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二元信号转导系统2148hk/rr与猪链球菌2型致病性关系研究: 构建猪链球菌2型(Streptococcus suis type2)强毒株05ZYH33二元信号转导系统2148hk/rr基因敲除突变体.构建中间为壮观霉素抗性基因，两侧为2148hk/rr编码基因上、下游同源序列的基因...; 程功; 关键词：猪链球菌2型致病过程; 文献传递

猪链球菌2型反应调控因子ReυS突变株的构建被引量：2: 2008年; 目的构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33反应调控因子ReυS基因敲除突变体，研究基因敲除后对细菌基本生物学性状及对小鼠和猪的致病性的影响。方法构建中间为壮观霉素抗性基因，两侧为ReυS编码基因上、下游同源序列的基因敲除载体，通过同源重组和PCR法鉴定，获得ReυS编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代的突变株。体外观察基因敲除后细菌的稳定性、生长曲线、菌落形态、溶血性、染色情况、镜下形态及蛋白表达等基本生物学性状有无发生明显改变。以10^8CFU野毒株和缺失株分别感染BALB／c小鼠和20日龄仔猪，观察致病性有无明显区别。结果PCR分析显示ReυS编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代，基因敲除后细菌的基本生物学性状无明显改变。动物感染实验显示，RevS缺失株对小鼠的致病性显著减弱，但对其主要宿主猪的致病性未见显著改变。结论成功构建了猪链球菌2型强毒株05ZYH33反应调控因子ReυS基因敲除突变株，基因敲除后未明显影响细菌的基本生物学性状，但对小鼠和猪的致病性有所减弱。; 鞠爱萍王长军李明程功郑峰潘秀珍陆承平唐家琪; 关键词：猪链球菌2型基因敲除

猪链球菌2型唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株的构建及其生物学特性被引量：8: 2009年; 利用同源重组基因敲除方法构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株。PCR和Southern杂交结果均显示neuB基因在1株转化重组体中完全被壮观霉素抗性基因替代,表明neuB基因敲除突变体构建成功。生物学特性鉴定显示,突变体与强毒株在菌落形态、溶血活性以及染色特性方面均无明显差异;电镜检查发现突变体表面结构组分与强毒株有显著差异,荚膜明显变薄,质地更加紧密;小鼠致病性试验结果显示,突变体毒力显著减弱。研究结果提示菌体荚膜中的唾液酸对于猪链球菌2型侵袭和致病具有重要作用。; 董瑞萍王长军程功李明王晶潘秀珍唐家琪; 关键词：猪链球菌2型基因敲除生物学特性

猪链球菌2型二元信号转导系统ciaR基因敲除突变株的构建及生物学功能研究被引量：4: 2009年; 目的构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33二元信号转导系统1094HK/1095RR的反应调节因子ciaR基因敲除突变株(ΔciaR),并研究ΔciaR的生物学功能。方法和结果基于同源重组原理筛选ciaR基因缺失株,PCR分析及Southern杂交结果均显示突变株构建成功。通过检测OD600值绘制生长曲线,发现突变株在37℃和40℃其OD600值均明显低于野生株;与40mmol/L过氧化氢共作用15min后涂板计数,突变株存活率明显低于野生株;不同pH值的培养基中培养,发现在pH5.0的酸性环境中突变株OD600值明显低于野生株;野生株与突变株对BALB/c小鼠攻毒(约1×109CFU/只),各10只,两组16h后均死亡9只。结论成功获得05ZYH33ciaR基因敲除突变株;发现删除ciaR基因会导致细菌的生长繁殖能力减弱,抗氧化应激能力下降,在酸性环境生长存活能力下降;但对小鼠毒力无差别。; 冯晓丹程功王晶王长军潘秀珍唐家琪; 关键词：信号转导系统猪链球菌2型基因敲除突变株分离菌株鼠源性

猪链球菌2型中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷菌株的构建被引量：6: 2009年; 目的构建猪链球菌2型(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷株。方法利用同源重组基因敲除方法获得S.suis2强毒株05ZYH33荚膜合成基因cps2B敲除突变株,通过小鼠攻毒实验证实荚膜缺陷株对细菌毒力的影响。结果PCR和Southern杂交结果均显示cps2B基因完全被壮观霉素抗性基因替代,表明基因敲除突变体构建成功。电镜结果证实突变体荚膜合成能力缺失,小鼠致病性实验结果显示突变体毒力基本丧失。结论成功构建05ZYH33荚膜缺陷株,提示菌体荚膜多糖成分对于猪链球菌2型侵袭和致病具有显著作用。; 胡丹王长军胡福泉王晶程功李明潘秀珍唐家琪; 关键词：猪链球菌2型荚膜多糖基因敲除

Ⅱ型猪链球菌二元信号转导系统2148hk／rr基因敲除突变体的构建被引量：4: 2008年; 构建猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)强毒株05ZYH33二元信号转导系统2148hk/rr基因敲除突变体。构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为2148hk/rr编码基因上、下游同源序列的基因敲除质粒,通过同源重组筛选2148hk/rr编码基因敲除突变体。PCR分析和Southern杂交结果均显示2148hk/rr编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代,基因敲除突变体构建成功。筛选获得05ZYH33二元信号转导系统2148hk/rr基因敲除突变体,为阐明该调控系统在猪链球菌致病过程中的作用奠定了基础。; 程功李明郑峰王晶王长军潘秀珍范红结唐家琪; 关键词：猪链球菌2型基因敲除突变体

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程功