邱谷风
- 作品数：12 被引量：31H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞因子和抗细胞因子与自身免疫性疾病研究进展
- 2006年
- 邱谷风许化溪苏兆亮
- 关键词：自身免疫性疾病抗细胞因子疾病研究诱导免疫应答细胞因子治疗重组体
- 人AITRL基因克隆和序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆人AITRL基因cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从人脐静脉内皮细胞株中获得AITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定。结果:扩增得到的AITRL基因cDNA为534 bp,编码177个氨基酸残基,与GenBank中公布的序列完全一致。结论:获得人AITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了良好基础。
- 毛朝明王胜军蒋茜马洁杨敏仝佳许小朋邱谷风唐莉邵启祥许化溪
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR人脐静脉内皮细胞
- 人T-bet基因转染U937探讨T-bet对白血病细胞的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨人T-bet基因在白血病细胞株U937中的表达及其对IFN-γ分泌的影响,寻求通过免疫调节改善白血病患者机体免疫状态的可能性。方法采用电穿孔技术将重组人pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)质粒转染U937细胞,RT-PCR检测转染前后U937细胞T-bet的mRNA水平;westen-blot检测表达的T-bet蛋白;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。试验中同时设立pIRES-eGFP质粒为对照。结果电穿孔转染U937细胞后,在荧光显微镜下观察到带荧光的细胞(转染细胞),其荧光细胞阳性率80%左右,提示转染成功;转染T-bet的U937细胞,分别经RT-PCR及westen-blot检测到T-bet的mRNA和表达的蛋白,而未经转染或转染对照质粒pIRES-eGFP的细胞,均未见目的基因的转录和蛋白表达;T-bet转染细胞的培养上清中含有较高水平的IFN-γ,而转染前及对照质粒转染的细胞IFN-γ的分泌水平极低。结论通过电穿孔方法成功将人T-bet基因转染到白血病细胞株U937中,并检测到大量IFN-γ的产生。T-bet是免疫应答调节的重要转录因子,对其研究将有助于进一步探讨T-bet基因或其表达产物作为Th1应答的调节剂用于临床血液病治疗的可能性。
- 许小朋王锁英杨敏邱谷风王胜军邵启祥许化溪
- 关键词：基因转染T-BET干扰素ΓU937
- 人AITRL胞外区基因克隆表达及重组蛋白生物活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2+-IMAC柱纯化、复性并Western blot鉴定,流式细胞仪检测sAITRL重组蛋白的结合活性,增殖试验分析sAITRL的生物学活性。结果:成功构建了sAITRL-pQE30原核表达载体;表达相对分子质量约15kD的重组蛋白;sAITRL能与活化淋巴细胞上的天然受体AITR结合,低浓度的sAITRL能促进淋巴细胞的增殖,而在高浓度下则抑制了淋巴细胞的增殖。结论:成功表达了具有生物学活性的sAITRL重组蛋白,AITR-AITRL相互作用在调节淋巴细胞增殖过程中起重要作用。
- 毛朝明王胜军仝佳马洁杨敏许小朋邱谷风唐莉邵启祥李龙许化溪
- 关键词：基因克隆原核表达重组蛋白
- 人T-bet基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2006年
- 目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆;应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。结果:扩增得到的T-bet基因cDNA全长1 670 bp,包括编码区1 607 bp,编码530个氨基酸残基,与Gen-bank中发表的序列完全一致。结论:获得了人T-bet基因的克隆,为进一步研究其生物学功能构建了基础平台,为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。
- 杨敏王锁英王胜军马洁毛朝明邱谷风许小朋邵启祥许化溪
- 关键词：T-BET基因CDNA克隆RT-PCR
- 人T-bet基因的表达、纯化及其免疫原性分析
- 2007年
- 目的:利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人T-bet基因全长序列,并对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体。方法:利用PCR技术从克隆载体pGEM-T/T-bet获得人T-bet的全长编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pT-bet;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌JM109,测序鉴定后转化M15,经IPTG 37℃诱导4 h后,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色判断以包涵体形式存在的带有6×His标签的融合蛋白(表达产物),用Ni2+-IMAC层析柱对融合蛋白进行纯化;将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备人T-bet的多克隆抗体。结果:成功表达和纯化了人T-bet,并制备了多克隆抗体,ELISA和Western blot结果显示了血清抗体的高效价(1∶100 000)和高度特异性。结论:成功构建了原核表达载体pT-bet,并在工程菌M15中获得大量表达,经纯化后获得高纯度的人T-bet蛋白,制备了效价和特异性良好的多克隆抗体,为进一步研究T-bet的生物学功能奠定了的基础。
- 杨敏王胜军王锁英许小朋邱谷风苏兆亮邵启祥黄新祥许化溪
- 关键词：原核表达蛋白纯化免疫原性
- 转录因子T-bet和GATA-3对婴幼儿喘息性支气管炎的免疫调控作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨转录因子T-bet和GATA-3对小儿喘息性支气管炎的免疫调控作用。方法对32例喘息性支气管炎(喘支组)和30例正常儿童(对照组)抽取抗凝静脉血5 mL,Ficoll分离外周血淋巴细胞,以终质量浓度为100 mg/L的植物血凝素(PHA)刺激48 h,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测淋巴细胞T-bet、GATA-3的mRNA表达水平。结果喘支组淋巴细胞培养上清液IFN-γ水平[(528±164)ng/L]低于对照组[(870±203)ng/L](P<0.05),而IL-4水平[(106±29)ng/L]明显高于对照组[(47±15)ng/L](P<0.01);喘支组和对照组淋巴细胞T-bet mRNA水平分别为(0.11±0.03)(、0.17±0.03),GATA-3 mRNA分别为(0.54±0.09)、(0.41±0.07),提示喘支组T-bet mRNA表达较对照组减少(P<0.05),而GATA-3 mRNA明显高于对照组(P<0.01);喘支组IFN-γ水平与T-bet mRNA表达I、L-4与GATA-3 mRNA表达均呈正相关(r=0.57,0.60 P均<0.01);IFN-γ与IL-4水平、T-bet mRNA与GATA-3 mRNA表达均呈负相关(r=-0.38,-0.46 P均<0.05)。结论1.喘支组患儿淋巴细胞合成IL-4水平增高,IFN-γ减少,存在以Th2细胞过度分化为特征的T辅助细胞分化失衡。2.喘支组患儿T细胞分化失衡受到核转录因子T-bet和GATA-3的调控,T-bet表达减少可能是一重要因素。
- 王锁英许化溪许小朋杨敏张赟健忻悦邱谷风马洁眭建
- 关键词：转录因子免疫调节
- 转染T-bet基因的人胃癌SGC-7901细胞分泌IFN-γ的作用被引量：2
- 2009年
- 采用基因克隆与腺相关病毒包装技术，构建人Thl细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体，并转染入胃癌细胞系SGC-790I细胞。检测转染细胞IFN-γ的分泌功能及其对SGC-7901细胞生物学作用的影响。结果：（1）获得含有T-bet基因的重组腺相关病毒（rAAV—eGFP-T—bet）；（2）用rAAV-eGFP—T-bet感染SGC-7901细胞后，约30％～40％的细胞出现绿色荧光。对被感染细胞进行RT—PCR，扩增出1670bp的T-bet，并经Westernblot证实；（3）转染后的细胞测得388bp的IFN-γ目的条带和IFN-γ蛋白的表达。由此表明，人T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV—eGFP—T-bet，可成功转染SGC-7901，并致使转染细胞分泌IFN-γ。为进一步开展T-bet基因干预治疗肿瘤的研究奠定了基础。
- 邱谷风王锁英王胜军邵启祥马洁杨敏许小朋毛朝明苏兆亮黄新祥许化溪
- 关键词：T-BET基因重组质粒腺相关病毒载体IFN-Γ
- T-bet、GATA3及相关因子的表达与胃癌及转移的相关性研究被引量：15
- 2007年
- 目的:分析胃癌患者Th1和Th2两类细胞因子的基因表达与转录因子T-bet和GATA3表达的相关性,从细胞因子与转录因子角度考证胃癌患者Th1/Th2细胞分化趋势,探讨p53与T-bet的相关性,了解T-bet与肿瘤转移之间的关系。方法:利用荧光定量PCR技术检测55例胃癌患者及45例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA3转录因子和IFN-γ、IL-4等细胞因子的水平,应用免疫组化法检测胃癌组织中p53的表达状况。结果:55例胃癌患者T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的表达率依次为51%(28/55)、78%(43/55)、27%(15/55)、69%(38/55)。定量PCR结果显示,病人组的T-bet和IFN-γ明显低于正常对照组(P<0.01),而GATA3和IL-4则明显高于正常对照组(P<0.01)。T-bet与IFN-γ在病人体内的mRNA表达存在正相关性(P<0.01),正常人则没有。GATA3与IL-4的表达在两组中均呈明显正相关(P<0.01和P<0.05),且在p53阳性的患者中,T-bet的表达率较低,而GATA3的表达率较高。结论:胃癌患者有明显Th2漂移现象,且p53的表达与T-bet的表达呈负相关。
- 邱谷风王锁英王胜军马洁毛朝明朱蓓杨敏许小朋陈建国胡正军邵启祥黄新祥许化溪
- 关键词：胃癌TH1/TH2细胞因子转录因子
- CpG-ODN对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞T-bet表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨CpG-ODN干预对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞(PBMC)T-bet表达和IFN-γ分泌的影响。方法:对28例喘息性支气管炎(喘支组)患儿于急性期和恢复期分别抽取抗凝静脉血并分离PBMC,以终浓度为10μg/ml的B型CpG-ODN刺激48小时,分别应用RT-PCR和Western blot检测CpG-ODN刺激前后患儿PBMC的T-bet mRNA和蛋白表达情况,以ELISA检测PBMC培养上清IFN-γ的变化,同时设立26例健康婴儿对照组。结果:与正常对照组比较,喘支患儿PBMC表达T-bet mRNA及蛋白明显减少(P<0.05),应用CpG-ODN刺激后,两组小儿PBMC表达T-bet均显著上调,但产生IFN-γ无明显增多,对照序列ODN对T-bet表达及IFN-γ的分泌无明显影响。相关分析表明,喘支患儿T-bet mRNA与IFN-γ分泌呈正相关(r=0.57,P<0.01),CpG-ODN刺激后,二者相关性明显下降(r=0.19,P>0.05)。结论:T-bet在喘支患儿PB-MC中表达减少,提示T-bet表达缺陷参与了喘支的免疫病理,B型CpG-ODN作为一种免疫调节剂,可有效上调T-bet的表达,但不能诱导IFN-γ的产生。
- 王锁英许化溪杨敏许小朋邱谷风李国民张贇健马洁眭建姜旭淦胡嘉波
- 关键词：CPG-ODN喘息支气管炎T-BET
