陈庆新
- 作品数：28 被引量：162H指数：5
- 供职机构：浙江大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达传染性法氏囊病毒VP3基因编码蛋白永生化细胞制备方法
- 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP3基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP3基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectami...
- 周继勇叶菊秀陈庆新郑肖娟
- 文献传递
- 表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白永生化细胞制备方法
- 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP2基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectami...
- 周继勇叶菊秀陈庆新郑肖娟
- 文献传递
- 猪圆环病毒Ⅱ型毒研究进展
- 圆环病毒科(Circoviridae)是国际分类委员会(ICTV)第六次学术报告新命名的一个科。本科既有植物病毒又有动物病毒:植物病毒有地三叶草侏病毒(SCSV)、椰树叶腐烂病毒(CFDV)和香蕉簇顶病毒(BBTV);动...
- 陈庆新叶菊秀周继勇
- 文献传递
- 杭州地区猪Ⅱ型圆环病毒抗体的血清学调查被引量：28
- 2003年
- 从浙江省杭州地区 2 8个猪场采集猪血清 1 6 77份 ,用间接荧光免疫试验进行了猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )抗体检测。共检出抗体阳性血清 96 0份 ,总阳性率为 5 7.2 5 % ,其中经产母猪的阳性率为 6 2 .32 % ,后备母猪的阳性率为 5 5 .5 5 % ,断奶后仔猪的阳性率为 5 5 .4 8% ,断奶前仔猪的阳性率为 5 2 .98%。血清学调查结果显示 ,PCV
- 陈庆新商绍彬叶菊秀母安雄王毅峰陆国林周继勇
- 关键词：抗体检测血清学调查断奶仔猪多系统衰竭综合征
- 猪圆环病毒1型和2型Rep蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：2
- 2007年
- 分别以猪圆环病毒1型基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,利用PCR扩增了猪圆环病毒1型和2型的ORF1基因,随后克隆到pET-28a(+)和pET-32a(+)两种原核表达载体上。测序正确的重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3),进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,猪圆环病毒1型和2型的ORF1均能在pET-28a和pET-32a中分别以重组蛋白His-Rep(40 Ku)和Trx-His-Rep(54 Ku)的形式表达。进一步纯化后测定重组蛋白的浓度,推算出猪圆环病毒1型和2型的His-Rep蛋白产量分别为34 mg/L菌液和14 mg/L菌液,Trx-His-Rep蛋白产量则为12 mg/L菌液和10 mg/L菌液。这些纯化的蛋白在Western blot中能够与猪抗猪圆环病毒2型阳性血清发生特异性反应,显示其具有良好的免疫学活性。本研究建立的猪圆环病毒重组Rep蛋白的原核表达系统及其纯化方法,为下一步开展Rep蛋白功能等相关研究奠定了基础。
- 李益飞申会刚商绍彬陈庆新郭军庆周继勇
- 关键词：REP蛋白纯化
- 猪圆环病毒2型HZ0201株分子克隆的感染性分析被引量：5
- 2007年
- 通过PCR扩增猪圆环病毒2型HZ0201株的全长基因组,克隆到pBluescript SK+载体SacⅡ位点;同时以SacⅡ切出PCV2全长DNA,并进行自身环化,分别构建PCV2全长基因组重组质粒和首尾相接的环化DNA。利用脂质体分别将PCV2重组质粒和环化DNA转染PK-15和Vero细胞,免疫组织化学试验(IHC)结果显示二者均检出PCV2阳性抗原。其中PCV2环化DNA转染细胞的阳性率显著高于PCV2重组质粒。将转染细胞进行连续8次传代,以IHC对每代病毒检测表明,PCV2分子克隆在PK-15细胞中形成的病毒能稳定感染,并且滴度逐步增加;而在Vero细胞上复制能力不强,传到第四代即不能检出病毒。
- 陈婷飞周继勇陈庆新商绍彬
- 关键词：猪圆环病毒2型分子克隆
- 表达传染性法氏囊病毒VP1基因编码蛋白永生化细胞制备方法
- 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP1基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP1基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectami...
- 周继勇叶菊秀陈庆新郑肖娟
- 文献传递
- 传染性法氏囊病毒的抗原及分子特征(英文)被引量：4
- 2005年
- 用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2～14代后适应细胞并产生细胞病变.细胞适应的IBDV毒株的理化和形态特征与经典传染性法氏囊病毒株一致.除IBDV-HZ1、HZ2属经典IBDV血清型外,IBDV-JD1、JD2和NB毒株分属不同的血清亚型.人工感染实验结果显示,分离的IBDV毒株产生与野外病例相似的临床症状和病变,出现法氏囊滤泡髓质的淋巴细胞变性、坏死和消失.基因组序列分析显示,IBDV-NB毒株A片段由3 264个核苷酸组成,编码由145个氨基酸残基组成的VP5和由1 012个氨基酸残基组成的多聚蛋白.与来自GenBank的IBDV Ⅰ型毒株比较,NB毒株A片段编码的多聚蛋白与JD1毒株的同源性最高,达99.5%,VP2与JD1、CEF94、D78的同源性为99.8%,VP3与JD1的同源性为99.2%,VP4与JD1的同源性为100%,VP5与JD1,HZ2,P2,CEF94,CT,Cu-1和D78毒株的同源性为99.3%.NB毒株VP2蛋白的第253、280、284位氨基酸残基与IBDV变异毒株和经典毒株一致,但不同于IBDV超强毒株.这些结果暗示IBDV的抗原表位是构象依赖性表位,IBDV血清亚型的形成与IBDV弱毒疫苗病毒株密切相关.
- 周继勇叶菊秀叶伟成陈庆新郑肖娟郭军庆
- 关键词：传染性法氏囊病毒理化特性血清亚型
- 表达传染性法氏囊病毒基因编码蛋白永生化细胞制备方法
- 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增不同编码蛋白的基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectam...
- 周继勇叶菊秀陈庆新郑肖娟
- 文献传递
- 圆环病毒2型感染的流行病学分析及其突变体致病性
- 猪圆环病毒2型(Porcine circovims type 2，PCV2)属于圆环病毒科，基因组全长为1768nt或1767nt，除ORF1和ORF2两大阅读框外，还潜在9个ORFs。ORF1编码与病毒复制相关的Rep...
- 陈庆新
- 关键词：猪圆环病毒2型流行病学突变体
- 文献传递
