刘丽
- 作品数：21 被引量：48H指数：4
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同截短型癌基因AEG-1启动子活性分析
- 2016年
- 目的:分析不同截短型癌基因AEG-1启动子活性,证实与E6/E7表达相关的转录调控因子对AEG-1启动子活性的影响。方法:以宫颈癌He La细胞基因组DNA为模版,扩增AEG-1启动子全长序列(-2710/-491),并应用本实验室改造的启动子活性研究专用绿色荧光蛋白报告载体构建p GL3-basicEGFP/AEG-1质粒,通过转染He La细胞及血管内皮细胞ECV304检测启动子活性。同时,根据AEG-1启动子序列上与E6/E7作用相关的转录调控因子结合位点位置,设计不同截短型AEG-1启动子序列引物,应用p GL3-basic-EGFP载体构建不同截短型AEG-1启动子载体,并分别转染细胞检测启动子活性。结果:AEG-1启动子全长序列p GL3-basic-EGFP/AEG-1载体转染He La细胞可见明显绿色荧光蛋白表达,而在血管内皮细胞ECV304中表达为痕量。包含不同转录调控因子C-Myc、SP1、NF-κB、E_2F结合位点的不同截短型AEG-1启动子载体在肿瘤细胞中有活性但存在差异。结论:AEG-1启动子为肿瘤特异性启动子,含有与E6/E7表达相关的转录调控因子NF-κB、E_2F结合位点的启动子序列为影响AEG-1基因启动子活性的关键区域。
- 代瑛龙敏张喆刘丽张惠中董轲
- 关键词：C-MYCSP1E2F
- 抗人AEG-1单克隆抗体可变区基因克隆及序列分析
- 2014年
- AEG-1基因位于人染色体8q22,编码582个氨基酸,参与多种信号转导途径并与多种恶性肿瘤的发生、发展及生物学表型密切相关。为更好地探讨AEG-1生物学功能,以纯化的p GSTag-AEG-1蛋白免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术并经筛选及鉴定,获得了分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1 E3;Western blot及免疫组化证实该细胞株分泌的单克隆抗体能与肿瘤细胞中AEG-1蛋白特异性结合;RT-PCR方法从1E3细胞中克隆出抗AEG-1抗体的VH和VL基因片段,通过测序分析、碱基和蛋白序列的比对确认该株抗体为鼠源性Ig G的轻、重链可变区基因。进一步运用Kabat System在线分析系统对VH和VL基因进行结构分析,确证FWRs和CDRs的结构完整,VH编码117个氨基酸;VL编码119个氨基酸,属于轻链κV家族。实验结果为进一步研究AEG-1与恶性肿瘤发生、发展的关系及在其临床诊断中的应用奠定了基础。
- 龙敏董柯王希陈曦刘冲刘丽张惠中
- 关键词：AEG-1可变区基因克隆
- 紫外线照射血液疗法治疗流行性出血热的疗效观察和机理探讨被引量：1
- 1994年
- 紫外线照射血液疗法治疗流行性出血热的疗效观察和机理探讨刘丽，杨为松，陈勇，张文彬，周永兴，白雪帆（中国人民解放军第四军医大学唐都医院传染科，西安７１００３８）流行性出血热（ＥＨＦ）的治疗迄今尚无特效方法。紫外线照射血液（以下简称ＵＩＢ）疗法具有抗病毒...
- 刘丽杨为松陈勇张文彬周永兴白雪帆
- 关键词：流行性出血热光量子疗法输血
- Survivin基因启动子调控的肿瘤特异性表达载体的构建被引量：1
- 2007年
- 目的:扩增survivin基因启动子,构建survivin启动子调控的真核表达载体,验证其在肿瘤细胞的特异性表达。方法:以Hep-2细胞基因组DNA为模板,PCR扩增survivin启动子;利用核酸内切酶双酶切sur-vivin启动子基因片段和pShuttle质粒,构建载体pSurp,酶切和测序鉴定;分别双酶切pSurp载体和pEGFP-C1载体,构建survivin启动子调控的真核表达载体pSurp-EGFP,脂质体转染Hep-2细胞及血管内皮细胞ECV304,荧光显微镜下观察EGFP的表达,Western blot方法验证该基因的蛋白表达。结果:成功扩增survivin基因启动子并构建survivin基因启动子调控的pSurp-EGFP真核表达载体。脂质体法转染Hep-2细胞和血管内皮细胞ECV304,在荧光显微镜下见Hep-2细胞发出较强的绿色荧光,而ECV304细胞没有绿色荧光;Western blot的结果也确证了EGFP蛋白仅在Hep-2细胞表达。结论:Survivin启动子的成功克隆与其真核表达载体的构建,为肿瘤的特异性基因治疗奠定了实验基础。
- 白万胜王军利卞卡成诗银张惠中刘丽
- 关键词：SURVIVIN启动子绿色荧光蛋白
- 诱骗寡核苷酸下调MKN-45细胞OP18基因表达及对细胞增殖的影响
- 2007年
- 目的:探讨转录因子E2F哑铃形诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)对MKN-45细胞中op18基因转录调控的影响及对细胞增殖的抑制作用.方法:设计合成针对op18启动子上E2F的结合位点序列的哑铃形Decoy ODNs,然后将合成的序列进行退火、连接,使其形成哑铃形的结构,再应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将哑铃形Decoy ODNs转染MKN-45细胞中.TRIzol法提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测细胞中op18 mRNA表达水平的变化.通过MTT实验监测细胞的生长增殖状况并绘制生长曲线,最后用TUNEL法观察细胞的凋亡的情况.结果:哑铃形Decoy ODNs被成功转染MKN-45细胞,并成功提取了细胞总RNA.RT-PCR检测发现哑铃形Decoy ODNs转染后的MKN-45细胞中op18 mRNA表达水平明显低于空白对照组,MTT实验所作的生长曲线显示转染细胞增殖速度与空白对照组相比较明显减慢,TUNEL凋亡染色可见凋亡细胞.结论:哑铃形Decoy ODNs能特异性抑制E2F转录因子对op18基因的转录调控,进而抑制op18基因表达及MKN-45细胞增殖.
- 林芳王锐高萍刘丽王希张惠中
- 关键词：圈套寡核苷酸细胞增殖基因疗法
- 大鼠补体调节因子DAF功能区的表达纯化及功能鉴定
- 2006年
- 目的:重组表达促衰变因子(DAF)功能区的4个短的保守重复序列(SCR1-4)。方法:通过克隆大鼠DAF的SCR1-4并插入到原核表达载体pET32a(+),IPTG诱导共表达,根据表达结果选择纯化方式。结果:诱导后表达产物为不溶蛋白,通过纯化包涵体并复性,得到了具有抑制致敏绵羊红细胞发生溶血的可溶性蛋白成分。结论:原核表达SCR1-4易于形成包涵体,稀释复性法适用于DAFSCR1-4包涵体的复性。
- 徐江张惠中林芳刘丽王燕任继鸿李柱一
- 关键词：DAF包涵体蛋白复性
- 喉癌组织中TSLC1基因启动子过甲基化及mRNA表达被引量：11
- 2007年
- 目的:探讨TSLC1基因启动子区过甲基化与喉癌的关系.方法:采用甲基化特异性PCR和RT-PCR法分析喉部正常粘膜、声带息肉、喉癌细胞Hep-2和喉癌组织中TSLC1基因启动子区过甲基化及其mRNA表达状况.结果:40例喉癌组织中,有21(52.5%)例TSLC1基因启动子区过甲基化,其在各病理分级、临床分期和分型之间差异无统计学意义(P>0.05),而在N分级(N0和N1)之间差异有统计学意义(P<0.05).喉癌细胞Hep-2也显示TSLC1基因启动子区过甲基化.RT-PCR结果显示,TSLC1 mRNA在所有甲基化的喉癌组织和喉癌细胞Hep-2中均无表达,而喉部正常组织,声带息肉组织和非甲基化的喉癌组织中均有表达.结论:喉癌组织中TSLC1基因启动子区过甲基化与其mRNA失表达有关,可能是喉癌发生、发展的原因之一,可作为喉癌诊断和预后分析的检测指标.
- 王军利张惠中白万胜刘丽卞卡成诗银
- 关键词：TSLC1基因喉肿瘤启动子甲基化
- Survivin基因启动子调控的肿瘤特异性表达载体的构建
- 目的以 Hep-2细胞基因组 DNA 为模板,PCR 扩增 survivin 基因启动子,构建 survivin 启动子调控的真核表达载体,验证其在肿瘤细胞的特异性表达。方法以 Hep-2细胞基因组 DNA 为模板,根据...
- 白万胜王军利卞卡成诗银张惠中刘丽
- 文献传递
- survivin基因启动子驱动的肿瘤特异性腺病毒载体的构建被引量：2
- 2008年
- 目的:构建肿瘤特异性启动子驱动的腺病毒载体,检测survivin基因启动子在喉癌细胞中的特异表达活性。方法:PCR扩增survivin启动子,构建分别携带survivin启动子和CMV启动子的真核表达载体pCMV-EGFP和pSurp-EGFP,体外连接法制备重组腺病毒Ad-SP-EGFP和Ad-CMV-EGFP,后转染Hep-2细胞及血管内皮细胞ECV304,荧光显微镜下观察EGFP表达。结果:成功构建survivin基因启动子的腺病毒载体;Ad-SP-EGFP转染后荧光镜下见Hep-2细胞发出较强的绿色荧光,而ECV304细胞无表达。结论:成功制备肿瘤特异性survivin启动子驱动的腺病毒,为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定了实验基础。
- 白万胜成诗银王军利卞卡张惠中刘丽
- 关键词：喉肿瘤基因疗法
- 人类白细胞相关抗原-G及其各亚型mRNA在正常妊娠及重度子前期患者胎盘组织中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的研究人类白细胞相关抗原-G(HLA-G)及其各个亚型mRNA在正常妊娠及重度子前期患者胎盘组织中的表达。方法选取2005-01-2005-06第四军医大学唐都医院10例重度子前期患者(研究组)及10例正常妊娠胎盘组织(对照组),应用荧光定量RT-PCR比较两组间HLA-G及其各个亚型mRNA(HLA-G1、G2、G3、G4、G5、G6)的表达。结果与对照组相比,重度子前期患者胎盘组织中总HLA-GmRNA显著降低,以HLA-G1、HLA-G3降低为主,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HLA-G1与HLA-G3在胎盘组织中的低表达可能与妊娠期高血压疾病的发病和病理生理过程有关。
- 朱晓明杨瑛张惠中刘丽赵辉侯开波姚元庆
- 关键词：子痫前期HLA-G胎盘
