杨冠科
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：大连工业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程农业科学更多>>
- 海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定被引量：6
- 2009年
- 通过RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到编码组织蛋白酶L(SjCL)基因,其中全长cDNA 1 287 bp,5′非编码区(UTR)202 bp,3′UTR 87 bp,开放阅读框(ORF)999 bp,编码332个氨基酸(aa),包括组织蛋白酶L成熟肽316 aa和信号肽16 aa,分子质量预测为35.3 ku。用SjCL序列与相似物种海胆、海葵等进行对比,可知SjCL具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守区域ERFNIN和GNFD,以及由Cys 139,His 278和Asn 299残基组成的保守活性位点。将编码SjCL基因克隆进原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-SjCL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞,再进行诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了纯化且具有活性的重组SjCL。酶活力检测结果表明,重组SjCL对组织蛋白酶L特异性底物Z-Phe-Arg-Nmec具有较高活性,而对组织蛋白酶B特异性底物Z-Arg-Arg-Nmec无活性。本实验对SjCL的cDNA序列进行了生物信息学分析并通过基因工程的手段表达出具有活性的重组SjCL,为进一步研究组织蛋白酶L在海刺参自溶过程中的作用提供理论基础。
- 鄢荣歆徐赛涛丛丽娜杨冠科朱蓓薇
- 关键词：组织蛋白酶LRT-PCR
- 海刺参(Stichopus japonicus)电压依赖性钙离子通道β亚基基因及其编码产物的结构特点被引量：3
- 2009年
- 电压依赖性钙离子通道(voltage-dependent calcium channels,VDCC)是细胞膜上控制Ca2+进入胞内的特殊蛋白质,VDCCβ亚基具有调节其通道活性的作用.使用RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到电压依赖性钙离子通道β亚基(SjCaβ)基因,所得序列提交GenBank,登录号EU853658.该基因全长1 867 bp,包含1个1 614 bp的开放阅读框(ORF),编码537个氨基酸.将SjCaβ与多种无脊椎动物钙离子通道β亚基进行分析比较,发现它们有较高的同源性,并具有钙离子通道β亚基基因内保守的2个功能区域,即SH3功能区(src-homology 3 domain)和GK功能区(guanylate kinase domain).在功能区域附近还具有电压依赖性钙离子通道β亚基特有的BID区(βinteraction domain),氨基酸保守序列为PYDVVP-RP---VGPSLKGYEVTDMMQKALFDF,进一步确定了得到的cDNA序列为海刺参电压依赖性钙离子通道β亚基.对SjCaβ的二级结构进行了预测,构建了系统进化发育树,并运用同源建模法构建了SjCaβ的三维结构模型.研究结果对深入研究海刺参离子通道的结构以及在信号传导过程中的作用有着重要意义,并为研究海刺参自溶等问题提供一定的理论基础.
- 杨冠科丛丽娜谢三群张宗申朱蓓薇
- 关键词：Β亚基
- 重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶
- 一种重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶，该方法是将海参溶菌酶基因(SEQ ID NO.1)连接到真核表达载体pPIC9K中构建重组质粒，并将所形成的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168中，经甲醇诱导表达，...
- 丛丽娜朱蓓薇王秀霞谷跃峰杨冠科郝明董秀萍
- 文献传递
- 重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶
- 一种重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶，该方法是将海参溶菌酶基因(SEQ ID NO.1)连接到真核表达载体pPIC9K中构建重组质粒，并将所形成的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168中，经甲醇诱导表达，...
- 丛丽娜朱蓓薇王秀霞谷跃峰杨冠科郝明董秀萍
- 文献传递
- 海参钙离子通道基因的克隆与性质分析
- 电压依赖型钙离子通道（voltage-dependent calcium channel, VDCC）是细胞膜上控制Ca2+进入胞内的特殊蛋白质，VDCC β亚基具有调节其通道活性的作用。本文使用RT-PCR和RACE ...
- 杨冠科
- 关键词：Β亚基RT-PCR
- 文献传递
- 烃降解菌HB29产糖脂发酵条件的研究被引量：6
- 2009年
- 对烃降解菌HB29代谢产生的表面活性物质进行了带电性测定及红外光谱分析,结果表明,HB29代谢产阴离子表面活性物质,主要成分为糖脂。通过摇瓶培养实验,研究了烃降解菌HB29产糖脂的适宜发酵条件,结果表明,该菌株的最适发酵条件为:初始pH值8.0,接种量2%,250mL三角瓶中的装液量为75mL。
- 侯百友孙玉梅杨冠科杨红
- 关键词：烃降解菌糖脂发酵条件
