马辉
- 作品数：19 被引量：35H指数：4
- 供职机构：复旦大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学经济管理理学更多>>
- 分枝杆菌膜锚定表达载体的构建与亚细胞定位分析
- 2011年
- 目的构建分枝杆菌膜锚定表达载体，并分析外源目标蛋白的表达情况及其亚细胞定位。方法在分枝杆菌胞内表达载体pMFA42的基础上进行改造，人工合成结核分枝杆菌（Myco—bacteriumtuberculosis，Mtb）相对分子质量（Mr）为19×10^3的脂蛋白膜分泌信号序列，将其插入高效的突变型furA基因启动子（pfurAma）下游构建新型的分枝杆菌膜锚定表达载体pMFA42M。PCR扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）编码基因，亚克隆至上述两种载体中并电转化耻垢分枝杆菌（Mycobacte—riumsmegmatis，Ms），分别获得重组EGFP融合表达菌株和膜锚定表达菌株；接着将Mtb主要保护性抗原Ag85A及其嵌合抗原Ag856A2的编码基因亚克隆入膜锚定表达载体pMFA42M中构建Mtb抗原-EGFP融合表达菌株；通过Westernblot和流式细胞表面标记技术来分析目标抗原的表达水平及其亚细胞定位，并进一步通过荧光显微镜直接观察重组EGFP融合表达菌株在体外和感染巨噬细胞后的荧光强度。结果通过引入Mtb19×10^3脂蛋白膜分泌信号，在高效pfurAma启动子的驱动下，成功地构建了分枝杆菌膜锚定表达载体。利用EGFP作为标签抗原，通过Westernblot、荧光显微观察和流式细胞表面标记等技术均证实了外源目标抗原可在分枝杆菌中高水平表达并定位至细胞膜上。结论本研究为重组BCG和分枝杆菌膜蛋白功能研究提供了一种新型的膜锚定表达载体，所构建的EGFP重组表达菌株亦可作为一种模式示踪菌为细胞吞噬和动物免疫中的细菌定植和移位分析提供新思路。
- 王鑫范小勇马辉曲勍
- 关键词：分枝杆菌增强型绿色荧光蛋白亚细胞定位
- 一种噻唑胺类化合物及其应用
- 本发明涉及一种噻唑胺类衍生物及其应用，所述噻唑胺类衍生物具有RORγt调节活性和/或DHODH调节活性，尤其是抑制活性，用于制备预防或治疗RORγt和/或DHODH有关的疾病的药物。
- 王永辉陈纪安谢琼黄瑾刘泽慧马辉
- 活动性结核病诊断标志物、试剂盒及其应用
- 本发明提供了活动性结核病诊断标志物、试剂盒及其应用，其特征在于，包括血液样本中的血液生物标志物MCEMP1蛋白质，所述MCEMP1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，还提供了能够快速检测受试者中是否患有活动性...
- 宋言峥黄家颖温子禄牛良飞马辉张舒林王琳夏凡
- 文献传递
- 基于正电子发射断层显像和转录组学对痰菌阴性肺结核病变组织的活动性生物标志物筛选和初步验证被引量：2
- 2022年
- 目的基于正电子发射断层显像(PET-CT)和转录组学对痰菌阴性肺结核病变组织的活动性生物标志物筛选并进行初步临床验证。方法回顾性收集2017年1月1日至2019年12月31日在上海市公共卫生临床中心胸外科手术治疗的9例痰菌阴性肺结核患者作为发现组,其中男4例,女5例,年龄20~57岁,平均36岁,术前均行PET-CT扫描,术后将切除的标本按照术前PET-CT表现分为氟代脱氧葡萄糖(FDG)代谢增高区域[标准摄取值(SUV)max>3]和FDG代谢基本正常区域(SUVmax≤3)。样本处理后先对不同区域组织进行总RNA的提取,然后行全基因转录组测序。对两组数据进行生物信息学分析,发现两个区域全基因转录组数据差异的表达谱,并筛选出候选生物标志物。回顾性收集2019年1月1日至2021年1月1日上海市公共卫生临床中心收治的80例痰菌阴性肺结核患者作为验证组,其中男37例,女43例,年龄20~62岁,平均39岁,分为SUV增高组(40例)和CT影像无病灶组(40例),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定患者外周血浆中候选生物标志物的蛋白水平。利用受试者工作特征(ROC)曲线对生物标志物进行效果评估。使用studentt检验来判断两组之间蛋白水平差异是否具有统计学意义。结果生物信息学分析发现,C1QB、CCL19、CCL5和HLA-DMB的表达水平与痰菌阴性肺结核病变组织的代谢活性相关。通过验证组进一步筛选验证,证实SUV增高组患者外周血浆中C1QB蛋白水平高于CT影像无病灶组,差异有统计学意义[(3.55±0.34)mg/L比(2.75±0.21)mg/L,t=4.12,P<0.001]。ROC曲线显示,C1QB蛋白水平的曲线下面积为0.731,具有潜在的临床价值。结论C1QB蛋白水平可用于评估痰菌阴性肺结核患者病变的活动性,是一种潜在的生物标志物。
- 吴立伟王琳温子禄马辉欧勤芳吴春高欣石磊李洪伟夏凡宋曙朱召芹刘海鹰陈心春张舒林黄家颖宋言峥
- 关键词：正电子发射断层显像术生物学标记转录组学
- 小鼠白细胞介素17A的原核表达及对RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 在大肠杆菌中高效表达与纯化小鼠白细胞介素17A（mIL-17A）,并研究其对巨噬细胞分泌炎症因子的影响.方法 以活化的脾细胞为模板,通过RT-PCR法扩增小鼠IL-17a基因的编码序列,构建重组表达质粒pET28a/mIL-17a,并在大肠杆菌（E.coli）中诱导表达,经亲和层析获得纯化的mIL-17A蛋白.以mIL-17A蛋白刺激体外培养的鼠巨噬细胞RAW264.7,72 h后应用realtime PCR法分析IL-6、巨噬细胞炎症蛋白1（Ccl3）、巨噬细胞炎症蛋白2（Cxcl3）、β防御素2（defensinβ2）的mRNA表达量,并用ELISA法检测培养上清中Ccl3、Cxcl3、IFN-γ、IL-4及IL-6的蛋白质表达水平.结果 在E.coli中成功高效表达了有生物活性的IL-17A蛋白,可促进体外培养的RAW264.7细胞IL-6、Cxcl3、defensin β2 mRNA的表达,并能促进Ccl3、Cxcl3、IFN-γ、IL-4以及IL-6蛋白的表达.结论 成功表达并制备了具备生物学活性的mIL-17A,该蛋白具有刺激巨噬细胞表达趋化因子、防御素及细胞因子的能力.
- 郭盛范小勇郝春莉马辉陈凌张建华
- 关键词：巨噬细胞炎症蛋白抗感染免疫Β防御素
- 麻风分枝杆菌热休克蛋白65的表达、纯化及其多克隆抗血清的制备
- 2011年
- 目的原核表达、纯化麻风分枝杆菌热休克蛋白65(Heat shock protein 65,HSP65),并制备其多克隆抗血清。方法以含hsp65基因的真核表达质粒pCMV4.65为模板,PCR扩增hsp65基因,克隆入pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-hsp65,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清,Western blot分析重组蛋白的反应原性。结果重组表达质粒pET-28a-hsp65经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约65 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%,浓度约为1.0 mg/ml;制备的HSP65多克隆抗血清效价可达1∶12 800;重组蛋白具有良好的反应原性。结论已成功表达、纯化了麻风分枝杆菌重组HSP65蛋白,并制备了HSP65多克隆抗体,为进一步研究以HSP65为基础的亚单位疫苗和核酸疫苗奠定了基础。
- 吴娟范小勇曲勍马辉许艳罗玉萍Douglas B.Lowire
- 关键词：分枝杆菌麻风热休克蛋白65多克隆抗体
- 肺结核病变活动性标志物、试剂盒、方法及模型构建方法
- 本发明涉及肺结核病变活动性标志物、试剂盒、方法及模型构建方法，其特征在于，肺结核病变活动性标志物为血液样本中的血浆蛋白生物标志物，血浆蛋白生物标志物为包括C1QB蛋白质和CCL19(MIP3B)蛋白质的一种或多种的联合标...
- 宋言峥张舒林温子禄黄家颖马辉王琳吴立伟
- 文献传递
- mazG基因缺失的抗结核重组卡介苗
- 本发明提供了一种mazG基因缺失的重组卡介苗菌株(BCGΔmazG)，其基因组中的mazG基因被潮霉素抗性基因替换。本发明也提供了BCGΔmazG的制备方法及其在制备预防结核病重组疫苗中的应用。本发明的BCGΔmazG皮...
- 范小勇吕亮东赵国屏马辉吴康
- 文献传递
- 耻垢分枝杆菌黏膜接种对小鼠过敏性哮喘的免疫调节作用被引量：5
- 2011年
- 目的观察耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)对过敏性哮喘小鼠防御素β-2(Defb2)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)、IFN-γ、IL-4及过敏原特异性IgE、IgG1、IgG2a表达的影响,探讨Ms黏膜接种干预哮喘的免疫调节机制。方法 SPF级BALB/c小鼠随机分为哮喘组、干预组、对照组3组。以卵清蛋白(OVA)致敏,气道激发建立哮喘模型。OVA致敏前7 d鼻黏膜接种Ms进行干预。以Real-time荧光定量PCR法检测肺组织Defb2、MIP1、MIP2 mRNA的表达,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)、纵膈淋巴结细胞培养上清中MIP1、MIP2、IFN-γ、IL-4的浓度,ELISA法检测血清总IgE以及OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a水平。结果 Ms干预可以显著增高哮喘小鼠Defb-2 mRNA的表达(31.21±1.56对0.78±0.11,P<0.01);Ms干预可使哮喘小鼠表达增高的MIP1 mRNA降低(9.80±1.56对2.44±0.96,P<0.05),但对MIP2 mRNA的影响不明显(P>0.05);Ms干预可使BALF和淋巴结培养上清中MIP1、MIP2降低,使BALF和淋巴结培养上清中IL-4降低(97.43±7.83对153.80±5.20,150.75±54.58对625.81±55.98,P均<0.01),使BALF中IFN-γ升高(78.92±11.41对44.88±3.26,P<0.01);Ms干预可以显著降低哮喘小鼠血清总IgE、OVA-IgE、OVA-IgG1,升高OVA-IgG2a,降低哮喘小鼠OVA特异性IgG1/IgG2a比值(1.09±0.03对1.42±0.04,P<0.01)。结论 Ms黏膜免疫可以通过促进Defb-2表达增强哮喘小鼠抗感染能力,通过降低巨噬细胞炎症蛋白表达、调节Th1/Th2平衡、抑制过敏原特异性IgE表达等途径干预哮喘,耻垢分枝杆菌有望继卡介苗之后成为哮喘预防的另一候选疫苗。
- 郭盛吴良霞范小勇郝春莉马辉陈凌张建华
- 关键词：哮喘耻垢分枝杆菌巨噬细胞炎症蛋白防御素
- 在油价高企的背景下国内航运企业燃油风险及风险控制策略研究
- 近年来,国际原油价格跌宕起伏。原油价格自2003年以来持续上涨,2008年7月油价突破每桶140美元,国际知名投行高盛更是一度预测原油价格将会上涨至每桶200美元。此后,随着美国次贷危机引发的全球金融风暴愈演愈烈,国际油...
- 马辉
- 关键词：金融衍生产品
