何云燕
- 作品数：14 被引量：51H指数：4
- 供职机构：重庆市中山医院更多>>
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- 体外斑点杂交筛选靶向多重耐药鲍曼不动杆菌高效反义核酸序列实验研究
- 2014年
- 目的体外斑点杂交实验模拟体内环境验证计算机辅助软件设计的反义寡核苷酸序列的活性。方法采用计算机辅助软件对多重耐药鲍曼不动杆菌生长必须基因gyrA的mRNA进行二级结构分析计算,设计出10条反义寡核苷酸序列,合成探针与体外转录并用地高辛标记的gyrA mRNA进行斑点杂交,分别选择一条杂交信号最强和一条杂交信号弱的探针序列合成连接穿膜肽序列的肽-肽核酸,以不同浓度的肽-肽核酸处理鲍曼不动杆菌标准株ATCC19606和多重耐药株,测定经不同浓度PPNA处理的细菌光密度A600值并进行平板菌落计数,观察其对细菌生长的抑制作用。以20μmol/L杂交信号强的肽-肽核酸作用于铜绿假单胞菌,测细菌光密度A600值,观察其对细菌生长的抑制作用。结果杂交信号强的肽-肽核酸对多重耐药的鲍曼不动杆菌和ATCC19606均有明显的体外抗菌活性,其最低抑菌浓度分别为5与10μmol/L,10μmol/L浓度时对两种细菌均具有杀菌活性,而杂交信号弱的肽-肽核酸对细菌的生长无抑制作用,即使将其浓度增加到20μmol/L。杂交信号强的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌无生长抑制作用。结论体外斑点杂交实验能够验证计算机软件预测设计的具有特异性的反义核酸的活性,为体外可靠、快速、高通量筛选高效反义序列提供了一种有效的方法,并且为筛选所有基因高效反义序列搭建了一个平台。
- 梁树梅何云燕夏云王慧娟王立朋
- 关键词：鲍曼不动杆菌GYRA斑点杂交反义寡核苷酸肽核酸
- 基因工程单链抗体及其应用被引量：2
- 2006年
- 利用噬菌体展示技术构建的基因工程单链抗体是一种小分子抗体。该抗体不仅具备单克隆抗体可与抗原特异结合的特征,更因其具有分子量小、组织穿透性好、免疫原性低、易于基因工程操作和构建抗体融合蛋白等诸多优点而凸显其在医学应用中的价值。现着重就基因工程单链抗体的特点及其在感染性疾病、肿瘤等方面的诊断和治疗应用作一简要介绍。
- 何云燕夏云
- 关键词：抗体单克隆肿瘤传染病
- 法国STAGO全自动血液凝固仪实验性能评价被引量：3
- 2001年
- 近年来,血栓与止血诊断技术取得了较大进展,由于实验指标的不断完善,在临床血栓与止血疾病诊断中的重要性日益突出,传统的手工操作,自配试剂,因效率低而无法满足临床的要求.半自动乃至全自动血凝仪的出现,不仅提高了检测效率,而且其方法的标准化与质量控制也大大增强[1].
- 何云燕涂干卿
- 关键词：血栓诊断
- 利奈唑胺耐药肠球菌耐药机制分析被引量：2
- 2013年
- 目的探讨利奈唑胺耐药肠球菌的相关耐药机制。方法对临床分离到的10株利奈唑胺耐药肠球菌,分别提取基因组DNA及质粒DNA,采用PCR技术分别扩增23S rRNA的V583区片段、编码核糖体蛋白的L3、L4基因片段及cfr基因片段。阳性扩增产物进行测序并与标准菌株ATCC 29212进行比对,分析有无突变点。结果 10株利奈唑胺耐药肠球菌均PCR扩增出V583区、L3、L4目的基因,测序未检测到23S rRNA的V583区域发生点突变G2576T以及L3、L4基因突变所引起氨基酸序列的改变。10株细菌均未检测到cfr基因。结论我院分离的肠球菌未发现利奈唑胺耐药机制G2576T突变,L3、L4基因突变导致氨基酸序列改变及多重耐药基因cfr基因的存在,推断利奈唑胺耐药肠球菌仍存在未知的耐药机制。
- 王立朋何云燕严立王慧娟梁树梅夏云
- 关键词：利奈唑胺肠球菌耐药
- P53水平对端粒酶逆转录酶表达的调节作用被引量：5
- 2006年
- 目的研究野生型P53表达水平对端粒酶逆转录酶(HTERT)表达的调节作用。方法采用针对P53的反义核酸转染HEPG2细胞和稳定表达PPUR/U6/HTERT的HEPG2细胞,野生型P53表达质粒转染HEPG2细胞,以WESTERN-BLOT验证其对靶基因的抑制或增强作用,然后再用WESTERN-BLOT检测HTERT的表达水平。结果P53反义核酸和野生型P53表达质粒能明显降低或增强P53的表达,降低P53的表达对HTERT的表达无明显影响;而P53表达增加则可抑制HTERT的表达。结论P53与HTERT之间存在相互作用,野生型P53对HTERT的表达起负调节作用。
- 何云燕夏云
- 关键词：P53HTERTHEPG2细胞
- 基因工程单链抗体及其应用
- 2003年
- 何云燕
- 关键词：噬菌体展示技术小分子抗体
- 核酸序列依赖扩增联合分子信标对曲霉菌感染的检测效果被引量：4
- 2013年
- 目的建立快速、灵敏、特异的定量检测曲霉菌感染的诊断方法。方法以烟曲霉菌、黄曲霉菌及黑曲霉菌的孢子配制菌液,提取RNA后,采用核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)联合分子信标(molecular beacon,MB)技术进行荧光检测,并对该方法进行灵敏度和特异性分析。结果扩增过程中累计荧光量达到设定的荧光阈值所需循环数与标本中霉菌孢子量的对数存在线性相关关系(y=-10.7x+81.6,r=0.988)。将含有梯度数量霉菌孢子的标本提取总RNA后进行检测,可建立相应标准曲线。该方法的灵敏度可达到1个孢子;对照菌株(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌)与曲霉菌提取总RNA经扩增后的产物进行电泳分析,发现仅曲霉菌出现特异性条带。结论 NASBA结合分子信标检测曲霉菌具有灵敏度高、特异性强的特点,具有潜在利用价值,有望成为曲霉菌感染的临床诊断方法。
- 王立朋何云燕夏云王慧娟
- 关键词：分子信标曲霉菌
- 应用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌被引量：2
- 2007年
- 目的比较头孢西丁纸片扩散法与传统的苯唑西林纸片扩散法对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测的效率。方法收集66株葡萄球菌,分别采用苯唑西林琼脂平板筛选试验、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法来检测MRS,结果以苯唑西林琼脂平板筛选结果为对照,分别比较头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法的特异性和敏感性。结果66株葡萄球菌中,37株金黄色葡萄球菌经苯唑西林琼脂平板筛选判定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的有15株,29株凝固酶阴性的葡萄球菌有24株判定为耐甲氧西林凝固酶阴性的葡萄球菌(MRCNS)。与苯唑西林琼脂平板筛选法比较,头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,而苯唑西林纸片扩散法其敏感性和特异性分别为93%(14/15)和91%(20/22);头孢西丁纸片扩散法检测MRCNS的敏感性和特异性均为100%,而苯唑西林纸片扩散法其敏感性和特异性分别为96%(23/24)和40%(2/5)。结论头孢西丁纸片扩散法对MRS检出优于苯唑西林纸片扩散法。
- 何云燕夏云庞丽
- 关键词：葡萄球菌头孢西丁苯唑西林
- 盐酸戊乙奎醚降低体外循环患者心肌损伤的实验研究被引量：18
- 2007年
- 目的探讨盐酸戊乙奎醚预处理对体外循环(CPB)下心内直视手术后患者心肌保护作用的机制。方法随机抽样选取60例无心梗的心脏瓣膜置换手术患者,随机分为对照组和试验组,每组各30例。各组病例在CPB前,CPB后即刻,术后1、2、3d 5个时点定量测定血清中的cTn-I、CK-MB浓度,比较各组同一时点cTn-I、CK-MB浓度的差异。结果两组患者术前的cTn-I和CK-MB均在正常参考值内,差异无统计学意义(P>0.05);术后即刻,术后1、2、3d各时点的cTn-I和CK-MB试验组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论盐酸戊乙奎醚可以降低心肌细胞损害的特异性指标,进而推断盐酸戊乙奎醚对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
- 何云燕何德沛罗云俐孔春欢
- 关键词：盐酸戊乙奎醚体外循环CTN-I
- 实验室可持续发展的几个因素
- 何云燕
- 文献传递
