孟艳玲
- 作品数：56 被引量：126H指数：6
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学经济管理更多>>
- 重组抗HER2 ScFv／tBid基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用
- 2006年
- 目的:构建重组抗HER2 ScFv／tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。方法:将重组抗HER2 ScFv／tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT- PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。结果:转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv／tBid表达后有促凋亡作用。结论:重组抗HER2 ScFv／tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。
- 王芳王立锋裘秀春许彦鸣鲍炜孟艳玲王成济范清宇杨安钢
- 前列腺特异性抗原启动子调控促凋亡基因caspase-7载体的构建及其对前列腺癌细胞的特异性杀伤作用被引量：1
- 2003年
- 目的 :构建前列腺特异性抗原启动子 (PSAP)调控的促凋亡基因caspase 7表达载体并观察其对前列腺癌细胞的促凋亡作用 .方法 :提取基因组DNA ,通过PCR法获得前列腺特异性抗原启动子 (PSAP)基因 ,利用基因重组方法以PSAP替换掉 pCDNA3真核表达载体中的 pCMV启动子 ,构建PSAP pCDNA3载体 .测序正确后 ,将PSAP分别替换绿色荧光蛋白载体pIRES2 EGFP和克隆入带有效应型caspase 7基因的绿色荧光蛋白载体 pIRES2 EGFP Csp7中的pCMV启动子片段 ,分别获得由PSAP启动子调控的绿色荧光蛋白载体和带有效应型Caspase 7基因的真核表达载体PSAP pIRES2 EGFP Csp7.利用脂质体转染法将该载体分别转染至PC 3m(前列腺癌 )、Hep2 (喉癌 )及MC3T3 (正常成纤维 )细胞中 ,通过荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白表达及细胞形态变化 ,免疫组化检测细胞中效应型caspase 7蛋白的表达状况 ,细胞计数观察转染不同表达载体后各类细胞生长变化 .结果 :经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确 .转染PSAP pIRES2 EGFP Csp7载体后 ,①在PC 3m细胞中可观察到绿色荧光蛋白的表达 ,并可检测到效应型Caspase 7蛋白表达 ,而在Hep2及MC3T3细胞中未观测到绿色荧光 ,②荧光显微镜下可见前列腺癌PC 3m细胞生长受到抑制并出现凋亡细胞形态 。
- 张更王禾张波于翠娟武国军秦卫军孟艳玲王成济杨安钢
- 关键词：脱噬作用
- ImmunoAIF△1-480融合蛋白对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用被引量：2
- 2008年
- 目的:观察免疫促凋亡分子ImmunoAIF△1-480对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用。方法:利用PCR的方法将九聚精氨酸编码序列(R9)与AIFC-末端结构域编码区重组,然后将R9-AIF△1-480基因与pCMV-e23sFv载体重组,构建免疫促凋亡分子ImmunoAIF△1-480真核表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,经G418筛选,建立稳定转染的细胞株,通过RT-PCR、Westernblot、流式细胞术(FCM)等方法检测重组基因在转染细胞中的表达及其对HER2阳性肿瘤细胞的特异性杀伤活性。结果:经过酶切鉴定与测序证实,带有Im-munoAIF△1-480基因的真核表达载体构建成功,经RT-PCR、Westernblot可检测到培养上清中免疫促凋亡基因的表达,用FCM检测发现融合蛋白ImmunoAIF△1-480对HER2阳性肿瘤细胞SGC-7901和SKBR-3有明显的促凋亡活性,而对不表达HER2分子的ECV-304细胞几乎没有影响。结论:Immuno-AIF△1-480可以特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞。
- 韩涛张勇孙书明任君琳李伟郭张燕孟艳玲杨安钢
- 关键词：凋亡诱导因子细胞凋亡
- 重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X-gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×109PFU/m l。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的HEK293细胞核内含晶格状结构的腺病毒包函体。斑点杂交提示重组病毒为复制缺陷型,其基因转移百分率和感染强度和感染时间有一定的相关性。结论:成功构建了表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。
- 裘秀春许彦鸣马保安周勇单乐群杨彤涛于翠娟孟艳玲杨安钢范清宇
- 关键词：腺病毒表达载体LACZ
- MDA-7/IL-24真核表达载体的构建和重组腺病毒的制备及其对肝癌细胞生长抑制作用的研究被引量：3
- 2011年
- 目的:构建含有MDA-7基因的的真核表达载体并制备重组腺病毒,转染/感染肝癌细胞后,观察其对细胞增殖的影响。方法:构建MDA-7的真核表达载体,将表达质粒转染肝癌细胞,利用平板克隆形成实验观察MDA-7分子对肿瘤细胞系克隆形成能力的影响。利用Adeasy-1腺病毒重组系统构建、包装并扩增含有MDA-7基因的重组腺病毒。利用MTT实验检测Ad-MDA-7对肿瘤细胞增殖的影响。结果:成功构建了MDA-7真核表达载体,利用平板克隆形成实验证实其可抑制肝癌细胞的克隆形成能力。成功地构建并包装了含有MDA-7基因的重组腺病毒,利用MTT实验证明其可抑制肝癌细胞的增殖。结论:MDA-7对肝癌细胞的增殖具有显著的抑制作用,为进一步研究其在肝癌细胞中的功能提供了重要的实验依据。
- 张翔孟艳玲王磊赵晶闫博陈锐张瑞杨安钢
- 关键词：肝癌腺病毒
- 人抗HBsAg单链抗体-Tat融合基因的构建、表达及表达产物的活性鉴定
- 2005年
- 目的:构建人抗HBsAg单链抗体Tat蛋白转导结构域(ScFvTat)融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并分析ScFvTat融合蛋白的活性及内化情况.方法:设计引物扩增人抗HBsAg单链抗体基因,克隆入含有蛋白转导结构域Tat序列的原核表达载体pTATHA,在大肠杆菌BL2l(DE3)LysS内诱导融合蛋白表达.表达产物用SDSPAGE及Westernblot鉴定,用亲和层析柱纯化.间接ELISA和ELISA竞争抑制实验分析ScFvTat融合蛋白的亲和活性,将纯化蛋白与HBsAg阳性或阴性肝癌细胞共孵育后,免疫细胞化学染色分析ScFvTat融合蛋白的结合及内化情况.结果:成功地构建了人抗HBsAg单链抗体Tat融合蛋白的原核表达载体,在IPTG诱导下获得了表达,表达的ScFvTat融合蛋白具有与HBsAg结合的活性,并且能够特异性内化入HBsAg阳性肝癌细胞.结论:单链抗体与Tat蛋白转导结构域融合后,实现了ScFvTat融合蛋白的特异性内化,为该单链抗体的进一步应用奠定了基础.
- 孟艳玲温伟红薛茜贾林涛鲍炜刘家云任君琳薛采芳李英辉王成济杨安钢
- 关键词：单链抗体内化
- 抑癌基因Fhit重组腺病毒的构建表达及其在结肠癌细胞中的生物学功能被引量：6
- 2010年
- 目的:构建携带抑癌基因Fhit的重组腺病毒并通过其研究Fhit蛋白对结直肠癌细胞增殖能力的影响。方法:利用PCR方法从人胎肝文库中克隆Fhit基因片段,Fhit基因PCR产物连入T载体构建重组质粒pMD18T-Fhit。测序正确后,将基因片段导入ptrack-CMV穿梭质粒中,构建重组穿梭载体ptrack-CMV-Fhit。将经PmeⅠ单酶切线性化的ptrack-CMV-Fhit和骨架腺病毒质粒pAdEasy-1共转BJ5183大肠杆菌,使ptrack-CMV-Fhit和pAdEasy-1发生同源重组。经PacI酶切鉴定正确后,将重组腺病毒质粒转染293A细胞获得表达Fhit蛋白的重组腺病毒rAd-Fhit,将获得的重组腺病毒感染结肠癌细胞,采用蛋白印迹法检测外源Fhit蛋白的表达,并进一步观察其对细胞增殖能力的影响。结果:成功构建了携带有Fhit基因的重组腺病毒,且能够在结肠癌细胞中成功表达Fhit蛋白。在结肠癌细胞中,Fhit蛋白明显减弱了结肠癌细胞的增殖能力。结论:在结肠癌细胞中,Fhit基因可能扮演抑癌基因的角色,而表达Fhit的重组腺病毒很可能成为一种结肠癌生物治疗的新策略。
- 余桂戎张瑞孟艳玲王磊高飞郭旭赵晶王涛杨安钢
- 关键词：FHIT重组腺病毒结肠癌
- 针对HBVx基因的siRNA重组腺病毒的制备及其对HBVx基因表达的抑制作用被引量：1
- 2007年
- 目的:构建针对乙型肝炎病毒x基因(HBx基因)的小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒表达载体,并在能表达HBx基因的人肝癌细胞株HepG2中观察其对HBx基因表达的抑制作用.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-HBx与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染能表达HBx基因人肝癌细胞株HepG2,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western Blot方法检测细胞中HBx基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对HBx基因的siRNA重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western Blot方法证实,在HepG2细胞中,HBx基因在mRNA和蛋白水平均有降低.结论:腺病毒介导的针对HBx基因的siRNA在体外能够高效、特异地抑制HBx基因的表达.
- 秦炜炜刘家云张瑞王涛王凯孟艳玲杨安钢
- 关键词：RNA干扰腺病毒
- TRBP及其截短体真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建TRBP及其截短体真核表达载体,并检测其在HeLa细胞中的表达。方法:设计引物扩增TRBP全长及其截短体TAB、TAC、TBC基因序列,然后将各基因片段克隆入真核表达载体pFlag-CMV4。用脂质体法转染HeLa细胞,经Western blot方法检测目的基因在转染细胞中的表达。结果:经过酶切鉴定与测序证实,TRBP全长及其截短体TAB、TBC、TAC基因真核表达载体构建成功,经Western blot可检测转染细胞中各基因的表达。结论:成功构建了TRBP全长基因及其截短体TAB、TAC和TBC基因真核表达载体,在转染细胞中可以检测到目的基因的表达。
- 韩涛张勇孙书明孟艳玲李伟郭张燕杨安钢
- 关键词：RISCMIRNA真核表达
- 变形链球菌耐氟菌株、远缘链球菌耐氟菌株与亲代菌株基因组AP-PCR的比较被引量：5
- 2004年
- 目的 :利用随机引物聚合酶链反应 ( AP-PCR)技术 ,对变形链球菌、远缘链球菌和耐氟菌株的基因组进行比较 ,判定变形链球菌耐氟突变、远缘链球菌耐氟突变后 ,遗传型是否发生改变。方法 :采用 AP-PCR技术 ,经多次实验自行确立 AP-PCR反应条件 ,对变形链球菌、远缘链球菌及耐氟菌株的基因组进行比较。结果 :变形链球菌耐氟菌株、远缘链球菌耐氟菌株的基因组已发生改变。结论 :变形链球菌耐氟突变、远缘链球菌耐氟突变后 ,已具有自身的遗传特性。
- 朱怡玲吴补领孟艳玲苏凌云王敬
- 关键词：变形链球菌远缘链球菌
