肝脏是代谢的中枢性器官,在糖脂代谢中扮演重要角色。FGF-21是近年来发现的一种治疗糖尿病新型药物,研究其对肝脏糖代谢影响及机制将为FGF-21成药性提供理论依据。以Hep G2细胞为肝细胞模型,探究FGF-21对Hep G2细胞葡萄糖吸收影响及作用机制。FGF-21处理Hep G2细胞,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法检测细胞对葡萄糖摄取情况,并检查胰岛素与FGF-21协同作用,蒽酮法检测细胞内糖原含量,半定量和实时荧光定量PCR检测FGF-21对葡萄糖转运蛋白(GLUTs)m RNA表达影响。结果表明,FGF-21可促进Hep G2细胞摄取葡萄糖,与胰岛素具有一定协同作用,增加糖原合成。半定量PCR结果显示在FGF-21作用下,仅GLUT1m RNA表达有所增加。实时荧光定量PCR检测FGF-21作用时间对GLUT1 m RNA表达量影响,发现FGF-21作用6 h时GLUT1 m RNA表达量倍数增加最大。说明FGF-21可通过增加GLUT1 m RNA表达促进Hep G2细胞消耗葡萄糖,参与糖原合成。
在以往的研究中发现,冠状病毒的S蛋白对其入侵宿主细胞起着决定性的作用。本研究从美国国立生物技术信息中心(national center for biotechnology information,NCBI)获取SARS-CoV-2 S蛋白基因的核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列,利用DNAMAN、DNAstar、Mega 7.0及一些在线分析预测网站对S蛋白进行生物信息学分析。结果表明,SARS-CoV-2与SARS-CoV的S蛋白同源性较高,推测两种毒株的S蛋白结构与功能具有相似性。S蛋白含有信号肽序列;潜在磷酸化氨基酸数目共有136个,且其余氨基酸均有较高的磷酸化倾向;N-糖基化位点有17个;S蛋白是一种膜上蛋白,含有S1和S2两个结构域;二级结构预测结果中α螺旋占28.59%,β转角占3.38%,延伸链占23.25%,无规则卷曲占44.78%。四级结构显示完整的S蛋白是由3个单体结合而成。本研究可为SARS-CoV-2感染宿主细胞的机理研究及特异性的治疗提供一定的理论基础。
克隆新城疫病毒中等毒力株Anhinga(Anh)的血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,用生物信息学软件分析其编码蛋白结构与功能的差异。根据已知的HN基因序列,通过Primer Premier 5.0设计引物,提取新城疫病毒总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增HN基因,并将其连接到T载体上进行测序比对;用DNAman、DNAstar、MEGA7.0及在线分析预测软件对HN基因编码的蛋白进行生物信息学分析。结果显示,HN基因全长为1716 bp,与预期基因序列同源性达99.77%。其基本理化性质为亲水性跨膜蛋白,无信号肽序列,二级结构主要以无规则卷曲为主,属于神经氨酸酶CL21531超家族,三级结构与二级结构预测结果基本吻合,该蛋白存在多个潜在的B细胞表位。论文成功克隆并分析了HN基因所编码蛋白的主要特性及可能存在的抗原位点,为深入探究HN蛋白在NDV感染、增殖及抗肿瘤方面的作用奠定了基础。
