仲维霞
- 作品数：29 被引量：137H指数：7
- 供职机构：济南大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 四川省黑水县利什曼原虫家犬感染率的检测被引量：5
- 2010年
- 目的 了解四川省黑水县利什曼病流行区家犬的利什曼原虫感染现状,并比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能.方法 2009年5月在犬源型利什曼病疫区四川省黑水县随机选取的无内脏利什曼病现症的家犬,采集静脉血,采用ELISA方法检测血清中利什曼原虫特异性抗体,用两组PCR引物RV1、RV2和K13A、K13B检测血样中利什曼原虫特异DNA,并比较两种检测方法的敏感性.结果 PCR法检测抗凝静脉血阳性检出率为30.47%（32/105）,ELISA法检测血清阳性检出率为19.05%（20/105）.结论 四川省黑水县存在大量的利什曼原虫无症状感染犬,PCR是检测无症状感染较敏感的方法.
- 屈金辉赵桂华余清顺王洪法仲维霞陈志荣王淮东西格基崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：利什曼病感染率PCRELISA
- pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体的构建与鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的构建pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2多基因重组表达载体,并对其进行初步鉴定。方法根据重组体pcDNA3-p30-ROP2酶切位点和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因序列等因素设计合成引物,扩增HBsAg目的基因片段,再应用酶切、连接等分子生物学技术将HBsAg目的基因克隆至pcDNA3-p30-ROP2表达载体中。应用聚合酶链反应(PCR)初筛,再采用酶切、测序等技术对构建的重组表达载体pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2进行鉴定。结果 PCR扩增出HBsAg基因片段,构建了pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2多基因真核表达载体。PCR与酶切结果显示,该基因片段大小均与理论值相符;测序结果显示该重组表达载体包含了p30-ROP2和HBsAg目的基因的完整序列。结论成功构建了多基因重组表达载体pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2,为进一步研究多基因核酸疫苗奠定了基础。
- 魏庆宽王英婷闫运琴肖婷李瑾徐超刘功振刘娟美仲维霞尹昆付斌闫歌黄炳成
- 关键词：乙肝表面抗原
- 乙肝表面抗原和弓形虫棒状体分泌抗原多功能真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的探讨通过体外扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因,构建真核表达载体pcDNA3-HBsAg-ROP2的可行性。方法根据乙肝S基因序列及pcDNA3-p30-ROP2酶切位点等情况设计、合成引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增HBsAg基因片段;应用回收、纯化、酶切、连接等技术,将HBsAg基因替换pcD-NA3-p30-ROP2中的p30基因,并进行酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增出约0.7 kb的目的基因HBsAg,成功构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组载体。PCR、酶切结果与理论相符,重组体包含了HBsAg和ROP2基因的完整序列。结论利用体外扩增乙肝表面抗原,可成功构建乙肝和弓形虫多功能重组载体pcDNA3-HBsAg-ROP2。
- 魏庆宽肖婷李瑾马丽萍王林王英婷闫运琴高建丽朱嵩仲维霞尹昆付斌张佃波闫歌黄炳成
- 关键词：弓形虫基因重组
- 杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的在毕赤酵母中分泌表达具有抗菌活性的杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4(CP1-DS4)。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性优化Cecropin P1和Dermaseptin S4两抗菌肽基因序列,通过SOE-PCR拼接,构建克隆载体pMD18T-cp1-ds4并测序;pMD18T-cp1-ds4经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后构建重组表达载体pPICZαA-cp1-ds4,测序验证开放阅读框(ORF)正确后经SacⅠ线性化处理,然后电转化毕赤酵母X-33(800V,1mm电转化杯,15s电击1次)并利用Zeocin筛选阳性重组子。重组子接种BMGY、BMMY培养基,采用5%的甲醇诱导表达,采用Tricine-SDS-PAGE分析表达上清,表达上清浓缩后进行抑菌试验。结果在本研究中拼接引物经SOE-PCR拼接后得到优化的长度为120bp的Dermaseptin S4基因基因片段,该片段与Cecropin P1基因连接形成约197bp杂合抗菌肽片段,成功构建pPICZαA-cp1-ds4表达载体,电转化获得重组酵母菌pPICZαA-cp1-ds4/X-33,经诱导后可产生分子质量单位约为9.7ku的目的多肽,该多肽对大肠埃希菌和金黄葡萄球菌均有抑制作用。结论杂合肽CP1-DS4可以在毕赤酵母X-33中融合分泌表达,且具有抗菌活性。
- 孙长峰仲维霞王洪法崔勇赵桂华
- 关键词：CECROPINP1DERMASEPTIN毕赤酵母分泌表达
- 无症状感染利什曼原虫快速分子检测方法的建立与应用被引量：2
- 2015年
- 目的建立适合快速检测利什曼原虫无症状感染者的分子生物学方法。方法选择利什曼原虫k DNA小环保守区的2对快速诊断特异性引物RV1-RV2、K13A-K13B,以杜氏利什曼原虫山东分离株前鞭毛体抽提的k DNA为模板进行PCR扩增,并通过对扩增条带测序比对来鉴定方法的可靠性。运用该法对四川省黑水县105例无症状家犬和新疆喀什地区部分乡镇75例无症状易感人群的静脉血样进行检测,并同时对上述地区确诊的部分病犬及病人(均为7例)进行检测,以验证该方法的可行性及准确性。结果 RV1-RV2、K13A-K13B两对引物扩增出与预期片段大小一致的条带,序列比对结果显示扩增产物在利什曼原虫种内保守性高;该方法对105例无症状家犬及75例无症状居民静脉血样的阳性检出率分别为37.14%(39/105)和82.67%(62/75),且对同地区确诊病犬及病人血样本检测的阳性率均为100%(7/7)。结论该方法适于目前我国黑热病流行区利什曼原虫无症状感染者的检测,且灵敏快速准确,具有较好的推广应用价值。
- 赵桂华尹昆仲维霞崔勇王洪法
- 关键词：利什曼原虫无症状感染PCR
- 弓形虫关键粘附蛋白在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达
- 2013年
- 目的通过cDNA文库筛选出弓形虫关键粘附蛋白基因—棒状体ROP2基因,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,以获得重组蛋白。方法根据弓形虫棒状体ROP2基因开放阅读框设计引物,以弓形虫cDNA为模板进行PCR,纯化扩增产物经双酶切,进行TA克隆,再克隆到pET-30a中。重组质粒pET-30a-rop2经PCR鉴定后,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳鉴定表达产物。结果获得的1223bp的基因片段经PCR和酶切鉴定后与预期大小一致;SDS-PAGE电泳分析显示诱导菌在52ku处出现一条明显的蛋白带,与预期分子量相符。结论成功构建PET30a-ROP2,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,为进一步研究弓形虫粘附关键蛋白基因与肠上皮细胞的关系奠定基础。
- 崔勇仲维霞李瑾赵桂华徐超黄晓丹王洪法
- 关键词：弓形虫粘附蛋白大肠埃希菌
- 弓形虫ROP2酵母双杂交诱饵表达载体的构建及其毒性和自激活活性检测
- 目的:为筛选弓形虫分泌毒性因子-棒状体蛋白2(ROP2)在终末宿主细胞内的互作因子,构建ROP2的酵母双杂交诱饵表达载体,并检测其表达蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性.
方法:根据ROP2蛋白的特性选取1...
- 赵桂华王洪法仲维霞刘功振崔勇肖婷徐超尹昆
- 关键词：弓形虫毒性作用
- 文献传递
- 我国黑热病的流行概况和防治现状被引量：46
- 2011年
- 黑热病又称内脏利什曼病,是严重危害人类身体健康的寄生虫病。按传染源特点可分为野生动物源型、犬源型和人源型3种类型。目前,人源型黑热病除新疆流行区外,在其他流行区已得到控制。而犬源型和野生动物源型黑热病则在其流行区不断出现,有死灰复燃之势。本文对我国黑热病的分型、流行概况和防治现状进行了综述。
- 李玉凤仲维霞赵桂华王洪法
- 关键词：黑热病
- 新疆喀什地区人群利什曼原虫感染检测被引量：1
- 2010年
- 目的了解新疆喀什地区人群利什曼原虫感染现状,为制定防治规划提供依据,并比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能。方法选取2009年9月新疆喀什地区黑热病流行严重的1县3乡4个调查点,采集黑热病患者及其家属和邻居的血液样品(每份血样分抗凝血和非抗凝血),采用ELISA检测血清中利什曼原虫特异性抗体;以RV1、RV2和KI3A、KI3B为引物,用PCR检测血样中利什曼原虫特异DNA片段。结果 PCR检测利什曼原虫特异DNA片段的阳性率为82.67%(62/75),ELISA检测利什曼原虫特异性抗体的阳性率为69.33%(52/75)。结论现阶段新疆喀什地区人群利什曼原虫感染率仍然颇高,尤其表现在与患者密切接触的患者家属和邻居;PCR是检测无症状利什曼原虫感染较敏感的方法 。
- 屈金辉王洪法赵桂华仲维霞凯赛尔窦海平崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：黑热病感染率ELISAPCR
- 弓形虫棒状体蛋白ROP38的原核表达与鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的原核表达弓形虫棒状体蛋白ROP38,并对重组蛋白rROP38的反应原性进行鉴定。方法根据已发表的ROP38基因序列设计引物,通过RT-PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP38基因。将ROP38部分基因克隆到原核表达载体p ET-28a(+)后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并通过Western blot鉴定其反应原性。结果 SDS-PAGE显示在上清和包涵体均有rROP38表达,分子量约为43k D。Western blot结果显示,rROP38蛋白能被His标签抗体和感染弓形虫的人阳性血清识别,说明ROP38具有良好的反应原性,可以作为潜在的血清学诊断抗原。结论本研究成功获得了具有良好反应原性的弓形虫重组蛋白rROP38。
- 崔勇李瑾王洪法仲维霞孙慧赵桂华尹昆徐超肖婷张晓玉于泓刘学峰刘功振
- 关键词：弓形虫原核表达
