王潇潇
- 作品数：6 被引量：22H指数：4
- 供职机构：北京生物制品研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 水痘-带状疱疹病毒VZV84-7株全基因序列测定及分析被引量：4
- 2010年
- 目的分析我国自行分离的水痘-带状疱疹病毒疫苗株北京株(VZV84-7株)的全基因序列及特征。方法采用超速离心法获得纯化病毒颗粒,酚-氯仿法抽提病毒基因组DNA后超声破碎,回收1500～3000bp的片段,克隆至质粒pUC18中,构建病毒DNA文库,进行测序及序列分析,并与Dumas野毒株进行比较,绘制种系发育树,分析其与其他株VZV的同源性。结果VZV84-7株基因组全长125083bp,G+C含量为46.1%。基因组各区段长度及G+C含量分别为:UL:104746bp,G+C:44.3%;TRL和IRL:各89bp,G+C:69.7%;Us:5235bp,G+C:42.8%;TRS和IRS:各7462bp,G+C:59.3%。其R2可变区重复单位的拷贝数为7个,R4可变区为9个,R5可变区为1个。VZV84-7株共有71个ORFs,其中3个基因位于重复序列区,位于IRS的ORF69～71与位于TRS的ORF62～64序列完全一致。与Dumas株相比,共有248个核苷酸位置存在差异,大部分突变为单个核苷酸替换,另有部分插入或缺失性突变。其中碱基转换比碱基颠换更常见,发生率分别为66%和34%。种系发育分析结果显示,VZV84-7株与其他株VZV的同源性为95%以上。结论VZV84-7株具有其独特的基因特征,但与其他株VZV具有较高的同源性。
- 李秀玲王潇潇张中洋郝春生张晨何薇薇
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒基因
- 肠病毒71型空斑检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 目的建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段。方法将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Vero细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度。通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对空斑法与微量细胞病变法检测病毒滴度的结果进行比较。结果采用RD细胞和Vero细胞,通过空斑法对EV71病毒滴度进行检测,96h后均能规律地出现边缘整齐、清晰的空斑,RD细胞和Vero细胞检测的空斑直径分别为1～2mm和0.5～1mm。连续3次重复试验结果显示,试验间变异系数的平均值Vero细胞为2.52%,RD细胞为4.49%。空斑法与微量细胞病变法比较,其检测结果具有良好的线性相关性,相关系数为r=0.972,P=0.006。结论已建立了精密性好、出斑规律的EV71病毒空斑检测方法。
- 郝春生赵敏张晨何薇薇王潇潇杨永娟张中洋沈心亮李秀玲
- 关键词：肠病毒71型
- 三种类型CpG-ODN作为蛋白亚单位疫苗佐剂的比较研究被引量：4
- 2008年
- 目的比较A、B和C3种类型CpG-ODN在动物模型中的疫苗佐剂活性，为设计高活性的新型人用疫苗佐剂提供理论基础。方法用不同CpG-ODN刺激体外培养的小鼠脾细胞，检测上清中的IFN-γ和IgM，从而确定3种类型的CpG-ODN。以基因工程乙肝表面抗原（HBsAg）为模型抗原、不同类型CpG-ODN为佐剂免疫BALB／c小鼠，用间接ELISA法检测被免动物血清中抗原特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体。结果小鼠免疫结果表明，与A1（OH），对照组相比，3种类型CpG-ODN均具有良好的疫苗佐剂活性，但B和c型CpG-ODN诱生的抗原特异性IgG和IgG2a抗体水平远高于A型CpG-ODN。虽然A型CpG-ODN也能够显著增强总抗体水平，但并不改变IgG1和IgG2a抗体亚型的比值。这与B和c型CpG-ODN能够极大地促进TH1类免疫应答并降低IgG1／IgG2a比值明显不同，提示不同类型CpG-ODN可能通过不同机制起到疫苗佐剂作用。结论不同类型CpG-ODN具有不同疫苗佐剂活性，B和C型CpG-ODN在小鼠体内的体液免疫佐剂效果优于A型CpG-ODN。
- 张中洋王潇潇郝春生郑晓霞卜令楠许洪林
- 关键词：CPG-ODN乙肝表面抗原佐剂
- 人类肠道病毒71型的研究进展被引量：9
- 2010年
- 肠道病毒71型是引起手足口病的主要病原体之一，其感染还可导致多种与神经系统相关的疾病，致残率及病死率较高。近年来，EV71感染在全球范围呈现上升趋势，2008年我国也有较大规模流行。本文对EV71的病原学特征、流行病学特征以及相关最新研究进展等方面作一综述。
- 郭会杰王潇潇李秀玲
- 关键词：肠道病毒71型受体疫苗
- 肠病毒71型分离株的鉴定及免疫原性研究被引量：1
- 2009年
- 目的在对肠病毒71型（enterovirus 71，EV71）分离株进行鉴定的基础上，对其诱导小鼠产生的免疫应答水平进行研究，拟为进一步的EV71候选疫苗研究奠定基础。方法超速离心纯化病毒后，采用磷钨酸负染法通过电镜观察病毒形态、大小；采用特异性EV71单抗通过间接免疫荧光法（IFA）检测病毒的特异性；合成EV71特异性引物，通过RT—PCR对病毒进行分子生物学鉴定；病毒的VP1基因序列测定后，与其他EV71序列进行比较，绘制种系发育树，确定病毒基因型；通过腹腔注射途径免疫小鼠，免疫后分离血清通过微量细胞病变抑制法测定血清中和抗体效价，ELISA法检测血清抗体水平和抗体亚型水平。结果电镜下可观察到典型的圆形病毒颗粒，直径为20～30nm，呈典型的肠病毒形态；085和087株病毒感染细胞中均能观察到黄绿色荧光，提示该两株病毒可与EV71单抗特异性结合；RT—PCR可以从病毒感染细胞中扩增出226bp大小的特异性产物带，而采用CA16特异性引物则不能扩增出相应大小的产物带；基于VP1基因序列的种系发育分析显示，087和085株均为c4基因型；085和087株E、EV71免疫小鼠后可诱导产生能中和包括其本身在内的多个病毒株的中和抗体，针对同一株中和病毒，实验组间差异无统计学意义；针对不同中和病毒株，各实验组中和本株、523-07T株的能力明显高于FY-02T株（P〈0．05）；ELISA法检测结果显示，接种灭活前后的EV71病毒085和087株后均能诱导小鼠产生抗EV71特异性IgG；IgG亚型为IgG1／IgG2a混合型，灭活病毒免疫组小鼠血清EV71特异性IgG、IgG1、IgG2a水平明显高于活病毒免疫组（P〈0．05）。两株病毒之间差异无统计学意义。结论本研究分离到的085和087株病毒均为EV71CA基因亚型，并具有一定的免疫原性。
- 李秀玲张中洋王潇潇杨永娟郝春生赵敏何薇薇张晨沈心亮
- 关键词：肠病毒71型免疫原性
- 表达呼吸道合胞病毒F蛋白编码基因的重组腺病毒载体的构建
- 2009年
- 目的构建表达呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）F蛋白编码基因片段的重组腺病毒。方法以RSV RNA为模板，利用RT—PCR扩增出F基因片段，应用AdEasy腺病毒载体系统，构建含有目的基因的重组穿梭质粒pShuttle—CMV／F，再转化含有骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183-AD-1获得重组腺病毒质粒pAdEasy／F。将该质粒转染293细胞包装产生出重组腺病毒rAd／F。重组腺病毒分别经电子显微镜技术、RT—PCR、Western blot和间接免疫荧光方法进行鉴定，并对该重组腺病毒的滴度和遗传稳定性进行了初步研究。结果获得了含有RSVF基因片段的重组腺病毒rAd／F，电子显微镜下可见典型腺病毒颗粒形态，RT-PCR、Western blot和间接免疫荧光方法分析显示rAd／F中的F基因片段可以在293细胞中有效转录和表达。结论成功构建出含有RSVF基因片段的重组腺病毒rAd／F，为进一步研究重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。
- 王潇潇李秀玲赵铠
- 关键词：呼吸道合胞病毒融合蛋白腺病毒载体
