叶伟成
- 作品数：95 被引量：412H指数：9
- 供职机构：浙江省农业科学院更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生环境科学与工程生物学更多>>
- 绍兴鸭α-干扰素基因克隆、表达及活性测定被引量：6
- 2005年
- 采用PCR法从绍兴鸭的肝组织基因组DNA中扩增出α干扰素基因,插入pUC18载体,进行序列测定及分析;将成熟α干扰素基因亚克隆到表达载体pET 28α(+)中,并转化入大肠杆菌BL21进行表达;表达产物经复性后,进行抗病毒活性的测定。测序结果表明,该基因(sxDuIFN α)由576个核苷酸组成,共编码191个氨基酸。该基因与GenBank公布的鸭α干扰素基因(X84764,AB128861)的核苷酸序列同源性分别为99.3%和99.1%,氨基酸序列同源性均为97.9%。表达载体经IPTG诱导表达出相对分子量为20.7kD的DuIFN α。该产物经细胞病变抑制法测定,显示出具有明显的抗猪水泡性口炎病毒(VSV)及鸭瘟弱毒疫苗毒的活性。
- 叶伟成张存王一成刘蔓雯徐丽华袁秀芳张燕
- 关键词：Α-干扰素基因克隆原核表达
- 鸭呼肠孤病毒基因Ⅰ型与Ⅱ型RT-PCR鉴别诊断方法的建立与应用
- 云涛张存华炯钢余斌叶伟成陈柳倪征
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)核衣壳蛋白的克隆、表达与免疫印迹被引量：2
- 2005年
- 将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核衣壳蛋白(N蛋白)基因克隆到原核表达载体pET 28α(+)中,得到重组质粒pET PRRSV/N,并转化入受体菌BL21中。转化子经IPTG诱导表达4h后,表达蛋白量达到高峰。经15%SDS PAGE电泳检测和经Westernblotting分析,表达蛋白大小约为17kD,符合预期结果,并能与PRRSV阳性血清发生特异性反应,而不与阴性血清反应。这说明表达蛋白具有高度免疫反应特异性。
- 徐丽华王一成逄春泰周永学袁秀芳张存叶伟成
- 关键词：核衣壳蛋白BLOTTING
- 表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性被引量：13
- 2016年
- 【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立克氏病毒、火鸡疱疹病毒等已广泛用于病毒活载体的研究,而近几年也有关于鸭瘟病毒(DEV)作为疫苗活载体的报道。为了为免疫防控鸭瘟和小鹅瘟提供新手段,本研究拟在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆的基础上,构建表达小鹅瘟病毒(GPV)主要免疫原蛋白VP2的重组病毒rDEV-VP2,并研究其生物学特性,进而探讨重组病毒rDEV-VP2作为防治DEV和GPV的二联重组活载体疫苗的可能性。【方法】将密码子优化的GPV VP2基因通过常规基因克隆的方法插入转移载体p EP-BGH-end,构建含有GPV VP2表达框p CMV-VP2-BGH-p A的重组表达质粒。在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,通过"Red E/T"两步重组法将GPV VP2基因表达框插入到DEV US7和US8基因之间构建了突变体克隆pDEV-VP2。利用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得重组病毒rDEV-VP2和删除Bac质粒序列的rDEV-VP2-Cre,并对重组病毒细胞体外生长曲线、蚀斑大小和VP2蛋白表达情况进行测定。将rDEV-VP2接种番鸭,在不同时间采集血清,采用间接ELISA法检测血清中GPV VP2抗体产生情况。【结果】间接免疫荧光检测和Western blot分析表明,外源蛋白VP2在CEFs细胞成功表达。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果显示,rDEV-VP2在CEFs细胞上的增殖滴度与亲本株相比无显著差异,表明外源基因VP2的插入不影响rDEV重组病毒的增殖。动物试验结果表明,7日龄雏番鸭接种rDEV-VP2可以诱导产生针对GPV VP2的抗体,免疫后3周抗体阳性率为50%(4/8)。【结论】将小鹅瘟病毒的主要免疫原基因VP2插入到DEV疫苗株基因组的US7和US8基因间
- 陈柳余斌倪征华炯钢叶伟成云涛张存
- 关键词：鸭瘟病毒鹅细小病毒VP2重组病毒
- 一种规模化畜禽舍的自动循环消毒系统
- 本发明公开了一种规模化畜禽舍的自动循环消毒系统，属于畜禽养殖领域，包括设置在畜禽舍内的自动消毒轨道和安装在自动消毒轨道上的自动消毒小车，畜禽舍内地面上设有回收槽，回收槽包括消毒液槽和位于消毒液槽上侧的污泥槽，自动消毒小车...
- 倪征张存云涛陈柳叶伟成华炯钢朱寅初
- 番鸭细小病毒生物学特性的研究进展被引量：9
- 2000年
- 叶伟成
- 关键词：番鸭细小病毒
- 果园养鸡需注意的几个问题被引量：1
- 2000年
- 李国强吕瑞霞叶伟成
- 关键词：果园养鸡放养密度放养时间
- 番鸭呼肠孤病毒通用型RT-PCR检测引物及检测方法
- 本发明公开了一种番鸭呼肠孤病毒通用型RT-PCR检测引物及检测方法，属于鸭类病毒检测技术领域。该通用型RT-PCR检测引物为上游引物：5’-CACAGTGCTACCATC-3’，下游引物：5’-CTGCTGATCATAA...
- 叶伟成余斌张存云涛陈柳倪征华炯钢
- 文献传递
- 表达小鹅瘟病毒VP2的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种表达小鹅瘟病毒VP2的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用，该重组鸭瘟病毒的基因组中插入有小鹅瘟病毒VP2基因，所述小鹅瘟病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。所述构建方法包括：(1)将pDE...
- 陈柳张存倪征叶伟成余斌云涛华炯钢
- 文献传递
- 鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用被引量：6
- 2014年
- 为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒（DTMUV）抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku.Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应.以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件.重组抗原最适包被浓度为5 μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑.该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21％～7.27％和3.4％ ～7.2％,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性.用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3％.
- 余斌华炯钢刘跃生赵灵燕倪征叶伟成云涛陈柳徐辉张存
- 关键词：间接酶联免疫吸附试验
