李玉叶
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院免疫学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 病毒感染与真核细胞应激颗粒
- 2012年
- 病毒感染真核细胞后诱导细胞eIF-2α磷酸化,翻译的起始受到阻滞,mRNA随后与起始因子、核糖体亚基、mRNA结合蛋白(TIA-1、G3BP、HuR等)结合,聚集形成细胞质RNA应激颗粒(SG)。近几年的研究表明SG可影响病毒复制过程,而病毒亦可通过与SG蛋白组分的相互作用,反馈调节SG形成。本文介绍了SG的形成、组分、生物学意义,以及病毒与SG之间的相互关系。
- 张佩芬夏君李玉叶张萍
- 关键词：病毒感染翻译
- 登革病毒非结构蛋白NS4A的克隆表达及与其相互作用蛋白质的亲和纯化被引量：2
- 2013年
- 目的克隆表达登革病毒非结构蛋白NS4A，分离纯化与其相互作用的细胞蛋白。方法用特异性引物PCR扩增出FLAG—NS4A-HA基因片段，克隆至真核表达载体pSG5中，将重组质粒通过脂质体法瞬时转染入A549细胞，并通过Western blot检测NS4A融合蛋白的表达情况。利用串联亲和纯化系统（TAP）纯化分离与NS4A相互作用的蛋白，Western blot技术及银染SDS．PAGE验证NS4A蛋白复合物的纯化和分离情况。结果成功构建NS4A蛋白融合表达载体和FLAG、HA串联亲和纯化系统，SDS·PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了NS4A蛋白带和2条可能与NS4A相互作用的蛋白质片段。结论成功分离纯化与NS4A相互作用的细胞蛋白，为进一步研究机体抗登革病毒感染的机制奠定了基础。
- 夏君谢炯张佩芬李玉叶刘超黄曦张萍
- 关键词：登革病毒NS4A串联亲和纯化相互作用
- miR-146a对登革病毒诱导的炎性因子的负调控及机制研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨miR-146a对登革病毒感染过程中炎性因子产生的影响及其调控机制。方法建立过表达miR-146a的THP-1细胞模型,以Real-time PCR检测登革病毒诱导的炎性因子TNFα、IL-6、IL-12和IL-8的mRNA表达水平;采用Western blot方法检测细胞丝裂原蛋白激酶(MAPK)信号通路在登革病毒感染后不同时间点的激活情况;通过免疫荧光检测登革病毒感染后核因子κΒ(NF-κB)的核转位情况。结果 miR-146a过表达细胞在登革病毒感染后所表达的TNFα、IL-6、IL-12和IL-8等炎性因子mRNA水平明显下调;miR-146a过表达可明显抑制MAPK、NF-κB信号通路的激活。结论 miR-146a通过抑制登革病毒诱导的MAPK、NF-κB信号通路激活从而调控炎性因子产生。
- 王廷龙吴思宇李玉叶张萍黄曦
- 关键词：MIR-146A登革病毒炎性因子MAPKNF-ΚB
- 固有免疫调控蛋白PKR串联亲和纯化系统的建立及应用被引量：1
- 2011年
- 目的构建固有免疫调控蛋白——双链RNA（dsRNA）调控的蛋白激酶（PKR）的串联亲和纯化系统（TAP），初步研究PKR蛋白功能，以用于与PKR相互作用的新蛋白的鉴定与功能分析。方法通过PCR扩增PKR目的基因，克隆至真核表达载体pcTAP—A中。将重组质粒pcTAP-PKR通过脂质体法转染PKR稳定沉默（PKRkd）的HeLa细胞，并检测PKR对固有免疫信号通路之一，即促分裂素原活化蛋白激酶（MAPK）激活的调控；最后利用串联亲和纯化试剂盒纯化分离与PKR相互作用的蛋白，验证PKR蛋白复合物的纯化情况。结果将重组质粒pcTAP-PKR转染PKRkd HeLa细胞后，24h后即可检测到PKR融合蛋白，相对分子质量约为75×10^3，其表达量随着转染时间的增加而减少；PKR的过表达可发生自我磷酸化，并引起了MAPK信号通路的激活；Westernblot结果显示，小规模TAP纯化试验成功分离纯化了PKR蛋白。结论成功建立了一个PKR表达和串联亲和纯化系统，并证明PKR具有调控MAPK信号通路活性，为今后鉴定与PKR相互作用的蛋白研究奠定了基础。
- 李玉叶梁兆端吴思宇谢炯何军芳吴敏昊黄曦张萍
- 关键词：双链RNA亲和纯化
- 蛋白激酶PKR的克隆表达及与其相互作用的蛋白质的亲和纯化被引量：2
- 2012年
- 目的:克隆并表达双链RNA调节的蛋白激酶(PKR)基因,以纯化分离与PKR相互作用的蛋白质。方法:设计特异性引物,PCR扩增分别得到FLAG-PKR-HA和HA-PKR-FLAG基因片段,克隆至表达载体pSG5中。将重组质粒通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRkd)的HeLa细胞,Western blot检测PKR及标签表达情况;最后,利用HA、FLAG串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与PKR相互作用的蛋白,Western blot技术及银染SDS-PAGE验证PKR蛋白复合物的纯化和分离情况。结果:成功构建了PKR融合蛋白表达载体及FLAG、HA亲和纯化系统,SDS-PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了PKR蛋白带和两条可能与PKR相互作用的蛋白质片段。结论:成功纯化和分离了与PKR相互作用的蛋白质,为进一步研究奠定了基础。
- 谢炯夏君张佩芬李玉叶吴敏昊黄曦张萍
- 关键词：PKR亲和纯化相互作用
