李祥宇
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 草莓镶脉病毒ORF Ⅵ基因的原核表达与抗血清制备被引量：4
- 2013年
- 为了分析草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)ORFⅥ基因的功能,采用原核表达技术获得该基因表达的重组蛋白并制备其抗血清。利用PCR技术扩增得到SVBV中国分离物的ORFⅥ基因,将此基因克隆到原核表达载体pET-SUMO上,获得重组质粒pET-SUMO-ORFⅥ。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导与Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为90 kD的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清,采用间接ELISA和Western blot方法测定抗血清的效价、反应灵敏度以及ORFⅥ基因在本氏烟中的瞬时表达。结果显示,间接ELISA法测定抗血清对重组蛋白的效价达1∶256 000,Western blot法能够检测到稀释64 000倍的重组蛋白。利用稀释2000倍的抗血清,仍能够检测出SVBV中国分离物和美国分离物ORFⅥ基因在本氏烟中瞬时表达的蛋白。
- 江彤谢朝阳丁菲李祥宇贾琳
- 关键词：草莓镶脉病毒ORF原核表达抗血清
- 侵染安徽玉米的水稻黑条矮缩病毒全基因组特征被引量：1
- 2015年
- [目的]测定水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV）安徽分离物全基因组序列,分析RBSDV安徽分离物与RBSDV其他分离物以及斐济病毒属（Fijivirus）其他成员之间的分子差异,为明确RBSDV遗传变异与进化规律提供重要信息.[方法]采用RT-PCR法从安徽玉米粗缩病样本中扩增RBSDV的全基因组,克隆、测序并进行序列分析.[结果]获得RBSDV安徽分离物全基因组序列.序列比对发现,RBSDV安徽分离物与其他RBSDV各个分离物S1到S10的序列相似性较高,为87.6%-99.5%,其中与RBSDV韩国分离物（RBSDV-KOR）序列相似性最高,达94.6%-99.5%;从构建的系统关系树也可以看出,RBSDV安徽分离物和其他所有RBSDV分离物均聚成一个单独的分支.[结论]RBSDV各分离物之间亲缘关系很近.RBSDV安徽分离物与RBSDV-KOR亲缘关系最近,可能起源于相同的祖先.另外,推测RBSDV各个基因组片段可能是协同进化的.
- 江彤何志龙李祥宇张享享
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒全基因组
- 南方水稻黑条矮缩病毒安徽分离物S7片段的克隆及其S7-1基因编码蛋白的原核表达被引量：2
- 2017年
- 为探讨南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的种群变异并获得S7-1原核表达蛋白,采用RT-PCR技术扩增SRBSDV安徽分离物S7片段,并进行克隆、测序及序列分析,再利用特异性引物扩增该分离物S7-1基因并克隆到原核表达载体p ET-GST上,重组质粒p ET-S7-1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导及Ni^(2+)-NTA亲和柱纯化融合蛋白,再进行Western blot检测。结果显示,SRBSDV安徽分离物S7片段与其它SRBSDV各个分离物S7片段的序列相似性极高,达99.3%~99.9%,而与斐济病毒属Fijivirus其它种之间的序列相似性较低,为35.5%~73.3%。SRBSDV安徽分离物与其它SRBSDV各个分离物聚成1个单独的分支,彼此间亲缘关系较近。试验获得了分子质量约为68 k D的S7-1融合蛋白,且GST单抗能够与S7-1融合蛋白发生特异性反应,表明本研究得到的融合蛋白确为靶标蛋白。
- 江彤何志龙张享享夏伟伟李祥宇
- 关键词：南方水稻黑条矮缩病毒克隆原核表达
- 安徽省水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的分子检测和序列分析被引量：2
- 2013年
- 近年来,水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)在安徽各稻区危害日益严重,生产上仅凭症状难以区分2种病毒。本研究建立的RT-PCR方法可以实现一次性检测和鉴定RBSDV和SRBSDV 2种病毒,根据RBSDV和SRBSDV S9保守序列设计3个引物,不仅可以从单独感染RBSDV或SRBSDV的水稻样本中分别扩增出1条大小不同的特异性条带,而且还可以从感染RBSDV和SRBSDV的混合水稻样本中一次性扩增出2条大小不同的特异性条带。从安徽省庐江县、郎溪县、怀宁县和宣州市4个地区水稻田采集表现明显矮缩病症状的水稻样本,RT-PCR检测结果表明,庐江和郎溪水稻样本受到RBSDV侵染,怀宁和宣州水稻样本受到SRBSDV侵染。选取庐江县、郎溪县、怀宁县和宣州市各1个水稻样本,利用RT-PCR扩增出特异性条带,再分别克隆和测序。序列分析表明,庐江、郎溪2个样本的核苷酸序列与RBSDV-Shandong和RBSDV-Zhjr S9部分片段序列相似性高达99.3%～99.8%,且与RBSDV的亲缘关系最近,说明庐江和郎溪样本感染的病毒是RBSDV的2个分离物;怀宁、宣州2个样本的核苷酸序列与SRBSDV-Shangdong和RBSDV-2 S9部分片段序列相似性高达99.5%,且与SRBSDV亲缘关系最近,说明怀宁和宣州样本感染的病毒是SRBSDV的2个分离物。
- 李祥宇闫德龙郑兆阳陈莉刘家成丁克坚江彤
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒南方水稻黑条矮缩病毒RT-PCR检测克隆
- 草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备被引量：1
- 2013年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序。结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸。将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2%。将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白。以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清。Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白。
- 蒋磊邓竹根谢朝阳杨友志李祥宇丁菲江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒克隆原核表达
- RBSDV和SRBSDV安徽分离物全基因组特征及SRBSDVmp基因的功能分析
- 近年来,水稻黑条矮缩病毒(Riceblack-streakeddwarfvirus,RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(Southernriceblack-streakeddwarfvirus,SRBSDV)引起的水稻黑...
- 李祥宇
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒南方水稻黑条矮缩病毒分子鉴定运动蛋白
- 文献传递
- 草莓镶脉病毒外壳蛋白的原核表达及多抗血清制备被引量：4
- 2012年
- PCR扩增得到了草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的外壳蛋白(coat protein,cp)基因,将SVBV cp基因克隆到原核表达载体pET-32a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为0.05 mmol·L-1的IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳及Western-blot分析表明,SVBV cp基因在大肠杆菌中得到了融合表达。利用Ni2+-NTA亲和树脂纯化重组融合蛋白,免疫家兔获得了重组蛋白的多抗血清。以此多抗血清建立了Dot-ELISA检测方法,结果表明,制备的特异性多抗血清可以快速检测出感病草莓样品中的SVBV。
- 江彤杨友志丁菲蒋磊李祥宇邓竹根谢朝阳宋培培
- 关键词：草莓镶脉病毒外壳蛋白原核表达
