孔繁华
- 作品数：70 被引量：114H指数：6
- 供职机构：解放军第307医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 特异性表达新霉素耐药基因Neo^R的人乳腺癌细胞模型的建立被引量：1
- 1999年
- 将含有ＮｅｏＲ基因的ｐＳＶ２－ｎｅｏ质粒经扩增、提取及纯化，以磷酸钙共沉淀法转染入ＭＤＡ人乳腺癌细胞系，经Ｇ４１８长期高压筛选出７株抗性ＭＤＡ细胞克隆，采用ＮｅｏＲ基因特异性引物进行聚合酶链反应，证实了ＮｅｏＲ基因在各株Ｇ４１８抗性ＭＤＡ细胞基因组中的整合。ＭＤＡ－ＮｅｏＲ细胞在传代６个月之后仍可耐受６００ｍｇ／Ｌ高浓度的Ｇ４１８，说明ＮｅｏＲ基因导入后的整合及表达是稳定的。表明已初步建立了携有特异标志基因ＮｅｏＲ的人乳腺癌细胞模型。
- 郭斯启奚永志宋三泰金荔陈兴国孔繁华
- 关键词：乳腺癌基因表达新霉素耐药基因
- GVHD病因学的新视野:HLA分子三维结构研究被引量：1
- 2000年
- 目的 :进一步探索GVHD的发病机理 ,提高临床移植疗效。方法 :采用国际通用的微量淋巴细胞毒试验和混合淋巴细胞培养方法 ;基因分型采用PCR SSP方法 ,对基因亚型进行DNA测序 ,再进行HLA三维结构模拟。结果 :① 4名骨髓移植患者中 ,例 1供 受体间HLA Ⅰ、Ⅱ类血清学分型相合 ,DQB1基因亚型不同 ,例 2、3、4均有 1个Ⅰ类抗原 (分别为HLA A、B和A)血清学分型不合和 1个基因亚型不同。HLA三维结构模拟例 1、3、4供 受者差别明显 ,骨髓移植后发生了Ⅲ～Ⅳ度GVHD ;例 2三维结构模拟差别不明显 ,仅发生Ⅰ度GVHD ;② 4个病例供 受体间HLA分子分别相差 14、17、2 0、12个氨基酸 ,相差数量与GVHD无相关性 ;3例重度GVHD供 受体的HLA分子三维结构均在抗原结合区的β转角处出现明显差异 ,而 1例轻度GVHD则无明显差异。 结论 :当异基因骨髓移植供 受体间HLA基因亚型不同时 ,移植后发生GVHD的程度与HLA分子三维结构差别大小有密切关系 ;三维结构的差别又与差异氨基酸所处的位置有关 ;GVHD与抗原氨基酸差别的数量多少没有直接关系。
- 孔繁华孙玉英奚永志任素萍金荔陈兴国刘楠屠敏郭斯启
- 关键词：人类白细胞抗原移植物抗宿主病骨髓移植
- 毒素蛋白PE40的基因克隆及序列分析被引量：5
- 1999年
- 细胞因子－受体介导的靶向杀伤作为导向治疗白血病与肿瘤的第二代新策略，是现代分子导向药物研究的最新领域之一。它是利用细胞因子与其受体的特异性结合来导向传递重组细胞因子－细菌外毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达相应细胞因子受体的白血病及肿瘤细胞〔１～３〕...
- 郑黎燕奚永志孔繁华金荔陈兴国屠敏
- 关键词：白血病基因治疗基因克隆
- 同种胎肝移植治疗急性白血病及随访被引量：1
- 1989年
- 近十年来国外骨髓移植(BMT)治疗白血病迅速发展,并取得较满意的效果。但骨髓移植受HLA配型相合的限制,选择供体困难,不易广泛应用。近年来在动物实验的基础上,国内外少数单位已开展胎肝造血干细胞移植治疗白血病的尝试,并取得了初步的疗效。我院自1983年5月～1988年2月用胎肝移植治疗白血病9例,现报告如下。
- 刘海川姚善谦彭矞云汪月增吕善根楼方定谭汉君张祥麟冉从蓉曾狄闻王连元刘景汉王月峰刘作斌张尊一李次芬崔宝印钱凤伟程锡元孔繁华
- 关键词：胎肝移植急性白血病骨髓移植全身照射血型抗原
- 新霉素耐药基因(Neo^R)的整合与表达并不改变人乳癌细胞(MDA)的原有生物学特性
- 1999年
- 目的：通过对比ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ 与ＭＤＡ 人乳癌细胞的生物学特征，阐明原核标志基因ＮｅｏＲ 的长期稳定整合与表达是否对乳癌细胞原有的生物学特性产生影响。方法：对已建立且证实表达ＮｅｏＲ 基因＞ ６ 个月的７ 株ＭＤＡ－ＮｅｏＲ 细胞系进行Ｇ４１８ 抗性、表面抗原、细胞倍增时间、细胞周期、肿瘤细胞集落形成及裸鼠体内成瘤能力的检测。结果：ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ 细胞对高浓度的Ｇ４１８ 仍产生抗性并表达Ｎｅｏ Ｒ 基因；其细胞倍增时间、Ｓ 期分数、肿瘤细胞体外集落形成率与ＭＤＡ 无明显区别（ Ｐ＞ ０－０５） ；角蛋白ＣＫ１９ 与表面膜抗原ＥＭＡ 的表达在两组是等同的；并且ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ ７ 细胞系在裸鼠体内的成瘤能力与ＭＤＡ 细胞也是相似的。结论：外源标志基因ＮｅｏＲ 的长期稳定整合与表达对ＭＤＡ
- 郭斯启奚永志宋三泰金荔陈兴国孔繁华
- 关键词：新霉素耐药基因
- 人正常骨髓CD34^+造血细胞体外扩增形成粒单系造血祖细胞的能力被引量：2
- 1997年
- CD34+造血细胞以其独特的生物学功能正成为造血调控、造血于细胞移植和基因治疗最理想的靶细胞。本文探讨人正常骨髓CD34+造血细胞在体外扩增形成单个核细胞（MNC）及粒单系集落形成单位（CFU－GM）的能力，采用CIMS－100新型免疫磁性无菌分离术可获得纯度＞90％的CD34+造血细胞，其直接形成CFLJ－GM的能力要较骨髓MNC提高的倍，并且在含EGIIS组合造血生长因子的无基质液培养系统中，CD34+造血细胞在四周内可持续扩增产生大量MNC及CFU－GM，最高分别可达1770倍和48倍，但不同个体问CD34+造血细胞的这种能力差别较大。上述结果提示，CD34+造血细胞在最佳组合HGFs的无基质液培养条件下，能扩增产生大量成熟及晚期造血祖细胞，可以适用于临床治疗的需求，
- 奚永志孔繁华金荔陈兴国张双喜唐佩弦魏文
- 关键词：造血干细胞骨髓体外扩增靶细胞
- CD34^+造血细胞免疫磁性高效富集仪CMSI-100的研制及应用被引量：2
- 2002年
- 根据免疫磁性分离原理 ,选用能产生高磁场强的磁性材料钕铁硼 ,其核心是将其设计成由低碳钢间隔的 4块钕铁硼 ,并且使每块钕铁硼的规格必须限制在 3.5cm× 2 .0cm× 0 .3cm ,以确保每块钕铁硼平面所具有的磁场强度平均可达 2 70 0高斯。当所切磨的钕铁硼规格达不到该标准时 ,由此产生的磁场强度 >2 70 0高斯或 <2 70 0高斯 ,对CD34+造血细胞的分离效果均不理想。经对人正常骨髓CD34+ 造血细胞的免疫磁性分离证实 ,采用CMSI 10 0富集后的CD34+ 造血细胞纯度平均 >90 % ,细胞活力 >95 % ,达到国际上最好水平 ,其性能完全可与国际通用先进的IsolexTM5
- 奚永志张双喜孙玉英郭斯启刘楠屠敏孔繁华
- 关键词：免疫磁性分离钕铁硼磁场强度CD34^+造血细胞
- 人正常骨髓CD34^+造血细胞体外扩增形成红系及混合系造血祖细胞的能力被引量：2
- 1997年
- 根据阳性选择策略，采用ＣＩＭＳ－１００免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞，然后将其在含Ｅｐｏ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＳＣＦ（简ＥＧＩＳ）组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增４周，定期进行单个核细胞计数、ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｍｉｘ的培养。经ＦＡＣＳ鉴定所富集的ＣＤ３４＋造血细胞纯度平均＞９０％。人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞在该条件下均可持续产生大量单个核细胞，最高可扩增１７７０倍。与ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ相反，ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ扩增量较低，最高仅为２．３６和２．４倍，且仅在第１周出现，随后迅速减少至停止。
- 奚永志孔繁华张双喜金荔陈兴国唐佩弦魏文
- 关键词：造血细胞体外扩增造血祖细胞
- 强直性脊椎炎遗传方式分析被引量：8
- 1993年
- 报道5117例因腰腿痛就诊确诊为强直性脊椎炎(AS)患者514例(占10.05%),其中HLA-B27抗原阳性453例(占AS患者88.13%),男:女为5.4:1。调查了其中53例HLA-B27抗原阳性AS患者的一级亲属122人,发现HLA-B27抗原阳性69人,AS患者54人。通过AS家系的典型系谱调查,用Smith法分离分析和Pearson法比值的吻合性分析,结果表明,As为与HLA-B27抗原阳性密切相关、受环境因素影响的、具有遗传倾向性的疾病。
- 郑玉光孔繁华曾昭玉陈兴国刘志亮范丽娜
- 关键词：脊椎炎白细胞抗原遗传病
- IL-6D_(24)- Linker-PE40重组毒素的分子生物学特性预测被引量：1
- 1999年
- 目的：探讨重组毒素ＩＬ６Ｄ２４ＬｉｎｋｅｒＰＥ４０融合蛋白及其接头设计的合理性。方法：应用核酸和蛋白质序列分析软件系统ＧＯＬＤＫＥＹ软件，对ＩＬ６Ｄ２４ＬｉｎｋｅｒＰＥ４０重组毒素融合蛋白的柔性、抗原性、亲水性、表位等分子生物学特性进行计算机模拟预测，并做Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析进行验证。结果：ＩＬ６Ｄ２４ＬｉｎｋｅｒＰＥ４０分别保留了ＩＬ６Ｄ２４和ＰＥ４０的表位特征，没有新的抗原表位出现，而且柔性接头处具有极低的抗原性。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明融合蛋白能分别与ＩＬ６和ＰＥＡ的单克隆抗体发生特异结合，这说明融合蛋白保留了ＩＬ６和ＰＥ４０的空间结构特征。
- 郑黎燕奚永志孔繁华陈兴国金荔屠敏刘楠
- 关键词：LINKER重组毒素
