叶小丽
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所病毒安全检测实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 猪IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系的建立被引量：2
- 2011年
- 为了解猪体内细胞免疫应答机制,本研究建立猪细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系。以五指山小型猪cDNA为模板,扩增IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的基因保守区,构建相应的重组质粒,并将其作为标准品构建标准曲线。结果显示,各标准曲线的相关系数r值均大于0.990,扩增效率为90%～105%;该检测方法的敏感性较高,IL-4检测下限为1copies/μL,IL-2、IL-10及IFN-γ检测下限达为102copies/μL;重复性较好,批内重复试验与批间重复试验变异系数均小于5%。本研究为病毒感染后猪体内免疫应答等研究提供方法。
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- 关键词：实时定量RT-PCR
- ELISPOT检测高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染后猪γ-干扰素的分泌情况被引量：2
- 2010年
- 目的:研究高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)感染后猪外周血单个核细胞(PBMC)特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应。方法:将仔猪接种PRRSV,于病毒接种前后各时间点分别采血并分离PBMC,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测PBMC分泌IFN-γ的情况。结果:猪感染高致病性PRRSV后,PBMC分泌IFN-γ的能力明显增强,对照组无明显变化。结论:该结果可为研究高致病性PRRSV致病机理提供参考,为评价PRRSV疫苗诱发的细胞免疫效应提供依据。
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- 关键词：酶联免疫斑点法猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒Γ-干扰素
- 中国特有小型猪内源反转录病毒宿主范围及细胞嗜性研究
- 异种移植,是指将有活力的细胞、器官、组织进行种间移植,有望成为缓解同种移植中人源器官资源短缺的有效途径。出于器官大小、生理相容性和伦理道德方面的考虑,猪被认为是最合适的异种移植供体。然而,猪内源性反转录病毒(Porcin...
- 叶小丽
- 关键词：猪内源性反转录病毒宿主范围细胞嗜性
- 文献传递
- 猪内源性反转录病毒囊膜基因env真核表达质粒的构建及鉴定
- 2011年
- 目的:构建猪内源性反转录病毒(PERV)囊膜基因env的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础。方法:用RT-PCR方法扩增五指山猪来源PERV的env基因,将其插入pGEM-T easy载体中,构建重组质粒pGEM-T-env,酶切鉴定正确后,将pGEM-T-env与pHCMV-VSV-G表达质粒同时经EcoRⅠ酶切消化后连接,构建重组表达质粒pHCMV-env,并进行酶切、测序鉴定;将鉴定正确的质粒pHCMV-env转染HEK293T细胞,采用PCR、RT-PCR检测转染后env基因的整合和转录情况。结果:扩增得到五指山猪来源PERV的env基因,并构建了pHCMV-env真核表达质粒,转染HEK293T细胞系后,该细胞系中有目的基因的整合和转录。结论:构建了真核表达质粒pHCMV-env,并且在HEK293T细胞中能够整合并转录,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定了基础。
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- 关键词：猪内源性反转录病毒ENV基因真核表达
- 嗜人性猪内源性反转录病毒感染性克隆感染人胚肾细胞HEK293后Stathmin蛋白差异表达分析
- 2010年
- 目的 分析嗜人性猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retroviruses,PERV）感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应机制.方法 嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时定量RT-PCR、免疫荧光分析确认PERV感染,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹法分析Stathmin蛋白表达差异.结果 嗜人性PERV感染性克隆成功感染HEK293细胞,实时定量RT-PCR和免疫印迹法检测结果表明,PERV感染后Stathmin蛋白与对照相比表达上调.结论 嗜人性PERV感染HEK293细胞后Stathmin表达上调,该研究结果为深入研究嗜人性PERV与人源细胞的相互作用及PERV感染后的分子效应等提供了线索,也提示了PERV感染后可能会对细胞的生长、生理功能等造成影响,甚至存在潜在的致病性.对探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应以及猪→人异种移植的病毒安全性评价也具有重要意义.
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- 关键词：猪内源性反转录病毒HEK293细胞STATHMIN
- 猪内源性反转录病毒囊膜基因env真核表达质粒的构建及鉴定
- 目的：构建猪内源性反转录病毒(Porcine endogenousretrovirus,PERV)囊膜基因绷v的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础。方法：用RT-PCR方...
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- 关键词：猪内源性反转录病毒ENV基因真核表达质粒质粒构建
