皇甫永穆
- 作品数：61 被引量：212H指数：9
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科技专项基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 宫颈癌细胞产生的TDSF对IL－2的免疫抑制作用
- 1996年
- 人宫颈癌细胞产的免疫抑制因子（ＴＤＳＦ）作用于人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）６小时，即可抑制ＩＬ－２产生，与对照组相比Ｐ＜０．０１。当ＴＤＳＦ存在时，经激活的ＰＢＭＣ效应细胞对外源性ＩＬ－２反应显著减弱，表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２的作用。ＰＨＡ－Ｐ刺激ＰＢＭＣ增殖，但ＴＤＳＦ使其增殖抑制。表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２产生及其作用。抗癌药对ＴＤＳＦ的分泌有部分阻抑作用。
- 汪少娟杨业金周火明皇甫永穆陈兆聪章汉旺
- 关键词：宫颈肿瘤免疫抑制因子白细胞介素
- 人结核杆菌热休克蛋白70启动子对外源基因在分枝杆菌中表达的影响被引量：6
- 1997年
- 利用聚合酶链反应技术（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增得到１５０ｂｐ的人结核杆菌热休克蛋白（Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）７０启动子和约６５０ｂｐ的外源基因日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）的ｃＤＮＡ片段。并采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定了人结核杆菌ＨＳＰ７０起始密码ＡＴＧ上游１５０ｂｐ的启动子序列。在这一区域可见与大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）－３５和－１０区同源的碱基顺序ＴＴＧＡＧ和ＡＴＣＡＴＡ，以及ＡＴＧ上游－１２～－８处的核糖体结合位点ＧＧＡＧＧ。然后将人结核杆菌ＨＳＰ７０启动子和日本血吸虫ＧＳＴ编码基因克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中，构成能表达日本血吸虫ＧＳＴ基因的Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达载体ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６。电转化耻垢分枝杆菌后，用卡那霉素筛选出阳性重组子。含有ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６的耻垢分枝杆菌在热和过氧化氢的作用下均诱导出ＧＳＴ的表达。其表达产物分子量为２６×１０３，经聚丙烯酰胺凝胶（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）后，扫描分析，表明重组ＧＳＴ（ｒＧＳＴ）占菌体总蛋白的１０％。本研究为Ｈ?
- 程继忠皇甫永穆冯作化梁驹卿肖红
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白启动子基因表达
- 热毒清拮抗内毒素损伤线粒体的实验研究
- 1990年
- 本实验制作内毒素所致家兔DIC模型。观察到肝细胞线粒体在超微结构和功能方面均受到明显损害。而应用热毒清注射液之模型动物肝细胞超微结构基本正常;线粒体呼吸功能、ATP酶,肝匀浆和血清过氧化脂质(LPO)接近正常,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)或<0.05)。体外实验与体内实验结果一致,从而提示热毒清有拮抗内毒素损伤线粒体的功能。
- 陆付耳李鸣真叶望云皇甫永穆梁驹卿
- 关键词：热毒清内毒素线粒体
- 中药热毒清对淋巴细胞膜流动性和DNA合成的影响
- 1990年
- 本文观察了中药热毒清对小鼠脾脏淋巴细胞膜流动性及淋巴细胞DNA合成的影响,并与伴刀豆球蛋白(ConA)和植物血凝素(PHA)的作用进行比较。结果表明:热毒清使脾混合淋巴细胞或T淋巴细胞膜的流动性升高,并能拮抗ConA或PHA诱导的使膜流动性降低的效应。体外,热毒清抑制ConA转化小鼠淋巴细胞的能力,随浓度加大而增强。上述生物效应,在整体实验中并不明显。
- 杨渝珍陈春莲夏献民皇甫永穆
- 关键词：热毒清淋巴细胞DNA膜流动性
- 日本血吸虫26ku抗原基因在分枝杆菌和大肠杆菌中的高效表达被引量：5
- 1996年
- 构建了大肠杆菌一分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000,并将日本血吸虫26ku抗原(Sj26GST)基因在分枝杆菌中进行了克隆和表达.以质粒pBluescript sk为骨架,分别克隆入分枝杆菌质粒复制基因、Neo基因(编码卡那霉素抗性)以及人结核杆菌热休克蛋白70(heat shock protein,hsp70)的启动子,并带有质粒pBluescript的多克隆位点,构建成分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG-2000.该重组质粒在分枝杆菌、大肠杆菌两个系统中均能稳定复制,并表达卡那霉素抗性.再以大肠杆菌表达质粒pGEX衍生质粒为模板,经过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)得到编码日本血吸虫26ku抗原的全长DNA顺序.将其按正确的阅读框顺序,精确克隆到分枝杆菌hsp70的启动子下游,最终构建成能高效表达Sj26GST的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG-Sj26.所表达的天然重组Sj26GST(rSi26GST)为可溶性蛋白,在SDS-PAGE上分子量为26ku处可见明显的表达蛋白带.提示生长缓慢的人结核杆菌hsp70的启动子能被快速生长的耻垢分枝杆菌RNA聚合酶所识别.通过薄层扫描分析,其表达效率分别占大肠杆菌、分枝杆菌菌体总蛋白的25%～37%和18%.本研究为外源基因在卡介苗(Bacille Calmette-Gu(?)rin,BCG)中的表达以及把分枝杆菌和BCG发展成为多价疫苗载体奠定了基础.
- 程继忠皇甫永穆梁驹卿陈秋生
- 关键词：分枝杆菌穿梭质粒日本血吸虫基因表达
- 采用T7启动子系统在大肠杆菌中高效表达人白细胞介素2被引量：1
- 1996年
- 将人白细胞介素2(interleukin 2.IL-2)cDNA重组于含T7启动子的表达质粒,转化专用受体菌后得到工程菌,使IL-2在大肠杆菌中的表达效率(表达产物在菌体总蛋白中所占比例)提高到32.0%,包涵体的纯度提高到82.0%,便于IL-2变性溶解与重新折叠以恢复活性.以乳糖替代异丙基硫代-β-半乳糖苷作诱导剂可获得同样的结果,使诱导剂成本降低数百倍.新的工程菌更适合用于制备基因工程人IL-2.
- 李东冯作化皇甫永穆张桂梅
- 关键词：大肠杆菌白细胞介素2
- 卡介苗基因组的克隆
- 1996年
- 以质粒pUC19为载体克隆了卡介苗(即卡介菌,BCG)DNA.Sau3Al部分酶解BCG DNA,通过琼脂糖电泳分离2～9Kb DNA片段.BamHl酶切质粒pUC19,碱性磷酸酶去磷酸化.2～9kb DNA片段与pUC19载体用T4连接酶连接转化大肠杆菌HB101,在含氨苄青霉素(Amp)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的LB平板上获得抗Amp白色转化子.随机挑选12个转化子快速提取重组子、电泳检查结果:其中8个分子量扩大.选择5个分子量扩大重组子经BamHl酶切,电泳分析表明DNA插入片段约在2～7kb之间.
- 梁驹卿皇甫永穆周火明张大军程继忠
- 关键词：卡介苗基因组质粒克隆结核菌苗
- 白血病细胞培养上清液中肿瘤免疫抑制因子的分离与初步鉴定
- 1993年
- 从HL_(60)人早幼粒细胞白血病细胞株培养上清液(HL_(60)-SUP)中,经10％～50％饱和硫酸铵沉淀、DEAE-52(DE-52)阴离子交换柱层析、凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离出一种肿瘤免疫抑制因子(TDSF),分子量约为87kD(1D=0.992 1μ)。该因子是瘤细胞恶性增殖过程中的基因产物,但其分泌不完全被抗急非淋白血病药物所阻断。肿瘤细胞培养上清液无细胞毒作用。TDSF有兔疫抑制作用:能够抑制T淋巴细胞对PHA的增殖反应,抑制T淋巴细胞分泌IL_2,抑制外源性IL_2的淋巴细胞的增殖反应,其化学本质为蛋白质。
- 杨业金皇甫永穆陈兆聪
- 关键词：白血病免疫抑制因子肿瘤细胞
- 分枝杆菌穿梭表达质粒的构建及外源基因在分枝杆菌中的稳定表达被引量：1
- 1995年
- 卡介苗（ＢＣＧ）是全球应用最广泛的疫苗，也是一种能携带多种致病菌保护性抗原表达的疫苗载体。本研究以ｐＵＣ１９为骨架，分别克隆入ＢＣＧ分泌抗原８５－Ｂ的调节和信号肽序列、Ｎｅｏ基因序列（编码卡那霉素抗性）以及分枝杆菌质粒复制基因，构建成分枝杆菌－大肠杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－８０００。该重组质粒在分枝杆菌（含ＢＣＧ）、大肠杆菌两个系统中均能稳定复制，并能稳定表达卡那霉素抗性。本研究为把ＢＣＧ和其它分枝杆菌发展成为多价疫苗载体打下了基础。
- 张大军皇甫永穆钱明梁驹卿李东
- 关键词：分枝杆菌穿梭质粒卡介苗基因表达
- 人白细胞介素2基因在大肠杆菌中表达水平的提高及产物初步纯化被引量：2
- 1994年
- 利用双Tac启动子和改造后的人白细胞介素2（IL－2）cDNA，提高了IL－2在大肠杆菌（E．Coli）中的表达水平，并经包涵体制备、分子重新折叠及分子筛层析等技术，对表达的IL－2进行了提取、活性恢复与纯化，纯度可达95％。本工作为用基因工程方法生产人IL－2积累了经验。
- 冯博王光惠李萍张大军李东皇甫永穆
- 关键词：基因表达大肠杆菌白细胞介素2
