孙少飞
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：天津医科大学代谢病医院内分泌研究所更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 重组蛋白TAT-NLS-Nkx6.2在大肠杆菌的表达纯化及活性测定
- 2013年
- 目的:构建重组基因TAT-NLS-Nkx6.2的原核表达载体,获得重组TN-Nkx6.2蛋白,并验证其生物学活性。方法:该实验先将人类免疫缺陷病毒HIV-1的反式激活因子TAT、核定位信号NLS、Nkx6.2基因片段连接合成目的基因TAT-NLS-Nkx6.2。之后构建重组质粒pET-28a-TNNkx6.2并将其转化入E.coli DH5α中克隆,再转化至E.coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,经组氨酸Ni2+亲和层析纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE及Western blot鉴定融合蛋白,荧光免疫组化染色观察TN-Nkx6.2在小鼠脑组织分布。结果:成功表达并获得纯度90%以上的TN-Nkx6.2蛋白,经Western Blot鉴定,TN-Nkx6.2有良好的免疫原性和免疫反应性荧光免疫组化染色证明TNNkx6.2与小鼠大脑细胞结合并内化进入胞浆及胞核。结论:获得的融合蛋白TN-Nkx6.2具有生物学活性,并能穿过血脑屏障与小鼠大脑细胞结合,并内化进入胞核和胞浆,为深入探讨同源盒基因Nkx6.2在甲状腺减低模型的分子机制研究奠定了物质基础。
- 孙少飞汪蓓蕾袁婷张斌张欣郭刚张瑞
- 关键词：重组蛋白蛋白纯化活性检测
