孙艳
- 作品数：14 被引量：39H指数：4
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划工业生物技术教育部重点实验室基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 高密度培养重组大肠杆菌发酵生产胆固醇氧化酶的策略
- 2009年
- 以重组大肠杆菌发酵生产胆固醇氧化酶,依据溶解氧的变化控制底物的流加速率,实现了重组大肠杆菌的高密度培养,最高密度达85(OD600)。在此基础上确定了最佳的诱导时机为发酵中期,菌体产酶水平达.583(1.6U/L,产酶速率为971.77 U·L-1·h-1,生产强度为388.71U·L-1·h-1,实现了胆固醇氧化酶的高效生产。
- 王长城孙艳张玲王武杨海麟
- 关键词：胆固醇氧化酶分批补料
- 胆固醇氧化酶分离纯化及应用的研究进展被引量：6
- 2009年
- 综述了不同微生物所产胆固醇氧化酶的分离纯化方法及应用研究情况,重点介绍了破除乳化体系的方法,血清中胆固醇含量的检测,并针对分离纯化与应用中存在的问题提出了今后的研究方向。
- 钟学敏孙艳张玲杨海麟王武
- 关键词：胆固醇氧化酶分离纯化乳化体系
- 高密度培养重组E-coli产胆固醇氧化酶的乳糖诱导策略被引量：2
- 2011年
- 研究了乳糖诱导重组大肠杆菌表达胆固醇氧化酶。结果表明,乳糖不仅可以作为诱导剂诱导外源蛋白的合成,而且能作为碳源促进菌体的生长。通过对诱导条件的优化,实现了重组大肠杆菌的高密度培养,最高密度达68.9(OD600);在此基础上确定了最佳的诱导时机为发酵中期,菌体产酶水平达6005.66U/L,生产强度为200.19U/L.h,实现了胆固醇氧化酶的高效生产。
- 杨海麟王长城张玲辛瑜孙艳王武
- 关键词：胆固醇氧化酶乳糖
- 一种胆固醇氧化酶高产菌株筛选方法的建立被引量：1
- 2008年
- 用亚硝基胍(1mg/mL)与超声波(200W,50kHz)复合诱变的方法,对产胆固醇氧化酶短杆菌Brevibacterium sp.DGCDC-82进行诱变处理,得到一株桔红色突变株其产胆固醇氧化酶能力提高140%,酶活达到1.24U/mL,又用同样的方法对桔红色突变株进行回复突变处理,得到一株白色回复突变株和一株淡粉色回复突变株,两株回复突变株产胆固醇氧化酶的能力又明显下降,酶活分别为0.17U/mL和0.69U/mL。说明短杆菌Brevibacterium sp.产胆固醇氧化酶能力与其产红色素成正相关偶联关系,这种相关性模型的建立可以作为以后诱变或定向进化研究的筛子。
- 霍惠芝张玲孙艳杨海麟王武
- 关键词：红色素复合诱变回复突变
- 建立高通量筛选耐热胆固醇氧化酶的方法被引量：2
- 2011年
- 建立了一种以滤膜为基础的高通量筛选耐高温胆固醇氧化酶产生菌的方法。利用酶偶联及胆固醇不溶于水的特性产生显色透明圈。酶的热处理过程和酶与底物的反应过程分开,有效地防止酶在热处理前与底物反应。高温处理是在滤膜上进行,从而克服了高温琼脂平板变软或熔化的缺点。用该方法筛选时,产生的红褐色透明圈较明显,易于挑出性能改善的突变菌株。转印所用NC膜的价格便宜,操作比较简便。
- 孙艳杨海麟王武
- 关键词：胆固醇氧化酶高通量筛选定向进化
- 猪心苹果酸脱氢酶酶学性质及稳定性研究被引量：6
- 2007年
- 对动物组织来源的苹果酸脱氢酶——猪心肌苹果酸脱氢酶的酶学性质及稳定性进行了研究.结果表明：苹果酸脱氢酶的相对分子质量约为69 000,含有2个亚基,每个亚基的相对分子质量约为34 000;该酶的最适作用pH为8.0,最适作用温度为50℃;Km值为84.6μmol/L（草酰乙酸,pH8.3）.通过对酶的稳定性研究,该酶在50℃以下具有较好的稳定性,其pH稳定范围为7.0-9.0（25℃,20 h）.
- 龚韧张大伟江龙法孙艳杨海麟王武
- 关键词：苹果酸脱氢酶酶学性质稳定性猪心
- 重组大肠杆菌产胆固醇氧化酶的指数流加策略被引量：3
- 2010年
- 以指数流加策略高密度培养重组大肠杆菌,发酵生产胆固醇氧化酶。通过对比生长速率的分阶段控制使得细胞干重达40.128g/L。确定了最佳的诱导时机为菌体对数生长期的中期,产酶速率为1287.31U/(L·h)。菌体产酶水平达6436.56U/L,生产强度为459.75U/(L·h),实现了胆固醇氧化酶的高效生产。
- 孙艳王长城张玲杨海麟王武
- 关键词：胆固醇氧化酶
- 猪心肌苹果酸脱氢酶的制备及应用被引量：4
- 2008年
- 设计并优化了从猪心中提取高纯度苹果酸脱氢酶的技术路线,采用组织破碎、二度硫酸铵盐析、DEAE Sepharose F.F.离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 F.F.疏水层析及Sephadex G-75Fine凝胶过滤等方法进行分离纯化,苹果酸脱氢酶比酶活达1 212.97 U/mg,纯化倍数达122.64倍,酶活力收率为53.64%。Sephadex G-75 Fine凝胶过滤和SDS-PAGE电泳结果显示纯化的苹果酸脱氢酶相对分子质量约为69 000,含有2个亚基,每个亚基的相对分子质量约为34 000。以制备的苹果酸脱氢酶和谷草转氨酶配成双酶反应体系,对葡萄酒中L-苹果酸的含量进行了测定;通过标准样品和葡萄酒样品精密度及回收率（93.2%～104%）实验。
- 龚韧孙艳王静霍惠芝杨海麟王武
- 关键词：苹果酸脱氢酶柱层析纯化
- 细菌黄嘌呤氧化酶的稳定性被引量：4
- 2009年
- 研究pH、温度、金属离子和一些添加剂对黄嘌呤氧化酶稳定性的影响。结果表明：黄嘌呤氧化酶在pH4．5～7．5的范围内较稳定；反应最适温度为37℃。在常温25～35℃该酶比较稳定，经45℃处理2h．可保持50％左右，不同种类、不同浓度的金属离子对黄嘌呤氧化酶活性表现出程度不同的激活或抑制作用；添加谷氨酸和天门冬氨酸，能有效提高黄嘌呤氧化酶的存放稳定性.
- 孙艳王静杨海麟王武
- 关键词：谷氨酸天冬氨酸
- 重组E.coli胆固醇氧化酶的分离纯化及其酶学性质研究被引量：2
- 2009年
- 对重组E.coli产生的胆固醇氧化酶采用70%硫酸铵盐析、CM Sepharose FF离子层析、Phenyl Sepharose 6 Fast疏水层析、Sephadex G-75凝胶过滤,得到的胆固醇氧化酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带,酶的纯化倍数为93,收率为21%。部分酶学性质表明:酶的最适反应温度为37℃,最适反应pH7.5,热稳定范围在40℃以下,酶的pH稳定范围为6～9,分子量分别为50 kD和52 kD。酶动力学参数Km值及Vmax分别为8.2×10-5mol/L和0.21 mmol/(L.min)。
- 钟学敏张玲孙艳杨海麟王武
- 关键词：胆固醇氧化酶分离纯化酶学性质
