邓竹根
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 利用dsRNA介导的抗病性获得抗马铃薯Y病毒(PVY)的转基因烟草被引量：6
- 2013年
- 为了获得抗马铃薯Y病毒(PVY)转基因烟草,分别扩增PVY HC-Pro基因3′端正、反向片段,构建反向重复植物表达载体。利用农杆菌介导法转化普通烟草(Nicotiana tabacum)云烟85,经抗性筛选及抗病性鉴定,获得T0代转基因抗病烟草株系。繁殖T0代抗病株系,抗病性鉴定发现,部分抗病株系的T1代烟株发生了一定比例的抗感分离。Real-time PCR检测发生抗感分离的T1代烟株,发现抗病烟株中PVY HC-Pro基因RNA积累水平显著低于感病烟株,说明抗病烟株中HC-Pro基因发生了RNA沉默。利用dsRNA技术沉默HC-Pro基因,获得了烟草品种云烟85的T1代转基因抗PVY株系。
- 江彤邓竹根宋培培陈伟丁菲贾琳
- 关键词：马铃薯Y病毒HC-PRO基因
- 草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备被引量：1
- 2013年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序。结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸。将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2%。将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白。以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清。Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白。
- 蒋磊邓竹根谢朝阳杨友志李祥宇丁菲江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒克隆原核表达
- 水稻条纹病毒安徽分离物NS3基因的克隆及其RNA沉默抑制子功能的初步鉴定
- 2013年
- 采集安徽马鞍山水稻条纹叶枯病感病稻株,TRIzol法提取样本总RNA,设计特异性引物进行RT-PCR扩增,获得水稻条纹病毒(RSV)安徽分离物的RNA3部分片段,克隆并测序。序列分析表明,该片段全长874 nts,含有完整的NS3基因,NS3基因序列长度为636 nts,编码211个氨基酸。序列比对发现,RSV安徽分离物NS3基因与来源于华东各省市RSV分离物NS3基因间的序列相似性高达97.6%～99.4%,而与RSV云南分离物NS3基因间的序列相似性相对较低,为93.4%～95.4%。构建RSV NS3基因系统关系树,发现RSV安徽分离物NS3基因与来源于华东各省市8个RSV分离物NS3基因聚成一个单独的分支,说明华东各省市各个RSV分离物亲缘关系最近。将RSV安徽分离物NS3基因插入植物表达载体pBIN438,构建重组植物表达载体pBIN-NS3并转化农杆菌。将含pBIN-NS3的农杆菌和含pBIN-GFP的农杆菌共浸润16c本氏烟叶片,6天后紫外灯下观察发现,共浸润区表现出强烈的绿色荧光,说明16c本氏烟GFP基因局部沉默被抑制,可以初步证明RSV安徽分离物编码的NS3蛋白是一个RNA沉默抑制子。
- 邓竹根丁菲贾琳宋培培江彤
- 关键词：水稻条纹病毒克隆RNA沉默抑制子
- 草莓镶脉病毒致病相关基因功能分析
- 病毒侵染寄主后,往往会引起寄主出现相应的症状表型,这种表型的出现往往与病毒编码的致病蛋白有关。研究证明草莓镶脉病毒(Strawberryveinbandingvirus,SVBV)编码的P6蛋白是一个弱RNA沉默抑制子,...
- 邓竹根
- 关键词：草莓镶脉病毒致病基因植物抗病基因
- 文献传递
- 草莓镶脉病毒编码的致病相关蛋白鉴定
- 草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)属于花椰菜花叶病毒科、花椰菜花叶病毒属(Caulimovirus).感染SVBV的弗吉尼亚草莓(Fragaria virginiana)...
- 邓竹根贾琳江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒致病机制
- 草莓镶脉病毒外壳蛋白的原核表达及多抗血清制备被引量：4
- 2012年
- PCR扩增得到了草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的外壳蛋白(coat protein,cp)基因,将SVBV cp基因克隆到原核表达载体pET-32a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为0.05 mmol·L-1的IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳及Western-blot分析表明,SVBV cp基因在大肠杆菌中得到了融合表达。利用Ni2+-NTA亲和树脂纯化重组融合蛋白,免疫家兔获得了重组蛋白的多抗血清。以此多抗血清建立了Dot-ELISA检测方法,结果表明,制备的特异性多抗血清可以快速检测出感病草莓样品中的SVBV。
- 江彤杨友志丁菲蒋磊李祥宇邓竹根谢朝阳宋培培
- 关键词：草莓镶脉病毒外壳蛋白原核表达
