贾山岭
- 作品数：13 被引量：15H指数：2
- 供职机构：塔里木大学更多>>
- 发文基金：新疆生产建设兵团博士基金国家自然科学基金新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室开放课题更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种新疆多浪羊外周血淋巴细胞cDNA文库的构建方法
- 本发明涉及一种新疆多浪羊外周血淋巴细胞cDNA文库的构建方法，属于生物技术领域。具体构建方法及过程如下：(1)提取和纯化总RNA；(2)合成cDNA第一链；(3)合成cDNA第二链；(4)对产物进行消化、酶切、过柱分离及...
- 李莲瑞潘伊微贾山岭王娟娟曾国航徐宏伟李玮
- 文献传递
- 新疆多浪羊IL-1β基因地高辛探针的标记和敏感性检测
- 2015年
- 【目的】IL-1β是一种多效的促炎因子,在细胞因子炎性反应中为重要介质,处于介导炎性反应的重要因子,在造血和免疫活性中都发挥重要的作用。该实验结果为进一步研究绵羊分子免疫学,从多浪羊外周血淋巴细胞c DNA文库的筛选基因,寻找与IL-1β相关的新基因奠定基础。【方法】将构建好的多浪羊的p MD-18T-IL-1β质粒[1]进行PCR扩增,经过切胶回收,目的基因的浓缩后,采用罗氏地高辛标记和检测试剂盒标记IL-1β基因,获得IL-1β地高辛探针,进行敏感性检测,在Hybond N+膜上显影,计算探针浓度。【结果】计算出标记后的探针浓度为17.1 g/m L。【结论】通过southern杂交可以得知,Hybond N+膜上有IL-1β基因的双链DNA,标准杂交液中为DIG标记的IL-1β基因单链DNA,通过避光显色,在Hybond N+膜有深紫色的杂交条带,证明探针的浓度达到标准浓度。
- 曾国航徐宏伟潘伊微贾山岭曹玉华李莲瑞
- 关键词：地高辛
- 新疆卡拉库尔羊Fas基因原核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank的羊Fas细胞凋亡因子序列设计1对特异性引物,将EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点引入到引物两端,同时加上保护性碱基。利用RT-PCR技术,从新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA中扩增出特异性基因片段。将分离纯化后的PCR产物与pMD-18T载体进行连接,利用双酶切反应与菌液PCR对阳性重组克隆进行鉴定筛选,然后进行序列测定。使用原核表达载体pET28a来完成Fas的定向克隆,成功构建重组融合表达质粒pET-28a-Fas,然后将质粒转化至E.coli BL21感受态,设置不同IPTG浓度和诱导温度,选择最佳的表达条件,然后初步纯化重组融合蛋白。结果表明,在pET28a表达载体中,Fas基因的插入方向和读码框均正确;同时Fas基因也完成在E.coli BL21融合表达的目的,融合蛋白分子质量为39.7ku。
- 贾山岭潘伊微潘辉贺艳艳李莲瑞
- 关键词：FAS基因原核表达
- 新疆卡拉库尔羊TNF-α原核表达及多克隆抗体的制备
- 2013年
- 【目的】克隆卡拉库尔羊TNF-α基因,在大肠杆菌中表达、纯化,并对TNF-α蛋白的抗原性进行分析。【方法】采用PCR技术扩增TNF-α基因核酸片段,并克隆入pET-28b表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)株中表达。用电洗脱法纯化目的蛋白,并用免疫印迹法分析纯化蛋白的抗原特异性。【结果】重组质粒在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导表达一个相对分子质量约为49 KD的融合重组蛋白,原核表达质粒pET-28b-TNF-α表达的目的融合蛋白是以可溶的形式存在。用纯化的pET-28b-TNF-α免疫家兔,在免疫后的第45 d,Western-blotting和琼脂糖扩散试验分析表明,表达的pET-28b-TNF-α能被家兔的阳性血清所识别。【结论】表达蛋白pET-28b-TNF-α具有较好的反应原性和免疫原性。
- 潘伊微贺艳艳潘辉贾山岭李莲瑞
- 关键词：表达纯化抗原性分析
- 叶尔羌高原鳅表皮抗菌肽的提取及抑菌试验被引量：1
- 2013年
- 生物体产生的抗菌肽是对抗外源性病原体侵袭致病作用的防御性肽类活性物质。本试验主要取活体叶尔羌高原鳅的表皮放入研钵中,加入蛋白酶抑制剂和Tris--c1研成肉糊状,用乙酸乙酯浸提法提取抗菌肽;经水合茚三酮显色反应为蓝紫色,DE-52纯化产物后SDS-PAGE蛋白电泳鉴定,其分子量约为9 700Da,并对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌表现出明显的抗菌活性。
- 贾山岭刘书东潘伊微陈根元李莲瑞
- 关键词：叶尔羌高原鳅抗菌肽抑菌试验
- 新疆卡拉库尔羊Fas基因重组蛋白包涵体的纯化及抗原性分析
- 2012年
- 目的:为了探明Fas基因重组蛋白是否保留天然蛋白的抗原性,为下一步大量制备基础诊断、预防、控制、治疗试剂奠定基础。本实验将Fas基因与原核表达载体pET-28a成功构建了重组融合表达质粒pET-28a-Fas然后转化至E.coliBL21(DE3)感受态当中,找到最佳表达条件,初步纯化了重组融合蛋白,通过对家兔免疫后的血清进行琼扩实验与蛋白质印迹实验分析其抗原性。结果表明,纯化后的包涵体有明显的条带,经测定融合蛋白分子量为39.7 KDa。结论:说明纯化效果好,优化融合蛋白表达量占菌体总蛋白的15.6%,并且证明Fas具有免疫原性和反应原性。
- 潘伊微贾山岭潘辉贺艳艳李莲瑞
- 关键词：FAS基因包涵体抗原性分析
- 叶尔羌高原鳅外周血淋巴细胞的分离
- 2012年
- 以体质健康的叶尔羌高原鳅为研究对象,分离其外周血淋巴细胞。结果表明,采用浓度为1.085g/mL的淋巴细胞分离液在2000r/min离心35min的情况下,可将叶尔羌高原鳅外周血淋巴细胞有效地分离出来。该研究不仅为叶尔羌高原鳅淋巴细胞功能研究提供了依据,还可为叶尔羌高原鳅的疾病防治、人工养殖提供重要参考。
- 沙爱龙贾山岭潘伊薇刘书东李莲瑞
- 关键词：叶尔羌高原鳅外周血淋巴细胞
- 新疆卡拉库尔羊Fas基因原核表达载体的构建及表达
- 2014年
- 根据GenBank的羊Fas细胞凋亡因子序列设计1对特异性引物，将EcoRI和XhoⅠ酶切位点引入到引物两端，同时加上保护性碱基。利用RT—PCR技术，从新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA中扩增出特异性基因片段。将分离纯化后的PCR产物与pMD-18T载体进行连接，
- 贾山岭
- 关键词：FAS基因原核表达载体特异性引物GENBANK外周血淋巴细胞PCR技术
- 棉酚对新疆多浪羊淋巴细胞IL-18基因表达影响的研究方法
- 本发明涉及一种棉酚对新疆多浪羊淋巴细胞IL-18基因表达影响的研究方法，属于生物技术领域。其具体方法和步骤如下：(1)分离和培养淋巴细胞；(2)提取总RNA；(3)合成cDNA；(4)cDNA的纯化；(5)设计引物；(6...
- 李莲瑞王娟娟潘伊微贾山岭徐宏伟曾国航李玮
- 文献传递
- MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响被引量：3
- 2013年
- 通过MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响,确定棉酚对多浪羊淋巴细胞产生影响的最短作用时间和最低浓度,用于指导生产实践。从新疆多浪羊外周血分离淋巴细胞,将其加入10 mL的RPMI-1640中,均匀加入96孔细胞培养板中,于CO2培养箱中37℃培养12 h后,分别以不同浓度(5、10、15、20、25、30、35μmol/L)的棉酚进行作用,作用时间分别为1、2、3、4、5、6 h,加入MTT培养4 h,加入DMSO溶液终止反应,用酶联免疫检测仪于490 nm处检测各孔的吸光值。结果表明,随着棉酚作用浓度及作用时间的递增,多浪羊淋巴细胞活性在逐渐下降,说明棉酚对多浪羊的淋巴细胞活性有明显的抑制作用。
- 王娟娟贾山岭万新军李莲瑞
- 关键词：MTT棉酚淋巴细胞
