付晓达
- 作品数：12 被引量：7H指数：1
- 供职机构：天津医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：天津市卫生局科技基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CD40L在CD4^＋CIK诱导Fas抵抗乳腺癌细胞凋亡中的机制研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨CD40/CD40L交联在诱导Fas抵抗乳腺癌细胞凋亡中的免疫学机制。方法:体外大规模扩增自体CIKs细胞,利用磁珠分选系统纯化其中CD4+T细胞亚群(CD4+CIK)。用抗Fas激活性抗体CH11诱导乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞凋亡,比较有无CD4+CIK培养上清预处理对MDA-MB-231细胞凋亡率的影响。MDA-MB-231细胞与CD4+CIK在不同效靶比下共孵育6小时和24小时,分别用流式细胞仪检测凋亡率和膜Fas表达,定量RT-PCR法检测胞浆内Bax、Bcl-2、FADD和c-FLIP的mRNA含量。在共培养系统中加入抗FasL、抗CD40L和抗IFN-γ中和抗体,分别比较MDA-MB-231细胞凋亡率、膜Fas表达和四种凋亡相关基因的mRNA含量。结果:MDA-MB-231细胞对CH11诱导的凋亡有抵抗,但经过CD4+CIK培养上清预处理后,敏感性显著提高。MDA-MB-231细胞与CD4+CIK共孵育24小时后,细胞凋亡率明显升高,并与膜Fas表达量呈正相关(r=0.618,P<0.01)。在共培养体系中添加抗FasL和抗CD40L中和抗体可完全清除增加的细胞凋亡,而抗IFN-γ中和抗体只能部分清除,凋亡率分别从(33.70±2.77)%降至(7.57±1.15)%、(7.80±0.26)%和(14.21±1.70)%。但MDA-MB-231细胞膜Fas表达可以等效地被抗CD40L和抗IFN-γ中和抗体封闭,分别从(25.90±2.45)%降至(6.93±1.56)%和(8.73±4.70)%。定量RT-PCR结果显示MDA-MB-231细胞与CD4+CIK共孵育6小时时胞浆中c-FLIP表达下降与凋亡率显著相关(r=0.898,P<0.05),而抗CD40L中和抗体可诱导c-FLIP表达升高。结论:CD40/CD40L交联和IFN-γ刺激均参与了CD4+CIK诱导的MDA-MB-231细胞凋亡,但其Fas抵抗性的逆转主要是通过CD40/CD40L交联抑制c-FLIP的mRNA合成而实现的。
- 于津浦蒋华蔚曹水李慧安秀梅付晓达任秀宝
- 关键词：CIKFASCD40LC-FLIP
- VAV1蛋白与肿瘤T细胞免疫抑制的深入实验研究
- 任秀宝杨莉莉李亦工张维红安秀梅韩颖魏枫付晓达张澎
- 本项目通过对Vav1与肿瘤浸润T淋巴细胞活性的研究，提出肿瘤诱导的T细胞失能的分子机制；初步探讨肿瘤浸润T淋巴细胞中Vav1基因的表达情况及肿瘤局部微环境中IDO的表达的相关性，提出肿瘤诱导的T细胞失能的可能分子机制；分...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤诱导蛋白T淋巴细胞分子机制
- 抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体抑制K562细胞体外生长
- 2008年
- 目的:观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体基因后,对其体外生长的影响。方法:通过表达抗ABL蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体的模型:K562-ibE-eGFP细胞,观察该细胞与对照细胞在有血清培养条件下的细胞生长和无血清培养条件下细胞活力,并观察无血清培养24h细胞形态学变化。结果:与对照组相比,K562-ibE-eGFP细胞在有血清培养条件下生长受抑制,在无血清培养条件下细胞活力显著下降,并且无血清培养24h细胞出现早期凋亡形态变化。结论:通过转导抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体的方法能抑制慢性粒细胞白血病细胞体外生长,并促进其在无血清条件诱导下凋亡,这可能是细胞内酪氨酸激酶活性降低,BCR/ABL信号途径被阻断,逆转了BCR/ABL对细胞生长和凋亡的影响作用。
- 徐冬付晓达魏枫
- 关键词：胞内抗体BCR/ABL酪氨酸激酶
- 突变减毒志贺样毒素Ⅰ真核表达载体的构建及其抗卵巢癌的活性被引量：4
- 2006年
- 目的构建表达突变减毒的志贺样毒素Ⅰ(Shiga-liketoxin1,Stx1)的真核表达载体,并考察其抗人卵巢癌细胞SKOV3的活性。方法重叠PCR法构建毒性为原毒素毒性1/10和1/100的突变减毒Stx1编码序列,T-A克隆并测序后分别连入真核表达载体pcDNA3.1。转染SKOV3细胞,RT-PCR法检测Stx1mRNA在SKOV3细胞中的表达,观察突变减毒Stx1对SKOV3细胞周期的影响和致SKOV3细胞死亡的方式。使用SKOV3荷瘤裸鼠模型,不同毒性突变减毒Stx1真核表达载体经脂质体包裹后肿瘤局部注射给药,评价其体内抑瘤能力。结果突变减毒Stx1真核表达载体经酶切和测序鉴定与预期突变序列一致;RT-PCR证实转染后的SKOV3细胞中存在目的mRNA;体外实验观察到该载体转染可以使人卵巢癌SKOV3细胞的细胞周期阻滞于G2/M期,转染后SKOV3细胞死亡的主要途径是坏死;体内实验显示突变减毒Stx1真核表达载体可以抑制裸鼠体内SKOV3移植瘤的生长。结论通过重叠PCR方法获得2种突变减毒Stx1编码序列,成功构建了相应的真核表达载体,并证实该载体具有明显的抗卵巢癌活性。
- 魏枫任秀宝刘虹于津浦付晓达郝希山
- 关键词：突变减毒真核表达卵巢癌
- 突变减毒志贺样毒素Ⅰ真核表达载体的抗肿瘤血管活性被引量：1
- 2007年
- 目的:考察突变减毒志贺样毒素Ⅰ(Shiga-like toxin 1,Stx1)真核表达载体抗肿瘤血管的活性。方法:使用流式细胞仪检测突变减毒Stx1真核表达载体转染对CHO细胞的影响;分别建立稳定表达1/10毒性、1/100毒性的突变减毒Stx1的CHO细胞株,使用这2个细胞株和对照细胞株的培养上清分别处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),观察其对HUVEC的增殖、迁移能力和形成管样结构能力的影响;使用人卵巢癌SKOV3荷瘤裸鼠模型,不同毒性突变减毒Stx1真核表达载体经脂质体包裹后肿瘤局部注射给药,观察突变减毒Stx1对肿瘤新生血管的作用。结果:突变减毒Stx1真核表达载体转染的CHO细胞未出现明显的凋亡或坏死改变;获得稳定表达1/10毒性、1/100毒性的突变减毒Stx1的基因工程细胞株,这些细胞株的培养上清与正常CHO细胞培养上清相比,能够在体外实验中抑制HUVEC的生长(P<0.05),且该作用可以被Stx1B亚基抗体阻断;突变减毒Stx1能够抑制HUVEC的迁移能力和管样结构形成能力;体内实验显示1/10毒性、1/100毒性的突变减毒Stx1真核表达载体治疗组与空载体对照组或生理盐水对照组相比,肿瘤微血管密度明显下降(P<0.01)。结论:成功建立了分泌性表达突变减毒Stx1的CHO细胞株。证实突变减毒Stx1能够有效地抑制HUVEC的生长及正常功能的发挥。体内实验显示突变减毒Stx1真核表达载体可以抑制裸鼠体内SKOV3移植瘤的血管生成。
- 魏枫曹水任秀宝刘虹于津浦付晓达郝希山
- 关键词：真核表达抗血管生成卵巢肿瘤
- sCD80-Linker-sCD40L融合基因重组腺病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞的表达
- 2007年
- 目的:构建人sCD80-Linker-sCD40L融合基因重组腺病毒载体,观测其在真核细胞中的表达。方法:以RT-PCR法从人外周血单个核细胞总RNA扩增IL12B亚基信号肽、sCD80和sCD40L编码序列,以重叠PCR法获得带有IL12B亚基信号肽的sCD80-Linker-sCD40L融合基因。使用AdMax腺病毒包装系统构建携带融合基因的重组腺病毒载体。以重组病毒感染NIH3T3细胞,观察融合基因的表达。结果:经测序证实,正确构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的重组腺病毒载体。RT-PCR和Western blot证实融合基因在NIH3T3细胞中表达。结论:成功构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的重组腺病毒载体,并在真核细胞中表达,为后续研究奠定了基础。
- 徐冬魏枫于津浦付晓达任秀宝
- 关键词：CD80CD40L融合基因腺病毒载体
- 抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体促进K562细胞凋亡
- 目的:观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体基因后,对其体外凋亡特性的影响。方法:构建逆转录病毒载体MSCV—ib—IRES—eGFP,将胞内抗体基因转导K562细胞,观察胞内抗体的表达和细胞内c— ...
- 徐冬任秀宝李慧张维红赵燕仪付晓达
- 关键词：胞内抗体K562细胞酪氨酸激酶凋亡
- 文献传递
- 可溶性sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白诱导非特异性抗肿瘤免疫被引量：1
- 2007年
- 目的:观察可溶性sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白对体外非特异性抗肿瘤免疫的影响。方法:以含sCD80-Lin- ker-sCD40L、sCD80、sCD40L编码基因的重组腺病毒载体或对照病毒载体转染人卵巢癌细胞SKOV3,ELISA检测上清中可溶性sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白及sCD80、sCD40L蛋白的表达。由卵巢癌患者外周血单个核细胞培养树突状细胞(dendritic cells,DCs),将DCs和自体T细胞共同培养并加入不同上清诱导48h;用异基因混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)检测诱导的DCs刺激淋巴细胞增殖能力;以诱导的T细胞为效应细胞,SKOV3细胞或K562细胞为非特异性靶细胞,通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogemse,LDH)释放实验检测杀伤活性。结果:ELISA检测证实病毒转染SKOV3细胞上清中sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白、sCD80蛋白和sCD40L蛋白表达量分别为2.791 ng/ml、1.956 ng/ml和1.407 ng/ml。MLR证实,与对照相比,融合蛋白上清诱导的DCs[刺激-反应细胞比例1:100,(0.382±0.053)vs(0.167±0.028),P<0.01;刺激-反应细胞比例1:50,(0.636±0.164)vs(0.311±0.067),P<0.01;刺激-反应细胞比例1:10,(1.245±0.271)vs(0.423±0.156),P<0.01]和sCD40L上清诱导的DCs[刺激-反应细胞比例1:100,(0.341±0.062)vs(0.167±0.028),P<0.01;刺激-反应细胞比例1:50,(0.567±0.106)vs(0.311±0.067),P<0.01;刺激-反应细胞比例1:10,(1.098±0.263)vs(0.423±0.156),P<0.01]刺激同种异基因混合淋巴细胞增殖能力明显增强。LDH释放实验提示,sCD40L上清诱导的T淋巴细胞对靶细胞非特异性杀伤活性显著强于对照SKOV3组[(42.28±6.27)vs(22.49±3.56),P<0.01]和K562组(47.94±6.72)vs (26.33±2.89),P<0.01],而融合蛋白上清诱导的T淋巴细胞对靶细胞非特异性杀伤活性显著强于sCD40L上清诱导的T淋巴细胞[sKOV3组为(58.97±8.92)vs(42.28±6.27),P<0.05;K562组为(66.55±9.43)vs(47.94±6.72),P<0.05]。结论:可溶性sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白能有效诱导体外非特异性抗肿瘤免疫,对肿瘤免疫治疗具�
- 徐冬魏枫付晓达于津浦任秀宝
- 关键词：CD80CD40L抗肿瘤免疫
- 突变减毒志贺样毒素Ⅰ真核表达载体抗卵巢癌活性的实验研究
- 目的:构建表达突变减毒的志贺样毒素I（Shiga like toxin 1,SLT—I）的真核表达载体,并考察其抗卵巢癌活性。方法:PCR扩增毒性为原毒素毒性1／10和1／100的突变减毒SLT—I编码序列,T—A克隆并...
- 魏枫任秀宝刘虹蒋华蔚付晓达
- 关键词：真核表达卵巢癌
- 文献传递
- 抗ABL胞内抗体对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响
- 2007年
- 目的:观察人慢性粒细胞白血病(CML)细胞转导抗ABL胞内抗体基因后,对其酪氨酸激酶活性的影响。方法:构建逆转录病毒载体MSCV-ib-IRES-eGFP,转导K562细胞,分选eGFP+的细胞,用RT-PCR检测胞内抗体mRNA的表达,观察细胞内BCR/ABL、c-ABL酪氨酸激酶活性及细胞总蛋白酪氨酸激酶活性的变化。结果:获得表达胞内抗体的K562细胞:K562-ib-eGFP。RT-PCR证实胞内抗体mRNA在K562-ib-eGFP细胞内表达。与对照组相比,K562-ib-eGFP细胞内BCR/ABL和c-ABL蛋白酪氨酸激酶活性及总蛋白酪氨酸激酶活性明显受抑制。结论:转导抗ABL胞内抗体能有效降低CML细胞内ABL酪氨酸激酶活性,为进一步研究打下基础。
- 徐冬付晓达魏枫
- 关键词：胞内抗体K562细胞BCR/ABL酪氨酸激酶
