郑学星
- 作品数：92 被引量：158H指数：7
- 供职机构：山东大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家科技支撑计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 犬科和/或猫科动物疫病重组活载体疫苗的制备方法
- 本发明提供了一种基于RNA病毒拯救技术的，制备犬科和/或猫科动物疫病重组活载体疫苗的方法，其基于反向遗传操作系统构建了可表达犬科和/或猫科动物疫病主要保护性抗原的重组病毒表达载体。利用该表达载体和辅助质粒共同转染狂犬病病...
- 杨松涛王化磊金宏丽冯娜赵永坤郑学星高玉伟王承宇王铁成黄耕夏咸柱
- 文献传递
- 犬瘟热病毒囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及鉴定被引量：1
- 2015年
- 为表达具有天然构象的犬瘟热病毒(CDV)囊膜糖蛋白融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H),本研究扩增小熊猫源CDV驯化致弱株LP的F、H基因,克隆至pFastBacTM1载体中,测序验证后转化至DH10BacTM感受态细胞,同源重组获得穿梭质粒rBacmid-F、rBacmid-H,将其分别转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rpFB-F、rpFB-H,并将表达的重组融合蛋白(rF)和血凝素蛋白(rH)进行IFA和Western blot鉴定。以犬抗CDV高免血清对重组杆状病毒感染细胞进行IFA鉴定,在感染细胞的细胞膜上可见特异性荧光反应;以鼠抗F、H蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体对重组杆状病毒感染细胞进行Western blot检测,可见相对分子质量为63和68ku左右的条带,分别为重组融合蛋白(rF)和血凝素蛋白(rH),大小与预期相符。两种囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中均成功表达,且具有良好的反应原性。本研究为CDV病毒样颗粒疫苗的开发等工作奠定了基础。
- 虞一聪冯娜闫飞虎盖微微王铁成王化磊郑学星赵永坤黄耕杨松涛高玉伟夏咸柱
- 关键词：犬瘟热病毒融合蛋白血凝素蛋白
- 小鼠体内SEG蛋白靶向运送shRNA抑制狂犬病毒复制被引量：1
- 2016年
- 【目的】本试验前期已经证实,用单链抗体(sc Fv)-绿脓杆菌跨膜区(ETA)-酵母DNA结合结构域(GAL4)表达的蛋白(简写为SEG蛋白),SEG能与含sh RNA(short hairpin RNA)的质粒(p RNATU6.3-sh RNA)结合形成复合物SEG-sh RNA,并靶向运送该质粒进入感染狂犬病毒(Rabies virus,RV)的细胞,抑制RV复制。本研究用感染狂犬病病毒的小鼠模型,进行SEG-sh RNA复合物小鼠体内靶向性运送si RNA(short interfering RNA)和抑制RV复制的研究。【方法】用已建立RV CVS-24株小鼠肌肉注射模型进行试验。取50 LD_(50) CVS-24攻毒,在攻毒后12 h尾静脉注射SEG-sh RNA,流式细胞仪检测SEG-sh RNA的体内靶向性;同样方法攻毒后,尾静脉注射SEG-sh RNA,连续4 d,攻毒后第5天小鼠脑组织用q RT-PCR、RT-PCR、Western blot、免疫荧光染色法检测其中RV的含量;统计小鼠存活率;并检测小鼠体内IFN-α含量,从而分析SEG-sh RNA在体内的抗病毒作用。【结果】结果表明仅在RV攻毒小鼠的注射部位检测到绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达,未注射RV的腿部及脑、肝、脾、肾均无GFP表达,说明SEG-sh RNA可靶向RV感染细胞运送sh RNA。攻毒后第5天脑组织q RT-PCR结果表明靶向药物组比病毒对照减少4.88倍(3.9/0.8);RT-PCR、Western blot、免疫荧光染色试验结果表明使用SEG-sh RNA组病毒量明显少于病毒对照组;且攻毒后13 d,动物存活率达50%,而病毒对照100%死亡。检测小鼠体内IFN-α未见升高。【结论】以上试验表明SEG蛋白在小鼠体内靶向运送含sh RNA的质粒到感染组织细胞;对小鼠体内RV有明显抑制作用,因此可以用于狂犬病毒感染的特异辅助性救治研究。
- 杨瑞梅王化磊郑学星单虎杨松涛夏咸柱
- 关键词：狂犬病毒SHRNA小鼠
- TaqMan探针荧光定量PCR支原体快速检测方法的建立及应用被引量：6
- 2010年
- 目的:在支原体16SrRNA的种属特异性区域设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立荧光定量PCR方法,检测细胞培养物中支原体。方法:选择16srRNA支原体种属特异性区域作为扩增区,设计支原体通用引物,PCR扩增片段的预期大小为288bp。回收PCR扩增产物,连接pMD-18T载体,转化JM109大肠杆菌,涂布Amp+琼脂平板,挑取阳性克隆进行PCR鉴定后提取质粒。构建荧光定量PCR绝对定量的标准品,设计荧光定量引物、探针,采用矩阵法对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验灵敏度并与普通PCR法及培养法进行比较;对支原体及其他5种革兰氏阳性杆菌进行特异性检验;对培养法、普通PCR法及荧光定量PCR法检测样本的灵敏度进行比较。结果:支原体PCR产物大小约为288bp,质粒质量浓度为13.9mg·mL-1,A260/A280(Ratio)为1.780,质粒溶液浓度为4.25×109拷贝.μL-1。10μmol.L-1的引物浓度和10μmol.L-1探针浓度为最佳反应浓度,双温循环及60℃退火温度为最佳的循环条件。检测灵敏度为4.250×101拷贝。拷贝数与Ct值之间的线性关系表达式:Ct=-2.916×log拷贝数+40.02。特异性检验中5种革兰氏阳性杆菌样本检测均为阴性,支原体样本为阳性,表明特异性好。准确性检测中变异系数小,表明稳定性好。组内及组间相同浓度样本检测具有相同的Ct值,表明重现性好。样本检验中,荧光定量PCR检测出的阳性样本高于普通PCR及培养法。结论:支原体荧光定量PCR法检测细胞样本及临床样本中支原体快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好。
- 倪红霞刘志辉郑学星王化磊扬松涛夏咸柱
- 关键词：TAQMAN探针支原体荧光定量PCR
- TaqMan探针实时荧光定量PCR诊断犬瘟热病毒方法的建立被引量：9
- 2007年
- 根据犬瘟热病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量PCR。构建FQ-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。结果显示:实验成功构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.994。犬瘟热病毒FQ-PCR检测反应的灵敏度为10TCID50;5种非犬瘟热病毒病原体检测均为阴性;说明实验建立的FQ-PCR具有快速、灵敏和稳定的特点,适用于临床样品的检验。
- 苏建青郑学星候小强岳妙姝夏咸柱
- 关键词：TAQMAN探针荧光定量犬瘟热病毒
- 生物反应器用加样口针头封闭器
- 本实用新型提供一种生物反应器用加样口针头封闭器，由右端盖、筒体、连接盖、密封盖及橡胶垫构成，筒体的一端通过螺纹连接有右端盖及橡胶垫，右端盖的中部设有针孔；筒体的另一端通过螺纹连接有橡胶垫、连接盖，连接盖的中部设有用于针头...
- 黄耕钱军万忠海高玉伟夏志平杨松涛王承宇赵永坤周博赵思言刘琳娜王铁成张国利王化磊郑学星夏振强李明银常琳黄靖孟轲音何扬夏咸柱
- 文献传递
- 狂犬病病毒重组免疫毒素的表达及其生物活性鉴定被引量：1
- 2008年
- 将狂犬病病毒中和性单链抗体基因克隆入原核表达载体pET-PE40,经酶切鉴定及序列测定,成功构建了重组免疫毒素原核表达载体。IPTG诱导后目的蛋白获得高效表达,SDS-PAGE分析目的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于菌体中,表达量占菌体总蛋白的32.29%。包涵体蛋白经体外复性及离子交换色谱柱、疏水作用色谱柱、Sephadex G200凝胶过滤层析柱三步纯化后获得纯度大于96%的目的蛋白,间接免疫荧光染色检测表明重组免疫毒素与狂犬病病毒感染细胞具有抗原结合活性,MTT试验显示,重组免疫毒素对狂犬病病毒感染细胞具有明显的杀伤作用,而对正常细胞无杀伤作用。
- 王化磊王承宇杨松涛冯娜郑学星李群苏建青朱平夏咸柱
- 关键词：重组免疫毒素狂犬病病毒糖蛋白细胞毒作用
- 芋螺毒素的生物学制备方法及其产品和用途
- 本发明公开了一种芋螺毒素的生物学制备方法及其产品和用途。包括：(1)将芋螺毒素基因克隆到杆状病毒运载载体的表达盒中得到重组转移表达载体；(2)将重组转移表达载体与杆状病毒DNA进行共转染获得重组杆状病毒；(3)用重组杆状...
- 张志芳李轶女易咏竹刘兴健郑学星边大勇王国增江峰钟鲁龙
- 文献传递
- 中东呼吸综合征研究进展被引量：7
- 2015年
- 中东呼吸综合征由中东呼吸综合征冠状病毒感染所致,可导致感染者并发急性呼吸窘迫综合征,严重者可发展为肾衰竭而死亡。该病自2012年WHO首次报告以来,在沙特阿拉伯等20多个国家时有发生,对全球公共卫生构成重大威胁。本文对中东呼吸综合征研究进展进行综述,以期对该病的发生和流行及早预防和控制。
- 王翀郑学星迟航盖微微张渭蛟杨松涛高玉伟夏咸柱
- 关键词：冠状病毒属综合征抗病毒药
- 我国2株野生动物源细小病毒VP2和NS1基因序列及所编码蛋白的分析被引量：3
- 2013年
- 为了解我国野生动物源细小病毒VP2、NS1基因序列和进化特点,用PCR方法获得貉源细小病毒CR86106和猴源细小病毒BJ-22的目的基因片段,对其核苷酸和氨基酸序列进行测定分析。结果显示CR86106和BJ-22细小病毒基因组长均为4 269nt,其中NS1基因全长2 007nt,共编码668个氨基酸;VP2基因全长1 755nt,共编码584个氨基酸。CR86106VP2蛋白除第300位氨基酸为脯氨酸(P)以外,其余关键氨基酸位点均与猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPLV)一致;BJ-22VP2蛋白除第323位为天冬酰胺(N)、第564位为丝氨酸(S)以外,其余关键氨基酸位点均与FPLV一致。CR86106NS1蛋白氨基酸序列与细小病毒参考毒株的相似性是98.4%～99.3%,VP2是97.6%～99.7%;BJ-22NS1蛋白氨基酸序列与细小病毒参考毒株的相似性是98.5%～99.4%,VP2是98.1%～99.3%。种系发生分析结果显示,CR86106VP2和NS1与FPLV亲缘关系较近;BJ-22NS1归到CPV分支,VP2归到FPLV分支且单独分在一支。结果表明,CR86106具有FPLV样细小病毒序列特征,BJ-22具有FPLV和CPV重组病毒特征,为猴源细小病毒的重组现象,研究结果同时也证实了基因重组在FPLV进化过程中起重要作用的推论。
- 梁萌梁萌王化磊冯昊胡桂秋金宏丽胡桂秋冯娜郭鹤张仁舟齐瑛琳冯娜郑学星张仁舟
- 关键词：细小病毒NS1基因VP2基因
