梁驹卿
- 作品数：21 被引量：75H指数：5
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- 卡介苗－抗原85－B基因的信号肽序列的克隆和鉴定
- 1996年
- 目的克隆和鉴定卡介苗－抗原８５－Ｂ（ＢＣＧ－Ａｇ８５－Ｂ）基因的信号肽序列。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对ＢＣＧ的主要分泌抗原Ａｇ８５－Ｂ基因的５′端第９４～２１１的核苷酸的信号肽序列进行扩增，再将１１７ｂｐ的扩增片段克隆到质粒ｐＢｌｕｅｃｒｉｐｔＳＫ的ＳａｃＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点，并对此片段进行定序。结果序列分析表明，扩增的信号肽序列无碱基错配，同时在信号肽３′端下游可提供携带外源基因的１２个多克隆位点。结论构建一含信号肽序列的重组质粒（ＢＣＧ－ＳＯ１）。
- 曾星王光蕙路艳艳梁驹卿皇甫永穆
- 关键词：卡介苗克隆
- 人结核杆菌热休克蛋白70启动子对外源基因在分枝杆菌中表达的影响被引量：6
- 1997年
- 利用聚合酶链反应技术（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增得到１５０ｂｐ的人结核杆菌热休克蛋白（Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）７０启动子和约６５０ｂｐ的外源基因日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）的ｃＤＮＡ片段。并采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定了人结核杆菌ＨＳＰ７０起始密码ＡＴＧ上游１５０ｂｐ的启动子序列。在这一区域可见与大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）－３５和－１０区同源的碱基顺序ＴＴＧＡＧ和ＡＴＣＡＴＡ，以及ＡＴＧ上游－１２～－８处的核糖体结合位点ＧＧＡＧＧ。然后将人结核杆菌ＨＳＰ７０启动子和日本血吸虫ＧＳＴ编码基因克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中，构成能表达日本血吸虫ＧＳＴ基因的Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达载体ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６。电转化耻垢分枝杆菌后，用卡那霉素筛选出阳性重组子。含有ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６的耻垢分枝杆菌在热和过氧化氢的作用下均诱导出ＧＳＴ的表达。其表达产物分子量为２６×１０３，经聚丙烯酰胺凝胶（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）后，扫描分析，表明重组ＧＳＴ（ｒＧＳＴ）占菌体总蛋白的１０％。本研究为Ｈ?
- 程继忠皇甫永穆冯作化梁驹卿肖红
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白启动子基因表达
- 热毒清拮抗内毒素损伤线粒体的实验研究
- 1990年
- 本实验制作内毒素所致家兔DIC模型。观察到肝细胞线粒体在超微结构和功能方面均受到明显损害。而应用热毒清注射液之模型动物肝细胞超微结构基本正常;线粒体呼吸功能、ATP酶,肝匀浆和血清过氧化脂质(LPO)接近正常,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)或<0.05)。体外实验与体内实验结果一致,从而提示热毒清有拮抗内毒素损伤线粒体的功能。
- 陆付耳李鸣真叶望云皇甫永穆梁驹卿
- 关键词：热毒清内毒素线粒体
- 日本血吸虫26ku抗原基因在分枝杆菌和大肠杆菌中的高效表达被引量：5
- 1996年
- 构建了大肠杆菌一分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000,并将日本血吸虫26ku抗原(Sj26GST)基因在分枝杆菌中进行了克隆和表达.以质粒pBluescript sk为骨架,分别克隆入分枝杆菌质粒复制基因、Neo基因(编码卡那霉素抗性)以及人结核杆菌热休克蛋白70(heat shock protein,hsp70)的启动子,并带有质粒pBluescript的多克隆位点,构建成分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG-2000.该重组质粒在分枝杆菌、大肠杆菌两个系统中均能稳定复制,并表达卡那霉素抗性.再以大肠杆菌表达质粒pGEX衍生质粒为模板,经过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)得到编码日本血吸虫26ku抗原的全长DNA顺序.将其按正确的阅读框顺序,精确克隆到分枝杆菌hsp70的启动子下游,最终构建成能高效表达Sj26GST的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG-Sj26.所表达的天然重组Sj26GST(rSi26GST)为可溶性蛋白,在SDS-PAGE上分子量为26ku处可见明显的表达蛋白带.提示生长缓慢的人结核杆菌hsp70的启动子能被快速生长的耻垢分枝杆菌RNA聚合酶所识别.通过薄层扫描分析,其表达效率分别占大肠杆菌、分枝杆菌菌体总蛋白的25%～37%和18%.本研究为外源基因在卡介苗(Bacille Calmette-Gu(?)rin,BCG)中的表达以及把分枝杆菌和BCG发展成为多价疫苗载体奠定了基础.
- 程继忠皇甫永穆梁驹卿陈秋生
- 关键词：分枝杆菌穿梭质粒日本血吸虫基因表达
- 卡介苗基因组的克隆
- 1996年
- 以质粒pUC19为载体克隆了卡介苗(即卡介菌,BCG)DNA.Sau3Al部分酶解BCG DNA,通过琼脂糖电泳分离2～9Kb DNA片段.BamHl酶切质粒pUC19,碱性磷酸酶去磷酸化.2～9kb DNA片段与pUC19载体用T4连接酶连接转化大肠杆菌HB101,在含氨苄青霉素(Amp)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的LB平板上获得抗Amp白色转化子.随机挑选12个转化子快速提取重组子、电泳检查结果:其中8个分子量扩大.选择5个分子量扩大重组子经BamHl酶切,电泳分析表明DNA插入片段约在2～7kb之间.
- 梁驹卿皇甫永穆周火明张大军程继忠
- 关键词：卡介苗基因组质粒克隆结核菌苗
- 分枝杆菌穿梭表达质粒的构建及外源基因在分枝杆菌中的稳定表达被引量：1
- 1995年
- 卡介苗（ＢＣＧ）是全球应用最广泛的疫苗，也是一种能携带多种致病菌保护性抗原表达的疫苗载体。本研究以ｐＵＣ１９为骨架，分别克隆入ＢＣＧ分泌抗原８５－Ｂ的调节和信号肽序列、Ｎｅｏ基因序列（编码卡那霉素抗性）以及分枝杆菌质粒复制基因，构建成分枝杆菌－大肠杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－８０００。该重组质粒在分枝杆菌（含ＢＣＧ）、大肠杆菌两个系统中均能稳定复制，并能稳定表达卡那霉素抗性。本研究为把ＢＣＧ和其它分枝杆菌发展成为多价疫苗载体打下了基础。
- 张大军皇甫永穆钱明梁驹卿李东
- 关键词：分枝杆菌穿梭质粒卡介苗基因表达
- 热毒清抗内毒素所致溶酶体和线粒体损伤的实验研究被引量：29
- 1989年
- 本实验制作内毒素所致家兔 DIC 模型,观察到肝细胞溶酶体和线粒体在超微结构与功能方面均受到明显损害。而应用热毒清(原名"抗炎6号")注射液之模型的动物肝细胞超微结构基本正常,溶酶体标志酶酸性磷酸酶(ACP)明显减低;线粒体呼吸功能、ATP 酶、过氧化脂质接近正常,与模型组比较差异非常显著。体外实验结果一致。提示热毒清有拮抗内毒素所致溶酶体和线粒体损伤的功能。
- 李鸣真叶望云皇甫永穆邓益明陆付耳梁驹卿
- 关键词：热毒清内毒素溶酶体线粒体
- 高胆固醇高脂肪膳食对家兔β-VLDL组成及其与巨噬细胞相互作用的影响的初步研究被引量：2
- 1989年
- 给家兔喂以1％胆固醇及10％菜油(A组)或猪油(B组)50多天后A组血胆固醇水平(824.2±265.1mg/dl)明显低于B组(1666±693.8mg/dl);A组甘油三酯水平(51.9±19.1mg/dl)亦低于B组(104±40.2mg/dl)。二组家兔的β—VLDL的脂类组成无差别,但A组β—VLDL的apoE高于B组,分别为45.2％及37.5％。高分子量apoB(apoB_h)为33.6％,低于B组β-VLDL(47.3％)。A组β-VLDL促进小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇堆积的程度大于B组,可能与apoE含量高有关。我们认为多不饱和脂酸减轻动脉粥样硬化(As)的作用不在于改变脂蛋白构成后阻碍泡沫细胞的形成而是促进β—VLDL从体内清除。
- 冯宗忱王式平冯友梅吴万生王淳本江卫国戴五星梁驹卿
- 关键词：巨噬细胞
- 日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达、纯化与应用被引量：3
- 1998年
- 利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达、纯化、鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ，其片段长度均为６５４ｂｐ。通过双脱氧测序结果显示两者碱基排列顺序相同。用大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）表达载体在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ占菌体总蛋白的２５％。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析柱一步纯化法，得到纯品Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，将其作为靶抗原用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测血吸虫大陆株感染者和感染小鼠血清及用Ｓｊｃ２６ＧＳＴ免疫的小鼠血清，反应均为阳性。本研究提示Ｓｊｐ２６ＧＳＴ与Ｓｊｃ２６ＧＳＴ在ＤＮＡ序列、氨基酸顺序和抗原性等方面高度同源。
- 程继忠梁驹卿肖红肖红皇甫永穆
- 关键词：日本血吸虫纯化RT-PCR
- 一种快速简便的卡介苗基因组DNA提纯方法被引量：1
- 1995年
- 一种快速简便的卡介苗基因组ＤＮＡ提纯方法同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室，武汉４３００３０梁驹卿，周火明，张大军，李东，皇甫永穆关键词卡介苗；基因组ＤＮＡ；ＤＮＡ提纯中图法分类号Ｒ３９２－３３．Ｑ３４３．１卡介苗（ＢＣＧ）除广泛用于预...
- 梁驹卿周火明张大军李东皇甫永穆
- 关键词：卡介苗基因组DNADNA提纯
