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登革病毒非结构蛋白NS4A的克隆表达及与其相互作用蛋白质的亲和纯化被引量：2: 2013年; 目的克隆表达登革病毒非结构蛋白NS4A，分离纯化与其相互作用的细胞蛋白。方法用特异性引物PCR扩增出FLAG—NS4A-HA基因片段，克隆至真核表达载体pSG5中，将重组质粒通过脂质体法瞬时转染入A549细胞，并通过Western blot检测NS4A融合蛋白的表达情况。利用串联亲和纯化系统（TAP）纯化分离与NS4A相互作用的蛋白，Western blot技术及银染SDS．PAGE验证NS4A蛋白复合物的纯化和分离情况。结果成功构建NS4A蛋白融合表达载体和FLAG、HA串联亲和纯化系统，SDS·PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了NS4A蛋白带和2条可能与NS4A相互作用的蛋白质片段。结论成功分离纯化与NS4A相互作用的细胞蛋白，为进一步研究机体抗登革病毒感染的机制奠定了基础。; 夏君谢炯张佩芬李玉叶刘超黄曦张萍; 关键词：登革病毒 NS4A 串联亲和纯化相互作用

病毒感染与真核细胞应激颗粒: 2012年; 病毒感染真核细胞后诱导细胞eIF-2α磷酸化,翻译的起始受到阻滞,mRNA随后与起始因子、核糖体亚基、mRNA结合蛋白(TIA-1、G3BP、HuR等)结合,聚集形成细胞质RNA应激颗粒(SG)。近几年的研究表明SG可影响病毒复制过程,而病毒亦可通过与SG蛋白组分的相互作用,反馈调节SG形成。本文介绍了SG的形成、组分、生物学意义,以及病毒与SG之间的相互关系。; 张佩芬夏君李玉叶张萍; 关键词：病毒感染翻译

抗病毒蛋白PKR的结构和功能被引量：5: 2013年; 病毒感染后，细胞合成分泌大量的干扰素（In—terferon，IFN），这些IFN通过自分泌或旁分泌的方式与细胞膜上的受体结合。激活STAT／JAK信号级联反应，调控300多个干扰素调控基因（Interferonstimulatedgenes，ISGs）的转录翻译水平，其中包括经典的抗病毒蛋白PKR。PKR即双链RNA依赖性蛋白激酶，是一种丝／苏氨酸蛋白激酶。; 夏君谢炯张萍; 关键词：抗病毒蛋白 PKR 苏氨酸蛋白激酶调控基因病毒感染后合成分泌

蛋白激酶PKR的克隆表达及与其相互作用的蛋白质的亲和纯化被引量：2: 2012年; 目的:克隆并表达双链RNA调节的蛋白激酶(PKR)基因,以纯化分离与PKR相互作用的蛋白质。方法:设计特异性引物,PCR扩增分别得到FLAG-PKR-HA和HA-PKR-FLAG基因片段,克隆至表达载体pSG5中。将重组质粒通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRkd)的HeLa细胞,Western blot检测PKR及标签表达情况;最后,利用HA、FLAG串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与PKR相互作用的蛋白,Western blot技术及银染SDS-PAGE验证PKR蛋白复合物的纯化和分离情况。结果:成功构建了PKR融合蛋白表达载体及FLAG、HA亲和纯化系统,SDS-PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了PKR蛋白带和两条可能与PKR相互作用的蛋白质片段。结论:成功纯化和分离了与PKR相互作用的蛋白质,为进一步研究奠定了基础。; 谢炯夏君张佩芬李玉叶吴敏昊黄曦张萍; 关键词：PKR 亲和纯化相互作用

RNA解旋酶和应激颗粒被引量：1: 2014年; 应激颗粒(stress granules,SGs)是细胞在环境压力刺激下停止蛋白质翻译后,mRNA与多种细胞蛋白组装而成的胞质颗粒结构.RNA解旋酶家族作为生物体内普遍存在的一类高度保守的蛋白质酶类,参与了RNA代谢各个环节,近年来其家族成员被陆续发现是一类新的SG重要组分.本文综述了RNA解旋酶参与应激颗粒形成过程,RNA解旋酶家族蛋白的结构和其参与应激颗粒形成的研究进展.; 徐峰夏君张萍; 关键词：RNA解旋酶

双链RNA依赖性蛋白激酶及与其相互作用的蛋白质被引量：1: 2012年; 双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)是一个经典的干扰素可诱导蛋白,具有抗病毒活性,并参与了细胞信号转导、细胞生长、分化和凋亡等生理过程。此外,PKR在抗病毒的天然免疫应答中亦发挥着十分重要的调控作用。近来,越来越多的研究发现报道了与PKR相互作用的蛋白质,为阐明PKR功能的分子机制提供了重要依据。本文主要介绍了已被证实与PKR相互作用的蛋白质,并对PKR发挥作用的机制进行探讨。; 谢炯夏君张佩芬张萍; 关键词：PKR 相互作用信号通路

与登革病毒NS4A蛋白相互作用的宿主蛋白的鉴定被引量：1: 2015年; 目的鉴定与登革病毒NS4A蛋白发生相互作用的宿主蛋白。方法利用串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与NS4A相互作用的蛋白,进行质谱分析,鉴定可能与NS4A相互作用的蛋白;构建其真核表达质粒,通过蛋白免疫共沉淀技术验证其相互作用。结果质谱结果表明α磷酸烯醇酶(Eno-1)可能与登革病毒的NS4A存在相互作用,在p SG5载体中构建了C端带FLAG标签的p SG5-Eno-1-FLAG重组质粒,并检测到其真核表达。共表达p SG5-Eno-1-FLAG和p SG5-NS4A-HA重组质粒,双向蛋白免疫共沉淀实验进一步证实了Eno-1是与NS4A相互作用的宿主蛋白。结论宿主蛋白Eno-1与登革病毒NS4A存在相互作用,为进一步阐明NS4A在登革病毒复制过程中的调控机制奠定了基础。; 陈小燕夏君刘静宇张萍; 关键词：登革病毒 NS4A

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夏君