杜道海
- 作品数：5 被引量：20H指数：2
- 供职机构：上海海洋大学水产与生命学院农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会创新基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 缺刻缘绿藻表达序列标签分析及ω-3脂肪酸去饱和酶基因cDNA全长的克隆
- 缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa Reisigl)是一种淡水单细胞微藻，隶属于绿藻门Trebouxiophyceae纲。细胞呈球形或卵圆形，常以菲定形群体形式聚集生长。藻细胞能大量积累以三酰甘油(TAG)形式结...
- 杜道海
- 关键词：缺刻缘绿藻序列标签Ω-3脂肪酸酶基因
- 文献传递
- 缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因的特性以及在氮限制条件下相对转录量的分析
- 根据莱茵衣藻（Chlorella vulgaris）和普通小球藻（C.reinhardtii）的ω3脂肪酸去饱和酶的氨基酸序列（登录号分别为ABL09485和BAB78717）的保守区（TMFWALF和HHDIGTH）设...
- 李春阳杜道海于水燕周志刚
- 关键词：缺刻缘绿藻荧光定量PCR
- 文献传递
- 缺刻缘绿藻总RNA提取方法的比较研究被引量：15
- 2008年
- 为了获得高质量的缺刻缘绿藻总RNA,采用CTAB法、TRIzol法和RNAplant法3种方法对该藻总RNA的提取效果进行比较分析。结果表明,采用CTAB法提取获得的总RNA产率最高,但因可能含有较多的蛋白质、多糖等杂质使得纯度最低;TRIzol法提取的总RNA纯度较CTAB法稍高,但产率最低,且仍含有DNA带;RNAplant法提取的总RNA电泳图清晰,OD260nm/OD280nm值为2.0,高于前2种方法,产率在2种方法之间,表明RNAplant法更适于缺刻缘绿藻总RNA的提取。对后者提取的总RNA,经反转录合成的cDNA产物大小在500 bp^2 kb,并能通过RT-PCR获得18 SrRNA基因的特异性片段,进一步说明利用RNAplant法可为基因克隆、表达分析等后续研究提供高质量的RNA。
- 杜道海周志刚
- 关键词：缺刻缘绿藻RNA提取反转录聚合酶链式反应
- 缺刻缘绿藻cDNA文库的构建被引量：1
- 2008年
- 缺刻缘绿藻（Myrmecia incise）富含花生四烯酸（arachidonic acid，AA），是迄今为止所知道的花生四烯酸含量最高的藻类。采用Trizol法提取总RNA，然后按照Clontech公司的SMART cDNA文库构建的方法，构建了缺刻缘绿藻的cDNA文库，测得的原始文库滴度为6×10^6pfu／mL，随机挑选文库的阳性单克隆进行PCR鉴定，扩增出的片段主要集中在0．5-1．5kb，平均插入片段长度约为1kb，文库的重组率达95．83％，说明本实验所构建的cDNA文库质量合格。
- 刘士成杜道海张成武周志刚
- 关键词：缺刻缘绿藻CDNA文库花生四烯酸
- 缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因的特性及在氮饥饿过程中相对转录量的分析被引量：6
- 2010年
- 根据莱茵衣藻和普通小球藻ω3脂肪酸去饱和酶氨基酸序列(GenBank登录号分别为ABL09485和BAB78717)的保守区(TMFWALF和HHDIGTH)设计简并引物,以缺刻缘绿藻H4301总RNA为模板,通过反转录PCR和cDNA末端快速克隆技术(RACE),克隆了缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因的cDNA全长序列(GenBank登录号:EU658930),它与莱茵衣藻的这个基因具有69%相似性。该基因cDNA序列长2330bp,其中5'-非翻译区长107bp;3'-非翻译区912bp,且具有明显的poly(A)尾巴;开放阅读框1311bp,编码一个436个氨基酸的蛋白质,分子量为49.06ku,等电点7.85;该基因编码的蛋白为膜结合蛋白,含有2个疏水区域和3个保守的组氨酸簇基序。将该基因的cDNA序列与其DNA序列比对后,发现该基因在其编码区存在6个内含子,剪切位点均符合"GT-AG"规则。实时荧光定量PCR结果显示,在氮饥饿培养过程中,缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因的相对转录量在4h时可能因休克显著提高(P<0.05),然后开始下调,12h开始显著下降(P<0.05),并在20h降到最低(约为完全培养基的11.6%),此后保持在低水平(为完全培养基的23.2%)波动(P<0.01)。脂肪酸组分的气相色谱结果表明,在氮饥饿培养过程中,花生四烯酸占总脂肪酸的百分含量逐步提高,而作为多不饱和脂肪酸ω3合成途径的产物,如α-亚麻酸和十六碳三烯酸(16∶3ω3)的百分含量在40h或96h后都显著降低(P<0.05)。这些结果表明缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因在氮饥饿过程中的相对低转录量,导致ω3合成途径相关产物百分含量的降低,确保了该藻沿着ω6途径来合成与积累花生四烯酸以提高其百分含量。另外,十六碳二烯酸(16∶2ω6)、亚油酸及花生四烯酸都可能是该克隆基因所编码ω3脂肪酸去饱和酶的反应底物。
- 李春阳杜道海于水燕李慧刘凡周志刚
- 关键词：缺刻缘绿藻实时荧光定量PCR脂肪酸
