陈柳
- 作品数：82 被引量：90H指数：5
- 供职机构：浙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省重大科技专项基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2009年
- 以纯化的重组兔出血症病毒核衣壳蛋白(VP60)为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备抗衣壳蛋白的单克隆抗体,获得了2株能稳定分泌抗VP60蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(AE11和AH4).分别利用Western blot、间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)等方法对单抗的免疫活性和特异性进行检测,结果证明,此两株单抗均能识别重组的VP60和天然病毒的衣壳蛋白,而IFA结果显示只有AE11能和RHDV反应,可观察到强烈的特异性绿色荧光,表明成功制备了抗RHDV的VP60特异性单抗.
- 魏威余斌倪征陈柳云涛华炯钢吴润刘光清
- 关键词：兔出血症病毒衣壳蛋白单克隆抗体
- 一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用，该病毒含有由猪细小病毒VP2基因、口蹄疫病毒2A基因和猪圆环病毒Cap基因依次连接构成的外源基因。该方法包括：(1)构建包含PRV全基因组的细菌人工染色体pPRV；(2...
- 张存崔尚金叶伟成陈柳余斌倪征云涛华炯钢张燕
- 含FMDV 2A序列PRRSV GP5和M蛋白重组腺病毒的构建与鉴定被引量：1
- 2009年
- 【目的】构建表达PRRSV GP5和M蛋白、且二者通过口蹄疫病毒(FMDV)2A序列连接的重组腺病毒,以期实现2个蛋白的同时表达,发挥GP5蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势作用。【方法】利用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot等方法,对获得的重组腺病毒(rAd-GP5-2A-M)进行检测。【结果】检测结果均证明,GP5-2A-M蛋白不仅获得了正确表达,而且能自我裂解为GP5和M蛋白。【结论】在GP5和M蛋白之间插入具有自我裂解功能的FMDV 2A策略是切实可行的,并为PRRSV多个蛋白的共表达奠定了基础,也为其他病毒基因工程疫苗的研制提供了全新思路。
- 云涛倪征余斌陈柳华炯钢王根荣张彦明刘光清
- 关键词：口蹄疫病毒
- 一株双色荧光蛋白标记鸭瘟病毒及其构建方法和应用
- 本发明提供了一株双色荧光蛋白标记鸭瘟病毒及其构建方法和应用，属于分子生物学技术领域。本发明构建了一株双色荧光蛋白标记鸭瘟病毒，将红色荧光蛋白(RFP)与病毒囊膜蛋白gC融合，将青色荧光蛋白(CFP)与病毒衣壳蛋白UL35...
- 陈柳张存倪征华炯钢叶伟成云涛朱寅初
- 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M融合蛋白的重组腺病毒的构建及其对小鼠的免疫原性被引量：2
- 2009年
- 利用口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的GP5和M蛋白编码基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,通过一次转录和翻译,可以同时实现2个蛋白的表达,以发挥GP5蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势作用。分别利用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blotting等方法,对获得的重组腺病毒(rAd-GP5-2A-M)进行检测,结果均证明GP5-2A-M蛋白不仅获得了正确表达,而且能自我裂解为GP5和M蛋白。以单独表达GP5(rAd-GP5)、M(rAd-M)和融合表达GP5-M(rAd-GP5-M)的重组腺病毒为对照,研究该重组腺病毒在小鼠体内诱导免疫应答情况,结果表明,虽然4种重组腺病毒均能诱导小鼠产生特异性抗体和细胞免疫反应,但重组腺病毒rAd-GP5-2A-M所诱导产生的体液免疫和细胞免疫应答水平最高。本研究结果提示,利用具有自动裂解功能的FMDV2A多肽构建PRRSV复合基因工程疫苗是一种切实可行的新策略,也为构建其他动物病毒病的基因工程疫苗提供了新思路。
- 云涛倪征余斌陈柳华炯钢王根荣刘光清
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒口蹄疫病毒重组腺病毒
- 一种鸭坦布苏病毒E蛋白线性B细胞抗原表位多肽及其应用
- 本发明公开了一种鸭坦布苏病毒E蛋白线性B细胞抗原表位多肽及其应用，该抗原表位多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明筛选出DTMUV的一个B细胞线性表位，该表位与MBP融合表达后免疫小鼠，获得的多克隆抗体能够...
- 余斌张存倪征华炯钢陈柳云涛叶伟成
- 文献传递
- 一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用
- 本发明公开了一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用。所述杂交瘤细胞保藏号为CCTCC NO：C202148，分泌的鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗，具有较高的效价，且具有较强的特异性。使用制备的单抗建立...
- 云涛张存华炯钢叶伟成陈柳倪征朱寅初
- 文献传递
- 表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性被引量：3
- 2015年
- 为开展鸭瘟病毒-鸭坦布苏病毒二联苗的研究,将密码子优化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因插入转移载体p EP-BGH-end构建了p EP-BGH-E重组表达质粒。在鸭瘟病毒疫苗株细菌人工染色体(p DEVvac)的基础上,首先通过Red E/T两步重组法构建了EF1启动子替换GFP基因CMV启动子的p DEV-EF1突变体克隆,并将p EP-BGH-E质粒上的重组表达框p CMV-E-BGH-p A再次通过两步重组克隆至p DEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带有外源基因DTMUV E的突变体克隆p DEV-E。用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)获得了重组病毒r DEV-E。病毒蚀斑大小测定结果显示,r DEV-E在CEFs上的蚀斑面积较亲本株相比稍有减少。Western blotting分析表明,外源蛋白E在病毒感染的CEFs细胞中成功表达。
- 陈柳余斌倪征华炯钢叶伟成云涛张存
- 关键词：鸭瘟病毒E蛋白细菌人工染色体重组病毒
- 具有荧光标签的猪瘟病毒E^(rns)蛋白在杆状病毒表达系统中的表达被引量：4
- 2011年
- 为了获得具有标记的猪瘟病毒Erns蛋白,通过基因工程操作,使猪瘟病毒Erns基因与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合,用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中高效表达了ErnsGFP融合蛋白,经Western Blot和荧光显微镜观察证实,表达产物分子量正确,且发出易于检测的绿色荧光,具有标记的Erns蛋白的获得为进一步研究Erns蛋白结构和功能奠定了基础。
- 陈柳余斌云涛倪征华炯钢李双茂
- 关键词：猪瘟病毒绿色荧光蛋白
- 一种用于检测鸭出血性卵巢炎病毒抗体的抗原蛋白及其应用
- 本发明提供了一种用于检测鸭出血性卵巢炎病毒抗体的抗原蛋白及其应用。该抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还提供了所述的抗原蛋白在制备检测鸭出血性卵巢炎病毒抗体试剂盒中的应用。本发明抗原蛋白灵敏度高，特...
- 余斌张存云涛陈柳倪征华炯钢叶伟成
- 文献传递
