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表达外源rhBMP2的CHO细胞株稳定性分析被引量：2: 2008年; 骨形态发生蛋白2(BMP2)属于TGF-β超家族,是诱导成骨活性最强的BMPs之一,具有广泛的临床应用的前景。本实验室已成功构建高效表达rhBMP2的重组CHO细胞株,现选取其中一株表达量最高的细胞rCHO(hBMP2)-C8进行长期体外培养,并在培养过程中比较了添加和去除压力筛选中使用的MTX对细胞生长,rhBMP2基因拷贝数及rhBMP2分泌蛋白表达的影响;检测了该细胞株在无血清培养基中可以连续表达rhBMP2的时间以及培养基中rhBMP2的温度敏感性等等。该研究为进一步采用动物细胞规模化培养技术生产rhBMP2奠定了基础。; 翟春利闫继东杨爽杜君袁伟王兆奇朱天慧; 关键词：BMP2 稳定性

不同蛋白标签对LMO2融合蛋白沉淀实验的影响被引量：3: 2008年; 融合蛋白沉淀技术是一种用来研究蛋白质相互作用的新的体外实验技术,通常利用蛋白亲和标签与探针蛋白融合表达来钓取未知相互作用蛋白或验证已知蛋白间的相互作用,其中以谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签最为常用。LMO2(由LIMonly缩写得名,也称Ttg-2或Rbtn2)是一种小分子量难溶蛋白。利用原核系统分别表达了含有GST和麦芽糖结合蛋白(MBP)两种标签的LMO2融合蛋白,发现GST-LMO2融合蛋白以包涵体的形式表达,而MBP-LMO2融合蛋白则能够以可溶形式表达,而且MBP-LMO2的表达量明显高于GST-LMO2融合蛋白。将可溶性的MBP-LMO2融合蛋白和复性后的GST-LMO2融合蛋白分别用于钓取K562细胞中LMO2的结合蛋白,结果显示二者都可以结合K562细胞中内源性的GATA1蛋白,而MBP-LMO2融合蛋白捕获的GATA1蛋白明显多于复性后的GST-LMO2融合蛋白。这一结果提示,在研究一些分子量小、疏水性强的蛋白质时改变标签蛋白可能是一种有益的尝试。; 袁伟孙伟杨爽闫继东翟春利杜君王兆琦安迪朱天慧; 关键词：麦芽糖结合蛋白

原癌基因LMO2短剪切模式的结合蛋白鉴定及功能分析: 2008年; 目的研究原癌基因LMO2短剪切模式（LMO2-C）的结合蛋白在白血病细胞K562中的表达及功能分析。方法利用麦芽糖结合蛋白（MBP）沉淀技术和哺乳动物双杂交技术研究LMO2-C的结合蛋白在K562细胞中的表达；半定量RT-PCR检测过表达LMO2-C的K562细胞中红系发育的标志性基因GPA的表达水平。结果MBP原核表达系统成功表达并被纯化出可溶性MBP-LMO2-C结合蛋白，利用MBP沉淀技术验证了LMO2-C能与K562细胞中内源性的GATA-1、LDB1结合；哺乳动物双杂交试验进一步证明LMO2-C能与LDB1结合，而且其过表达能够抑制LMO2-L与LDB1的结合，抑制率达（81．13±0．68）％；半定量RT-PCR结果显示在过表达LMO2-C的K562细胞中，GPA基因相对表达水平下调（51．00±1．58）％。结论LMO2-C能结合K562细胞中内源性GATA-1、LDB1蛋白，并能下调红系发育的标志性基因GPA的表达。; 袁伟杨爽孙伟杜君翟春利王兆琦朱天慧; 关键词：基因双杂交系统技术

乳腺癌细胞MDA-MB-231中δEF1抑制BMP-6诱导E-cadherin转录的机制研究: 半定量 RT-PCR 分析显示,在 ER+人乳腺癌细胞中,BMP-6和 E-cadherin 呈高表达而δEF1呈低表达;在 ER人乳腺癌细胞中,δEF1呈高表达而 BMP-6呈低表达,E-cadherin 几乎检测不到...; 杨爽杜君王兆琪袁伟乔玉欢张明张杰朱天慧; 关键词：E-CADHERIN 乳腺癌转录调控; 文献传递

电穿孔法基因转染哺乳动物细胞的应用被引量：4: 2007年; 应用电穿孔技术转染pEGFP于哺乳动物细胞,讨论了电穿孔技术的应用条件,影响因素,初步确定了COS7、Hela、HepG2、K562、Jurkat等细胞系的转染条件,为今后的分子生物学研究打下了良好的基础。; 乔玉欢杨爽袁伟杜金张杰朱天慧; 关键词：电穿孔哺乳动物细胞绿色荧光蛋白基因

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袁伟