郑业华
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军更多>>
- 发文基金：广州市科技局重点攻关项目广州市科委科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种干细胞分离液及其用于干细胞分离的方法
- 本发明涉及干细胞分离和纯化的领域，尤其是涉及一种干细胞分离液及其用于干细胞分离的方法。本发明所述的一种干细胞分离液，按重量份数包括以下组分：泛影葡胺0－10份，羟甲基纤维素0－10份，氯化铯0－1.0份，聚蔗糖0－10份...
- 邹清雁孔祥平郑业华杨联萍刘惠平
- 文献传递
- 人源性抗HBsAg噬菌体抗体的筛选及纯化
- 1998年
- 目的:获得人源性抗HBsAg抗体Fab片段。方法:用预包被HBsAg的ELISA板,从构建的人全套抗体库中筛选出针对HBsAg的噬菌体抗体。并转入大肠杆菌中表达。破裂细胞后,获得可溶性Fab片段。以羊抗人Fab抗体偶联HiTrap柱。
- 余宙耀粟宽源任向荣高辉高磊张宜俊曾平鲁龙玉琴郑业华陈文吟陈南春陈苏民
- 关键词：HBSAG
- 人源性抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达及活性测定被引量：5
- 2002年
- 目的 :制备有活性的人源性抗HBsAg单链抗体。方法 :应用噬菌体表面呈现技术获得人抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗体的Fab片段 ,并将VH 和VL 基因以 (Gly4Ser) 3linker连接成单链 ,插入表达载体pQE40 ,筛选大肠杆菌高表达菌株。结果 :工程菌表达优化试验表明 ,在OD6 0 0 为 0 6时开始诱导 ,持续 6h ,目的蛋白表达量最高可达菌体总蛋白的 31%。包涵体变性后上样镍离子螯合层析柱一步纯化 ,收集目的峰 ,透析复性 ,得纯度为 97%的重组单链抗体 ,其亲和常数为 0 2 3× 10 8mol L。结论 :抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌内获得高效表达 ,经变性和复性 ,得到有活性的单链抗体 ,氨基酸组成正确。为进行临床前研究打下基础。
- 任向荣熊盛唐永红粟宽源陈文吟郑业华余宙耀
- 关键词：大肠杆菌噬菌体表面呈现乙型肝炎表面抗原复性
- 重组人抗HBs-Fab抗体的纯化及结构分析被引量：4
- 2006年
- 目的研究重组人抗HBs-Fab抗体的纯化工艺,并对其结构等特性进行分析。方法采用离子交换-分子筛层析法分离纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAg Fab抗体,并经ELISA检测其抗体活性,等电聚焦电泳法检测其等电点(pI),基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量和肽质量图谱。结果纯化的重组Fab抗体的纯度可达90%以上,经Sephacryl-100进一步层析后,纯度达99%以上,总收率可达80%以上。Fab抗体具有较好的抗体活性,其pI值为7·6,为一碱性蛋白,相对分子质量为50494,比其理论值约多2579·35,经Endoglycosidase H内切酶消化后的相对分子质量为49609,证明Fab的一级结构中有糖基化现象,且分布于Fab抗体的H链和L链上。胰酶酶解肽段中有21个与理论肽段相符,另检测到1对二硫键正确。结论已建立了重组人抗HBs-Fab抗体的稳定的纯化工艺,且Fab抗体的一级结构正确。
- 饶桂荣陈文吟粟宽源任向荣郑业华余宙耀
- 关键词：FAB片段纯化
- 抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达及活性测定
- 2001年
- 任向荣熊盛唐永红粟宽源陈文吟郑业华余宙耀
- 关键词：人源性包涵体总蛋白目的蛋白金属镍
- 抗HBsAg单链抗体与白细胞介素-2融合蛋白的构建与序列测定被引量：3
- 2002年
- 目的:构建以人抗乙肝表面抗原（HBsAg）单链抗体（ScFv）为导向作用,白细胞介素-2（IL-2）为治疗作用的融合蛋白原核表达载体pQE 40/ScFv-IL-2。方法:应用PCR技术将抗HBsAg单链抗体与白细胞介素-2在分子水平上进行基因重组,构建中间载体pGEM7Zf（+）/ScFv-IL-2,经酶切鉴定及序列测定正确后,将目的基因片段克隆到pQE 40表达载体中,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达。结果:SDS-PAGE结果显示在相对分子质量约4.3×104Da处,可见蛋白表达带。以鼠抗人IL-2单克隆抗体经免疫印迹验证,该表达蛋白为所设计的融合蛋白。结论:融合蛋白ScFv-IL-2的成功构建及表达,为融合蛋白的纯化和研究开发新型的乙肝导向治疗的基因工程药物打下良好的基础。
- 陈文吟粟宽源任向荣唐永红郑业华余宙耀
- 关键词：白细胞介素-2基因重组融合蛋白免疫印迹法
- 重组人源抗HBsAg单链抗体的纯化及亲和常数测定被引量：10
- 2002年
- 目的 :对融合 6×His标签的人源抗乙型肝炎表面抗原单链抗体的包涵体进行纯化和复性 ,并对复性产物的抗原结合性质进行鉴定。方法 :工程菌表达的包涵体裂解后 ,金属螯合亲合层析纯化 ,然后以尿素透析、盐酸胍透析和金属螯合亲和层析柱原位复性 3种方法进行复性 ;复性产物以免疫亲和层析精制 ,非竞争酶免疫法测定亲和常数结果 :盐酸胍透析复性产物的比活性最高 ,蛋白回收率为 (6 1 0 8± 1 4 5 ) % ;精制后的重组单链抗体的亲和常数为 (2 30± 0 32 )× 10 7L/mol。结论 :本株单链抗体可以应用优化的透析复性技术 ,在体外高效复性 ,其抗原结合性质不受N末端纯化标签的影响。
- 熊盛任向荣严兴唐永红郑业华粟宽源余宙耀姚汝华
- 关键词：乙型肝炎抗体包涵体抗体亲和力
