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免疫共沉淀-蛋白测序技术验证Periostin和SFRP2之间的相互作用: 2009年; 目的验证凋亡相关蛋白基因SFRP2(secreted frizzled-related protein2)和骨母细胞特异性因子-2Periostin(osteoblast-specific factor2)间的相互作用。方法分别构建重组载体pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA-Periostin经双酶切鉴定正确,共转染HEK293细胞,抗Myc单克隆抗体沉淀Myc-SFRP2相互作用蛋白复合物后,进行SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色,切下目的条带,利用HPLC-Chip/MS纳流液质联用技术进行肽序列分析,经SpectrumMill搜索Swissport数据库后鉴定蛋白质。结果经HPLC-Chip/MS纳流液质联用技术分析,免疫沉淀复合物内可检测出Periostin的表达。结论Peri-ostin与SFRP2间存在相互作用。; 陶熹王珍祥袁顺忠李世荣吴军; 关键词：免疫共沉淀相互作用 SFRP2 PERIOSTIN 瘢痕疙瘩

分泌型凋亡相关蛋白1调控成纤维细胞凋亡的研究: 2013年; 目的探讨分泌型凋亡相关蛋白1（secretedapoptosis-relatedprotein1，SARP1）调控增生性瘢痕患者的成纤维细胞（fibroblast，FB）凋亡的作用。方法构建SARP1腺病毒载体（Ad-sARPl）．感染瘢痕患者的皮肤FB，促进其表达SARP1蛋白，观察其蛋白表达后人FB增殖与凋亡的变化，明确SARP1蛋白对FB的调控作用，并通过转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记（TuNEL）方法、流式细胞仪（FACs）分析细胞增殖与凋亡动态变化。结果成功构建Ad-SARP1，并能够感染人FB，通过逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）检测到SARP1的mRNA值明显增加，Western印迹方法检测SARP1蛋白表达明显增多（P〈0．05）；其蛋白表达后四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测，与带荧光的腺病毒空载体（Ad-EGFP）及对照组相比，Ad-SARP1感染的FB增殖活力均显著增高；TUNEL检测Ad-SARP1感染FB前后细胞凋亡结果显示，细胞凋亡明显受到抑制，凋亡阳性细胞变少，接近瘢痕成纤维细胞（HSFB）凋亡；FACS分析表明，感染组FB的细胞凋亡指数与对照组相比明显下降（P〈0．01）。结论sARP1参与调控增生性瘢痕患者的FB功能，抑制细胞凋亡，促进细胞增殖加快。; 任章霞陈亮陶熹于攀王珍祥李世荣; 关键词：成纤维细胞细胞凋亡增生性瘢痕

SARP1蛋白对增生性瘢痕成纤维细胞的影响及分子机制的初步研究: 目的及意义:Fb作为创伤愈合时的主要效应细胞,在以HS为特征的病变中,常常表现为凋亡抑制,但是目前的研究尚未完全明了调控HSFb凋亡的分子机制,因此,如果能够找到新的促进HSFb凋亡的信号途径,那么就将有可能为控制HS的...; 陶熹; 关键词：腺病毒信号转导; 文献传递

SARP1调控增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的研究: 目的：验证分泌的凋亡相关蛋白1（SARP1）调控烧伤后早期增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法：本实验成功构建SARP1腺病毒载体，使在人增生性瘢痕成纤维细胞中表达SARP1蛋白，观察其蛋白表达后人HSFb 增殖与凋亡的...; 任章霞陶熹于攀陈亮王珍祥; 关键词：成纤维细胞烧伤增生性瘢痕

SFRP2与Periostin的相互作用在瘢痕疙瘩形成机制中的研究被引量：1: 2009年; 目的利用pull-down技术验证凋亡相关蛋白基因SFRP2(Secreted frizzled-related protein2)和骨母细胞特异性因子-2Periostin(Osteoblast-specific factor2)间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的Periostin融合蛋白(HA-Periostin)的重组载体pCMV-HA-Periostin,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的融合蛋白(Myc-SFRP2)的重组真核表达载体pCMV-HA-SFRP2,单独或共转染人293细胞,利用pull-down技术验证Periostin与SFRP2间的相互作用。结果成功构建重组载体pCMV-HA-Periostin,与抗Myc单克隆抗体沉淀Myc-SFRP2相互作用蛋白复合物后,可以检测到HA-Periostin的表达。通过体外蛋白质结合实验证实了Periostin与SFRP2间的相互作用。结论成功构建带HA标签的Periostin融合蛋白(HA-Periostin)的重组载体,利用pull-down技术证实了Periostin与SFRP2间的存在相互作用。; 王珍祥袁顺宗陶熹李世荣吴军; 关键词：相互作用

瘢痕疙瘩分泌性卷曲相关蛋白2与骨母细胞特异性因子2的相互作用: 2009年; 目的验证分泌性卷曲相关蛋白2（SFRP2）与骨母细胞特异性因子2（OSF-2）的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带人膜联蛋白（HA）标签的OSF-2融合蛋白重组载体pCMV—HA—OSF-2，经酶切鉴定确认后，与Myc—SFRP2重组真核表达载体pCMV-HA-SFRP2单独或共转染人HK293细胞，利用免疫共沉淀技术及蛋白质印迹法验证OSF-2与SFRP2的相互作用。结果重组载体经酶切电泳后，显示近800bp处的条带为酶切后的目的片段SFRP2编码基因，近2500bp处的条带为酶切后目的基因OSF-2。表明pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA—OSF-2均构建成功。HK293细胞单独转染pCMV—Myc—SFRP2或pCMV-HA-OSF-2后，未检测到HA—OSF-2的表达；当pCMV—Myc—SFRP2和pCMV—HA，OSF-2共转染后，经Myc抗体进行免疫沉淀可见HA—OSF-2表达。结论HA—OSF-2的重组载体能在哺乳动物细胞中表达，HA—OSF-2与SFRP2间存在相互作用。; 王珍祥陶熹李世荣; 关键词：瘢痕疙瘩载体蛋白质类

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陶熹