许小朋
- 作品数：27 被引量：53H指数：4
- 供职机构：常州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 人T-bet基因的表达、纯化及其免疫原性分析
- 2007年
- 目的:利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人T-bet基因全长序列,并对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体。方法:利用PCR技术从克隆载体pGEM-T/T-bet获得人T-bet的全长编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pT-bet;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌JM109,测序鉴定后转化M15,经IPTG 37℃诱导4 h后,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色判断以包涵体形式存在的带有6×His标签的融合蛋白(表达产物),用Ni2+-IMAC层析柱对融合蛋白进行纯化;将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备人T-bet的多克隆抗体。结果:成功表达和纯化了人T-bet,并制备了多克隆抗体,ELISA和Western blot结果显示了血清抗体的高效价(1∶100 000)和高度特异性。结论:成功构建了原核表达载体pT-bet,并在工程菌M15中获得大量表达,经纯化后获得高纯度的人T-bet蛋白,制备了效价和特异性良好的多克隆抗体,为进一步研究T-bet的生物学功能奠定了的基础。
- 杨敏王胜军王锁英许小朋邱谷风苏兆亮邵启祥黄新祥许化溪
- 关键词：原核表达蛋白纯化免疫原性
- 人T-bet基因转染U937探讨T-bet对白血病细胞的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨人T-bet基因在白血病细胞株U937中的表达及其对IFN-γ分泌的影响,寻求通过免疫调节改善白血病患者机体免疫状态的可能性。方法采用电穿孔技术将重组人pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)质粒转染U937细胞,RT-PCR检测转染前后U937细胞T-bet的mRNA水平;westen-blot检测表达的T-bet蛋白;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。试验中同时设立pIRES-eGFP质粒为对照。结果电穿孔转染U937细胞后,在荧光显微镜下观察到带荧光的细胞(转染细胞),其荧光细胞阳性率80%左右,提示转染成功;转染T-bet的U937细胞,分别经RT-PCR及westen-blot检测到T-bet的mRNA和表达的蛋白,而未经转染或转染对照质粒pIRES-eGFP的细胞,均未见目的基因的转录和蛋白表达;T-bet转染细胞的培养上清中含有较高水平的IFN-γ,而转染前及对照质粒转染的细胞IFN-γ的分泌水平极低。结论通过电穿孔方法成功将人T-bet基因转染到白血病细胞株U937中,并检测到大量IFN-γ的产生。T-bet是免疫应答调节的重要转录因子,对其研究将有助于进一步探讨T-bet基因或其表达产物作为Th1应答的调节剂用于临床血液病治疗的可能性。
- 许小朋王锁英杨敏邱谷风王胜军邵启祥许化溪
- 关键词：基因转染T-BET干扰素ΓU937
- CpG-ODN对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞T-bet表达的影响
- 目的:探讨CpG-ODN干预对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞(PBMC)T-bet表达和IFN-γ分泌的影响。方法:对28例喘息性支气管炎(喘支组)患儿于急性期和恢复期分别抽取抗凝静脉血并分离PBMC,以终浓度为1...
- 王锁英许化溪杨敏许小朋邱谷风李国民张贇健马洁眭建姜旭淦胡嘉波
- 关键词：婴幼儿喘息性支气管炎CPG-ODNT-BET外周血单个核细胞
- 转录因子T-bet和GATA-3对婴幼儿喘息性支气管炎免疫调控作用的初步研究
- 目的:初步探讨转录因子T-bet和GATA-3对小儿喘息性支气管炎的免疫凋控作用。方法:对32 例小儿喘息性支气管炎(喘支组)和30例正常儿童(对照组)抽取抗凝静脉血5ml,Ficoll分离外周血淋巴细胞,以终浓度为10...
- 王锁英张赟健忻悦许小朋杨敏邱谷凤马洁眭建许化溪
- 关键词：婴幼儿喘息性支气管炎GATA-3T-BET免疫调控
- 常州地区过敏性鼻炎儿童吸入性过敏原分析被引量：8
- 2014年
- 目的：分析常州地区过敏性鼻炎患儿吸入性过敏原检测结果及不同年龄组过敏原分布情况。方法采用德国敏筛过敏原检侧系统（Allergy Screen）测定473例0～12岁过敏性鼻炎患儿血清中过敏原特异性 IgE 抗体水平。根据年龄分为婴幼儿组（0～3岁）、学龄前儿童（4～6岁）和学龄儿童（7～12岁），并比较不同年龄组过敏原阳性率及变化趋势。结果473例患儿过敏原阳性340例（71.9％），前三位过敏原分别是户尘螨（55.6％）、混合真菌（25.8％）和屋尘（18.8％），随年龄增长阳性率均呈升高趋势。其中户尘螨（χ2＝21.061，P ＝0.000）、屋尘（χ2＝15.111，P ＝0.000）和猫狗毛皮屑（χ2＝7.597，P ＝0.022）组间分布比较差异有统计学意义。单一过敏原阳性率最高（38.5％），第二位为双重过敏原阳性（23.7％）。单一过敏原阳性前三位与各类过敏原总体阳性排序相同。最常见双重过敏原是户尘螨＋屋尘组合，多重过敏原阳性率组间分布差异有统计学意义（χ2＝13.399，P ＝0.001）。结论常州地区过敏性鼻炎患儿吸入性过敏原以户尘螨、混合真菌和屋尘为主，阳性率随年龄增长呈上升趋势，不同年龄组过敏原构成有差异，单一过敏原阳性最常见，其次为双重过敏原阳性。
- 许小朋史梅史伟峰
- 关键词：变应性鼻炎儿童
- HPV实验用标本震荡装置
- 本实用新型属于标本震荡技术领域，尤其为HPV实验用标本震荡装置，包括壳体，所述壳体内壁的底部开设有腔体，所述腔体内壁的底部固定连接有轴承和驱动电机；本实用新型，通过驱动电机工作带动主动齿轮转动，通过主动齿轮与从动齿轮的啮...
- 许小朋
- 人AITRL基因克隆和序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆人AITRL基因cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从人脐静脉内皮细胞株中获得AITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定。结果:扩增得到的AITRL基因cDNA为534 bp,编码177个氨基酸残基,与GenBank中公布的序列完全一致。结论:获得人AITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了良好基础。
- 毛朝明王胜军蒋茜马洁杨敏仝佳许小朋邱谷风唐莉邵启祥许化溪
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR人脐静脉内皮细胞
- 胶乳增强免疫比浊法在甲胎蛋白测定的方法学评价被引量：1
- 2011年
- 目的对胶乳增强免疫比浊法（LEIA法）测定甲胎蛋白（AFP）水平，并进行方法学评价。方法用LEIA法测定178例血清的AFP水平，同时采用化学发光免疫分析仪法（CLIA法）对AFP水平进行测定。结果LEIA法测定AFP的灵敏度为0．65ng／mL，低、中、高水平的批内CV分别为0．98％、0．92％、0．89％；批间CV分别为1．63％、1．53％、1．45％。回收率96．3％～102．9％。结论LEIA法是测定AFP较好的方法，适合普及推广。
- 陆晓荣吴钢郝渭滨王履洁许小朋
- 关键词：甲胎蛋白胶乳增强免疫比浊法
- 一种检验科用防污染存储装置
- 本实用新型公开了一种检验科用防污染存储装置，包括储存箱，所述储存箱的内部靠近前端中心处设置有转动杆，所述转动杆的中心位置固定套接有转盘，所述转盘的上端面开设有若干个试管孔，所述转动杆的下端与储存箱内底部转动连接，所述转动...
- 许小朋金磊
- 人T-bet基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2006年
- 目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆;应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。结果:扩增得到的T-bet基因cDNA全长1 670 bp,包括编码区1 607 bp,编码530个氨基酸残基,与Gen-bank中发表的序列完全一致。结论:获得了人T-bet基因的克隆,为进一步研究其生物学功能构建了基础平台,为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。
- 杨敏王锁英王胜军马洁毛朝明邱谷风许小朋邵启祥许化溪
- 关键词：T-BET基因CDNA克隆RT-PCR
