韩峰
- 作品数：17 被引量：34H指数：4
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- 大肠杆菌原核增强子样序列的克隆及其结构与功能的研究被引量：3
- 2000年
- 利用氯霉素乙酰转移酶(cat)以及β半乳糖苷酶(lacZ)基因作为报告基因,从大肠杆菌MC1061株染色体基因组中克隆到3个原核增强子样序列———MC2,MC8,MC9,这3个片段均具有正反向增强活性,对β半乳糖苷酶基因的增强活性(正向)在2～55倍之间。采用体内转录,RNADotblot杂交的方法对MC8的功能进行了研究,结果表明,MC8片段对于基因表达的调控发生在转录水平上。用核酸外切酶III末端缺失的方法对MC8的功能区进行了定位。结果显示,MC8的功能区位于距其正向克隆5′端450～950bp长约500bp的区段内。在450～600bp以及840～950bp区段内至少分别含有一个功能位点。序列分析的结果表明,MC8功能区有3个AT丰富区,其中2个分别位于450～600bp以及840～950bp区段内。
- 朱民吴淑华秘晓林薛水星韩峰
- 关键词：大肠杆菌原核增强子样序列基因调控
- 原核增强子样序列及其应用
- 本发明涉及具有原核DNA转录增强子活性的DNA片段，其筛选和克隆方法及其在制备重组表达载体中的应用。本发明的新的增强子样序列明显的改善了外源基因的转录速率，进而明显地提高了外源目的基因表达产物的产率。
- 吴淑华侯云德何建新秘晓林韩峰曹茹王艳
- 文献传递
- 大肠杆菌C600染色体DNA中原核增强子样序列的克隆和鉴定
- 2001年
- 采用大肠杆菌trp启动子,氯霉素乙酰转移酶(CAT)作为标记基因,构建了两个应用氯霉素压力筛选增强子序列的检测载体pKT和pKTP。用pKT,pKTP及pKN2从大肠杆菌C600染色体基因组中克隆到3个原核增强子样序列3A,8A和V6S,这3个片段均具有正、反向增强活性,对β-半乳糖苷酶表达的正向增强活性达到7～8倍,反向增强活性2～3倍。RNA斑点杂交实验证明,3A,8A和V6S片段对于基因表达调控的增强作用均发生在转录水平上。
- 何建新廖小慧秘晓林韩峰王艳吴淑华
- 关键词：大肠杆菌染色体原核增强子样序列基因组克隆
- 在大肠杆菌中高效表达人α1b型基因工程干扰素被引量：5
- 1997年
- 将重组人α１ｂ墼纱基因插入带有原核增强子样序列的新型载体ＰＢＶ３２２，使干扰素在大肠杆菌中的表达水平明显高于原表达载体，达到１．６×１０＾８Ｕ／Ｌ培养液，利用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，ＣＭ＝Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离了交换层析及单克隆抗体亲和的纯化重组人α１ｂ型干扰素，获得了电泳纯产品，其比活性为２×１０Ｚ＾７Ｕ／ｍｇ，分子量为１９ｋｍ。
- 薛水星吴淑华韩峰韩玉龙魏佳侯云德
- 关键词：干扰素大肠杆菌基因工程
- 小鼠周围血网织红细胞计数法测定重组人促红细胞生成素体内活性方法的建立被引量：4
- 1998年
- 小鼠周围血网织红细胞计数法测定重组人促红细胞生成素体内活性方法的建立隋宝全韩峰吴淑华郭德本侯云德本实验在中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室完成作者单位：１３００６２长春卫生部长春生物制品研究所（隋宝全郭德本）；中国预防医学科学院...
- 隋宝全韩峰吴淑华吴淑华郭德本
- 关键词：促红细胞生成素网织红细胞计数法
- 大肠杆菌增强子样序列的发现及其在医学基因工程中应用
- 吴淑华潘卫谢明薛水星韩峰张丽兰万晓余刘哲伟侯云德
- 增强子是真核基因表达调节中的一个必需的元件，但是，在原核细胞中究竞有无调节基因转录的增强子序列，本工作开始时尚无定论。1984年我们首先发现SV40HindIIIB片段能在大肠杆菌系统增强人αβ干扰素cDNA的表达，随后...
- 关键词：
- 关键词：大肠杆菌
- 在大肠杆菌中提高人α1b型基因工程干扰素的表达被引量：6
- 1996年
- 将人α１ｂ型干扰素（ＩＦＮα１ｂ）基因插入带有原核增强子样序列的新型载体ｐＢＶ３２２，使干扰素在大肠杆菌中的表达水平明显高于原表达载体，达到１６×１０８ｕ／Ｌ培养液。重组质粒的特点是：含增强子序列Ｘ，ｔｒｐ启动子控制。利用ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ、ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析及单克隆抗体亲和层析纯化ＩＦＮα１ｂ，获得了电泳纯产品，其比活性为２×１０７ｕ／ｍｇ，分子量为１９ｋＤａ。此外，用ｐＡＴ１５３代替ｐＢＶ３２２，构建了带有和不带有Ｘ序列的两种表达载体。
- 薛水星吴淑华韩峰魏佳侯云德
- 关键词：原核增强子样序列蛋白质纯化
- 中国人促红细胞生成素cDNA的克隆及其在COS-7细胞中的表达被引量：10
- 1996年
- 利用PCR技术,以中国人促红细胞生成素(EPO)次全基因组为模板,进行了基因修补和重组,克隆出EPO cDNA全序列。同时发现中国人EPO cDNA与国外的克隆比较有一个核苷酸的差异,导致第62位氨基酸是丝氨酸,不是亮氨酸。将人EPO cDNA基因插入表达载体pSV2-dhfr中的不同克隆位点,构建了6种不同的转移载体质粒,即pSV2-dhfr/F1,pSV2/N2,pSV2-dhfr/F3,pSV2-dhfr/P4,pSV2-dhfr/G1和pSV2-dhfr/G3。将它们分别转染导入COS-7细胞,结果表明6种转移载体质粒转染的细胞上清液都有明显的EPO活性。人EPO cDNA基因转移载体质粒在COS-7细胞中的表达水平高于人次全EPO基因组转移载体质粒。
- 韩峰吴淑华薛水星黄利文马学军
- 关键词：促红细胞生成素CDNA基因工程
- 流感病毒中和性基因工程Fab抗体的研制被引量：6
- 2001年
- 目的 获得基因工程抗流感病毒抗体 ,为检测其粘膜用药在动物模型中的抗病毒效果奠定基础。方法 从酶联免疫吸附试验阳性的人外周血中分离淋巴细胞 ,提取总RNA ,Oligo dT逆转录cDNA ,聚合酶链反应扩增人IgG轻、重链基因 ,利用pComb3载体构建噬菌体抗体库。用纯化的流感病毒A Sydeny 5 97(H3N2 )为固相抗原筛选抗体Fab段 ,并在大肠埃希菌中进行分泌性表达。通过血凝抑制实验、免疫荧光实验和病毒中和实验选择具有中和作用的Fab抗体。结果 分离到两株Fab克隆 ,IV 2和IV 6 ,流感病毒抗原和抗Fab抗体直接ELISA检测阳性 ,间接免疫荧光实验呈阳性。它们都具有血凝抑制作用 ,病毒中和实验显示能使病毒滴度下降 30倍和 2 0倍。结论 获得了两株具有病毒中和活性的人源抗流感病毒悉尼株的Fab段抗体 ,为进一步的表达纯化及粘膜给药研究其抗病毒效果提供材料。
- 杨贵宾韩峰梁米芳吴淑华王艳侯云德
- 关键词：正粘病毒科单克隆抗体重组蛋白质类
- 流感病毒血凝素基因工程抗体的抗病毒实验效果观察被引量：1
- 2002年
- 目的 对昆虫细胞系统表达纯化的中和性流感病毒血凝素基因工程全抗体IgG IV 2 ,IgG IV 6进行体外和体内抗病毒效果的研究。方法 对比抗体应用前后病毒在MDCK细胞中的病毒滴度和动物模型中粘膜用药前后鼠肺内病毒滴度的改变 ,验证抗体的粘膜抗感染效果。结果 两株基因工程抗体使 4 .5log1 0 TCID50 滴度的病毒下降 1 2的剂量分别为 0 .8μg和 0 .5 μg ;动物模型的粘膜给药表明使 4 .0log1 0 TCID50 的病毒下降 1 2所需的抗体剂量IgG IV 2为 0 2 5mg kg体重 ,IgG IV 6为0 1mg kg体重 ,联合应用时为 0 .0 8mg kg体重。结论 获得的基因工程抗体具有体内体外的抗病毒效果 ,能够中和病毒毒力。
- 杨贵宾王艳赵小东韩峰吴淑华侯云德
- 关键词：流感病毒血凝素基因工程抗体流感免疫组织化学
