杜秋江
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组腺病毒表达轮状病毒SA11毒株VP4蛋白及其糖基化被引量：4
- 2000年
- 目的 用重组人腺病毒表达经修饰的轮状病毒 VP4基因。方法 RT- PCR扩增全长 VP4基因 ,在基因 5′末端引入信号肽序列 ,将带信号肽顺序的 VP4基因插入到含人巨细胞病毒启动子质粒中 ,然后克隆带巨细胞病毒启动子和信号肽的 VP4基因到人腺病毒 5型转移载体上。用同源重组方法共转染 2 93细胞 ,点杂交 ,酶谱分析筛选重组病毒。结果 VP4全基因 2 36 2 bp未发现突变。间接免疫荧光试验表明 ,重组腺病毒所表达的外源蛋白具有特异性和较强抗原性 ,蛋白印迹及免疫沉淀试验证明 ,表达的蛋白相对分子质量大于野生型 VP4蛋白 ,符合糖化后应有的相对分子质量 ,且这种糖基化蛋白可被特异性酶所消化。结论 提高重组蛋白的稳定性、抗原性 ,进行目的基因改造也许是一条有效的途径。
- 孙茂盛昝云红马雁冰张光明杜秋江戴长柏
- 关键词：轮状病毒重组腺病毒糖基化作用
- 人白细胞介素11的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 1999年
- 从人胚肺二倍体细胞ＫＭＢ１７抽提总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增到人ＩＬ－１１ｃＤＮＡ，克隆于ｐＢＳ－ＳＫ，以双脱氧链终止法进行序列分析；扩增去除Ｎ 端第一个氨基酸的ＩＬ－１１ｃＤＮＡ，克隆于硫氧还蛋白融合表达载体ｐＴｈｉｏＨｉｓＡ，经过对表达质粒的改造，使融合表达的ＩＬ－１１能被肠激酶精确切割；表达产物经金属鏊合亲合层析后经肠激酶切，再通过阳离子交换层析纯化后，用其依赖细胞株７ＴＤ１检测活性．结果表明，克隆的ＩＬ－１１ｃＤＮＡ 序列与文献报道一致；表达的融合蛋白占菌体总蛋白的３０％ 左右，以可溶性形式存在；纯化产物具有维持依赖细胞株生长的能力．由此，获得了较高纯度的具有生物学活性的ｒｈＩＬ－１１，为中试生产奠定了基础．
- 杜秋江马雁冰刘红岩陈尔佳周丽姬秋彦李智华徐维明孙茂盛戴长柏
- 关键词：白细胞介素-11基因克隆大肠杆菌
- 乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究被引量：3
- 1999年
- 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列，将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中，位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游．重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达．用纯化后的重组质粒直接注射到ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌内，诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体．
- 陈尔佳孙茂盛杜秋江庄俊英王立言戴长柏郭仁
- 关键词：基因免疫乙型肝炎病毒DNA免疫HBV
- 恒河猴与人GDNF基因的直接全血PCR克隆及序列分析被引量：1
- 1998年
- 利用微量全血直接进行ＰＣＲ扩增，克隆到了猴与人的ＧＤＮＦ基因，经全序列分析证实人ＧＤＮＦ （ｈＧＤＮＦ）基因全部正确，猴 ＧＤＮＦ（ＲｈＧＤＮＦ ＧｅｎＢａｎｋ ＡＦ１０６６７８）基因与人 ＧＤＮＦ基因高度同源，在 ＤＮＡ的 成熟蛋白编码区中二者有７个核苷酸不同，而蛋白中仅有两个氨基酸差异．该研究为ＧＤＮＦ的重组表达及进 一步研究ＧＤＮＦ蛋白的结构与生物学功能打下基础．简要探讨了全血量对ＰＣＲ扩增结果的影响，并对脊椎动 物进化中ＧＤＮＦ的保守性作了比较．
- 陈尔佳杜秋江刘勇谭德勇孙茂盛戴长柏
- 关键词：GDNFPCR恒河猴
- 表皮生长因子对脊髓灰质炎病毒增殖的影响被引量：1
- 1992年
- 在细胞培养维持液中,加入人表皮生长因子(h-EGF),观察在不同温度下、不同浓度EGF 对脊髓灰质炎病毒生长繁殖的情况。结果发现,维持液中加含10～100ng/ml EGF,能获得最高感染滴度,高于100ng/ml 则有所下降,5ng/ml 时与对照组无差别。在36℃培养的滴度高于33℃,病毒滴度变化与温度呈平行关系。所培养的子代病毒,可被抗脊髓灰质炎Ⅰ型血清中和。10ng～100ng/ml 浓度的 EGF 对细胞不产生毒性作用。
- 戴长柏孙茂盛咎云红王丽春胡凝珠杜秋江彭晓忠
- 关键词：表皮生长因子脊髓灰质炎病毒病毒滴度
