张美红
- 作品数：10 被引量：22H指数：3
- 供职机构：广东医学院基础医学院生物化学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目湛江市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 条件性RNA干扰的原理和方法被引量：1
- 2006年
- RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是通过抑制转录后水平的基因表达而诱导功能缺失表型的有力工具。由于传统RNAi方法不能对小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)或短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)的表达进行调控,在对细胞生存、细胞周期调控和细胞发育起重要作用的基因进行功能分析时受到一定限制。利用药物诱导系统对启动子进行修饰、利用Cre-LoxP系统对启动子或shRNA进行修饰而构建的条件性RNAi系统中,shRNA可根据研究者的需要在特定的时间和空间表达,克服了传统RNAi方法的局限,显著拓展了RNAi技术在功能基因组学和基因治疗等方面的应用范围。
- 张美红周克元
- 关键词：RNAI
- bi-1短发夹状RNA重组真核表达质粒对鼻咽癌和卵巢癌细胞增殖的影响被引量：5
- 2008年
- 目的以真核表达质粒pmU6为基础,针对bi-1基因构建在细胞内表达短发夹状RNA(shR-NA)的质粒载体,并观察它们对CNE-2Z、CNE-1、HO8910PM、HO8910细胞株生长增殖的影响。方法人工合成bi-1寡核苷酸链,退火、定向克隆入pmU6载体中产生重组质粒,将重组质粒转染到细胞中,MTT比色法观察转染试剂及质粒载体对细胞生长增殖的影响。结果与未处理组相比,bi-1shR-NA对CNE-2Z、CNE-1、HO8910PM细胞株的生长增殖有明显的抑制作用,而对HO8910细胞株的生长增殖无明显抑制作用。结论重组质粒能在细胞内表达shRNA,产生RNA干扰(RNA interference,RNAi)效应并特异性抑制靶细胞的生长增殖,为质粒介导的RNAi技术应用于鼻咽癌和卵巢癌的基因治疗提供一定的理论依据。
- 张美红李祥勇张月飞蔡康荣周克元
- 关键词：RNAI基因转染
- 进化中保守的凋亡抑制因子Bax inhibitor-1被引量：7
- 2007年
- 张美红周克元
- 关键词：细胞凋亡BAXBCL-2
- 利用RNA干扰沉默Bax inhibitor-1(bi-1)基因对卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910PM凋亡的影响
- 本文探讨利用 RNA 干扰(RNAi)技术阻抑 bi-1基因的表达,对卵巢浆液性囊腺癌细胞凋亡的影响。方法：借助网上 siRNA 设计工具,寻找 bi-1基因编码序列(CDS)中4个可能的干扰位点,人工合成正反义脱氧寡核...
- 张美红李祥勇张月飞周克元
- 关键词：凋亡
- 文献传递
- BI-1抑凋亡基因siRNA表达质粒的构建和鉴定
- ＜正＞大量研究表明,肿瘤细胞之所以出现永生化,其中一个很重要的原因是调节细胞凋亡的一系列重要基因发生了异常。其中,Bax inhibitor-1（BI-1）是近年发现的一种凋亡抑制因子,它是受Bcl-2和Bax调控的细胞...
- 周克元张美红吴斌华
- 文献传递
- 靶基因Bi-1RNAi重组慢病毒载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的构建靶向人Bax Inhibitor-1(Bi-1)基因的shRNA慢病毒重组载体。方法借助siRNA设计工具,并结合文献资料选取Bi-1基因编码序列中有效的干扰靶点,根据连接载体中的酶切位点自行设计并人工合成干扰靶点的一对反义脱氧寡核苷酸链,先定向克隆到pU6载体(pU6-Bi-1-shRNA),再经双酶切后克隆到慢病毒包装质粒LunIG,得到靶向Bi-1基因沉默的慢病毒包装重组质粒LunIG-Bi-1。重组质粒经PCR法进行初筛后,再通过双酶切电泳和目的基因沉默效果的检测保证插入序列的正确性。结果靶向沉默Bi-1基因的shRNA序列成功插入到慢病毒包装质粒LunIG中。结论靶向Bi-1基因沉默的慢病毒shRNA包装重组质粒构建成功。
- 李祥勇张美红林观平周克元
- 关键词：基因沉默RNAI慢病毒载体
- 靶向人Bax inhibitor-1的siRNA表达质粒的构建及鉴定
- 2008年
- 目的:构建靶向人Bax inhibitor-1的siRNA表达质粒。方法:借助siRNA设计工具,确定Bax inhibitor-1编码序列中4个可能的干扰位点,人工合成4对正反义脱氧寡核苷酸链(B1、B2、B3、B4),定向克隆至真核表达质粒pmU6,得质粒pmU6-B1、pmU6-B2、pmU6-B3、pmU6-B4。将重组质粒转染DH5α,PCR法筛选阳性克隆,DNA测序法检测插入序列的正确性。结果与结论:PCR和DNA测序结果证实各重组质粒的插入序列完全正确。靶向人Bax inhibitor-1的siRNA表达质粒构建成功。
- 张美红周克元
- 关键词：BAXRNA干扰小干扰RNA
- RNA干扰阻抑Bax i nhi bitor-1(bi-1)基因表达对卵巢癌细胞凋亡的影响被引量：6
- 2009年
- 目的:研究RNA干扰(RNAi)效应对人卵巢癌细胞株HO8910PM和HO8910中bi-1基因表达的抑制作用和凋亡诱导作用。方法:把表达bi-1shRNA的各重组干扰质粒转染到HO8910PM和HO8910细胞中,RT-PCR和Western blotting法检测bi-1基因mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术和Hoechst 33258/PI荧光染色检测siRNA诱导细胞凋亡作用。结果:与对照组细胞相比较,转染4种候选干扰质粒组细胞中bi-1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P<0.05),以转染pmU6-b4组细胞的表达抑制率最高,在HO8910PM细胞中的抑制率分别为(45.50±3.04)%和(51.08±4.96)%,在HO8910细胞中的抑制率分别为(37.29±3.69)%和(44.96±4.28)%;流式细胞术结果表明,与对照组细胞相比较,转染pmU6-b4质粒24 h、48 h、72 h、96 h的HO8910PM细胞中亚二倍体峰比值明显升高(P<0.05),以转染72 h组细胞的比值最高,达到(25.89±5.63)%,而HO8910细胞中无亚二倍体峰出现;荧光显微镜下可见转染pmU6-b4质粒72h的HO8910PM细胞出现细胞核缩小、染色质固缩和核断裂,而HO8910细胞核无明显变化。结论:针对bi-1的siRNA能特异有效地下调HO8910PM和HO8910细胞中bi-1基因的表达,不同序列特异性的siRNA下调bi-1基因表达的能力不同;瞬时转染质粒pmU6-b4能有效诱导HO8910PM细胞凋亡,但不能诱导HO8910细胞凋亡。
- 张美红周克元
- 关键词：RNA干扰细胞凋亡
- 小干扰RNA的合理设计被引量：3
- 2006年
- 张美红周克元
- 关键词：RNAISIRNASHRNA基因沉默
- 不同长度siRNA序列对鼻咽癌细胞株CNE-2Z中Bax inhibitor-1(bi-1)基因沉默效能的影响
- 本文比较含不同长度 siRNA 序列的重组干扰质粒对鼻咽癌细胞株 CNE-2Z 中 bi-1基因沉默效能的影响。以前期实验筛选出的27 nt siRNA 有效序列为基础,设计相应的19 nt、23 nt、29 nt si...
- 张美红李祥勇张月飞周克元
- 关键词：SIRNA鼻咽癌
- 文献传递
