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维生素A类化合物与生殖细胞发育被引量：1: 2011年; 维生素A（VA）是生命有机体内细胞增长、分化、增殖和程序性凋亡的关键调节因子，其参与胚胎发育、组织分化、肿瘤细胞生长等重要过程，对视力、上皮组织及骨骼发育、配子生成及胎儿的生长发育等所必需。视黄酸（RA）是维生素A的生物活性代谢所产生的一种脂溶性的小分子物质，主要由环乙烯、侧链和极性基团组成。根据其双键构型的不同，可分为反式视黄酸和顺式视黄酸。; 曹晖华进联; 关键词：维生素A 类化合物肿瘤细胞生长组织分化小分子物质视黄酸

猪胰岛素启动子报告系统的构建及其在胰岛间充质干细胞诱导分化检测中的应用被引量：4: 2015年; 为了构建猪胰岛素启动子(IP)-绿色荧光蛋白(GFP)报告系统,评价其在胰岛间充质干细胞(PIMSCs)诱导分化过程中的应用价值,试验以胎猪胰腺组织基因组DNA为模板,PCR扩增获得IP基因片段,T载体连接测序后,构建p EGFP-IP重组质粒,经PCR和双酶切鉴定后,分别转染原代胎猪胰腺细胞和PIMSCs,48 h后观察荧光表达情况,转染重组质粒的PIMSCs体外诱导2周后,观察绿色荧光表达情况,并进行GFP和胰岛素的Western-blot检测。结果表明:PCR扩增得到1条659 bp大小的基因片段,其测序结果与Gen Bank公布的IP基因序列一致。经PCR和双酶切鉴定,p EGFPIP重组质粒构建成功。重组质粒转染48 h后,部分原代胎猪胰腺细胞强表达绿色荧光,而PIMSCs则不表达。诱导2周后,部分PIMSCs表达绿色荧光,同时随着绿色荧光的表达增强,其胰岛素表达也相应增强。说明成功构建出了猪胰岛素启动子-绿色荧光蛋白报告系统,该报告系统具有表达特异性,可用于检测由PIMSCs诱导分化得到的胰岛素分泌细胞。; 楚元奎杨丽曹晖华进联窦忠英; 关键词：诱导分化

人神经元素3基因重组逆转录病毒表达载体的构建及其包装细胞株的建立被引量：2: 2010年; 为构建表达人神经元素3基因(neurogenin 3,ngn3)的重组逆转录病毒载体,建立稳定表达ngn3的包装细胞株,本研究以流产人胎儿胰腺组织为材料,通过RT-PCR方法克隆出人ngn3基因,将其连接到pMD18-T载体上并测序,结果表明,测序得到的基因序列与发表的人ngn3基因序列(GenBank Accession No.BC126468)完全一致。将EcoRI和HpaI双酶切后的基因片段构建到pMSCV-neo逆转录病毒载体中,酶切鉴定结果表明,pMSCV-ngn3重组逆转录病毒载体构建成功。脂质体法将pMSCV-ngn3重组载体导入PT67包装细胞,G418筛选后,对得到的细胞株进行RT-PCR和免疫组化检测,结果显示,该细胞株在mRNA水平和蛋白水平均稳定表达Ngn3;收集该细胞株的培养上清液,进行RT-PCR检测及电镜观察,结果表明,该细胞株将导入的重组逆转录病毒载体pMSCV-ngn3包装成了具有感染性的病毒颗粒,并将其释放到了培养上清液中。以上结果表明PT67-ngn3包装细胞株建立成功。该细胞株的成功建立,为下一步将ngn3基因应用于提高人胎儿胰腺祖细胞诱导分化效率方面的研究奠定了基础。; 楚元奎吕长荣陈冬梅曹晖窦忠英; 关键词：逆转录病毒载体

一种永生化的猪胰腺干细胞系及其构建与分化方法: 本发明公开了一种永生化的猪胰腺干细胞系及其构建与分化方法，所述的永生化的猪胰腺干细胞系，是以猪胰腺干细胞作为宿主细胞，转染pCI-neo-hTERT真核表达载体，经过G418筛选得到的表达人端粒酶逆转录酶且具有多向分化潜...; 曹晖楚元奎华进联窦忠英; 文献传递

猪肌肉卫星细胞的分离培养及生物学特性鉴定被引量：2: 2011年; 以猪胎儿为材料,采用胶原酶消化法或组织块法培养胎儿背部最长肌获得了肌肉卫星细胞,该细胞体外可以传到9代以上。培养的细胞多呈纺锤体型和梭型,具有明显的方向性,呈典型的长轴平行排列。流式细胞仪分析结果显示,该细胞呈CD29、CD166、CD45、CD44阳性,CD71、CD34阴性。RT-PCR检测发现其表达Desmin、C-Myc、Nanog、Pcna、Oct4、Klf4,弱表达Myog,不表达Sox2、MyoD。免疫组化染色发现其表达Desmin等肌肉细胞的特异性标记,同时表达Nanog、Pcna等多能性细胞标记。本试验建立了一种简便高效的猪肌肉卫星细胞体外分离和培养方法,得到的细胞具有肌肉卫星细胞的典型生物学特性,同时表达间质干细胞和多能性干细胞的部分标记。; 吕晓朱海鲸曹晖孙军伟华进联; 关键词：胚胎干细胞间质干细胞诱导多能干细胞

永生化胎猪胰腺源间充质干细胞株的建立及向胰岛素分泌细胞分化: 糖尿病是继心血管疾病和癌症之后的第三大高发慢性疾病,它还会导致多种并发症的发生,如眼疾、肾脏疾病、神经系统疾病、心脑血管疾病及糖尿病高渗综合症等。猪胰岛因组织来源丰富,胰岛素结构与人相似,且能在人体血清内存活发挥特定的生...; 曹晖; 关键词：永生化胰岛素分泌细胞; 文献传递

一种永生化的猪胰腺干细胞系及其构建与分化方法: 本发明公开了一种永生化的猪胰腺干细胞系及其构建与分化方法，所述的永生化的猪胰腺干细胞系，是以猪胰腺干细胞作为宿主细胞，转染pCI-neo-hTERT真核表达载体，经过G418筛选得到的表达人端粒酶逆转录酶且具有多向分化潜...; 曹晖楚元奎华进联窦忠英

关中奶山羊Prm1基因的克隆及真核表达: 2012年; 【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达。将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GC1细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况。【结果】Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达。同时扩增得到了关中奶山羊Prm1基因CDS序列,与其它物种比对,发现其与许多物种具有较高的同源性,与牛的同源性高达97.4%,最后在GC1细胞和人的脐带基质细胞中进行了超表达。【结论】得到了关中奶山羊Prm1基因的表达规律及完整的CDS序列。; 李明昭刘超孙军伟朱海鲸曹晖吕晓仇普斌华进联; 关键词：关中奶山羊基因克隆

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曹晖