论:克隆了一株H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因,并初步分析了其序列特性,为进一步研究NS1基因的功能奠定了基础。
- 张传福蒋世卫杨予涛杨志新朱恒奇赵丽霞许龙王荣于孟斌周晓巍黄培堂
- 关键词：禽流感H5N1亚型NS1基因
- t-PA突变体的构建、表达及生物学特性分析被引量：3
- 1994年
- t-PA是纤溶系统的生理性激活剂,但它在血浆中半衰期甚短及活性可被天然快速抑制剂PAI-1抑制等生理特性成为其作为临床溶栓剂的主要缺陷。为了研制新型t-PA溶栓剂,本文根据t-PA结构与功能研究的最新信息,针对延长t-PA半衰期、提高特异活性及引入PAI-1抗性等,设计并构建了8种t-PA突变体。进而在COS-7及CHO细胞中进行了表达研究,并对突变体表达产物的特性进行了分析和评价。
- 刘士辉徐秀英陈琳朱恒奇黄培堂黄翠芬
- 关键词：T-PA溶栓剂纤溶系统生理特性候选株非翻译区
- 组织型纤溶酶原激活剂突变体细胞t—PA基因拷贝数测定及分析被引量：1
- 1998年
- 组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）溶栓特异性高，但半衰期短。本组构建了增强纤维蛋白亲合力和延长半衰期的t—PA突变体表达细胞株。测定工程细胞株基因拷贝数是细胞生物学特性鉴定的一个方面。我们采用狭缝杂交法和SouthernBlot法对该细胞株t—PA基因进行了拷贝数测定，结果为30—60个拷贝。
- 陈琳徐秀英刘士辉朱恒奇黄培堂
- 关键词：突变体拷贝数组织型
- 从SDS-PAGE中提纯t-PA及其抗原特性分析
- 1995年
- 为获纯度较高的t-PA抗原,对本组构建的表达t-PA的CHO工程细胞的无血清培养上清进行SDS-PAGE,铜染色,从中提纯少量抗原t-PA,获得高纯度的产物,蛋白回收率达88％。中和抑制实验表明,回收的目的蛋白能完全被t-PA抗血清所抑制。
- 陈琳徐秀英刘士辉朱恒奇黄培堂
- 关键词：T-PASDS-PAGE抗原
- GGNBP1抗体制备及小鼠组织表达谱分析
- 2005年
- 体外实验研究表明配子生成素结合蛋白1(GGNBP1)可能与GGN1相互作用形成睾丸特异性复合物,在精子生成过程中发挥作用。从小鼠睾丸总RNA中反转录扩增Ggnbp1全长cDNA,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达GGNBP1,经聚丙烯酰胺凝胶纯化后免疫新西兰白兔,制备兔多抗血清。镍离子金属螯合柱纯化表达的GGNBP1蛋白,与NHS活化基团交联,制备GGNBP1抗体亲和层析柱,纯化GGNBP1多抗。在293FT细胞中瞬时表达Myc-GGNBP1融合蛋白,用于Myc单抗验证GGNBP1抗体特异性,结果证明获得了特异性的GGNBP1抗体。分别制备小鼠脑、心、肺、肝、脾、肾、肌肉、卵巢、睾丸和子宫组织匀浆,用GGNBP1抗体进行Western印迹分析,结果仅在睾丸组织匀浆中检测到GGNBP1特异性条带,证明GGNBP1是睾丸特异性表达蛋白。
- 赵庆国周煜张进朱恒奇曹志国卢柏松黄培堂
- 关键词：多克隆抗体表达谱睾丸小鼠
- 小鼠FANCL抗体制备及组织表达谱分析(英文)被引量：1
- 2006年
- FANCL是一个范可尼氏贫血新蛋白,它作为泛素E3连接酶催化FANCD2的单一泛素化,在修复DNA损伤、 维持染色体稳定的FA途径中起着关键作用。胚胎期FANCL与小鼠原始生殖细胞增殖密切相关,成年睾丸中FANCL 与几个生殖细胞特异性蛋白形成一个睾丸特异网络,可能参与影响精子的生成。采用RT-PCR方法从小鼠总RNA 中扩增克隆FancL全长cDNA片段,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达了6His-FANCL蛋白,用表达蛋白作为抗原 免疫新西兰白兔制备了抗FANCL多抗血清。采用镍离子金属螯合柱纯化6His-FANCL蛋白后,通过与活性基团-NHS 交联制备了FANCL抗原柱,亲和纯化了FANCL多抗。为了验证抗体活性和特异性,在HEK 293T细胞中瞬时表 达了HA-FANCL融合蛋白,分别用HA单抗和纯化多抗进行Western印迹分析,结果表明获得了特异性的FANCL 抗体。为了观察FANCL在组织中的表达谱,制备了多种小鼠组织匀浆蛋白,使用纯化的FANCL多抗进行Western 印迹分析,在脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸、卵巢、子宫和肌肉组织中都检测到FANCL蛋白的表达,说明FANCL 在小鼠组织中是广泛表达的,这与其是DNA修复复合物中的重要成员相一致。
- 赵庆国周煜朱恒奇卢柏松黄培堂
- 关键词：抗体表达谱
- 用表面等离子体共振技术筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白被引量：2
- 2009年
- 目的:筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白。方法:表达禽流感病毒基质蛋白M1,经Ni2+柱亲和层析纯化,用表面等离子体共振(SPR)技术捕获BHK-21细胞裂解液中与M1相互作用的细胞蛋白,并进行质谱分析。结果:获得了纯度在85%以上的基质蛋白M1,并利用此蛋白捕获到宿主细胞肌球蛋白重链6。结论:肌球蛋白重链6与禽流感病毒基质蛋白M1可能存在体外相互作用。
- 张吉贵杨志新许龙朱恒奇李郁周晓巍黄培堂
- 关键词：禽流感病毒表面等离子体共振
