郭桂萍
- 作品数：6 被引量：22H指数：4
- 供职机构：烟台大学药学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒在大鼠鼻黏膜的转运研究被引量：6
- 2013年
- 研究单甲氧基聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(mPEG-PLGA-NPs)的粒径大小、mPEG相对分子质量及覆盖密度,zeta电位对其在大鼠鼻黏膜转运的影响。以mPEG-PLGA共聚物为载体材料,香豆素-6为荧光标记物,采用纳米沉淀法和乳化溶剂挥发法制备不同理化性质的mPEG-PLGA-NPs及壳聚糖包裹的PLGA-NPs,并测定其粒径大小、zeta电位、香豆素的荧光标记效率、体外泄漏率及在溶菌酶中的稳定性等。采用激光共聚焦显微镜技术研究纳米粒的理化性质对其在大鼠鼻黏膜转运的影响。纳米粒分散均匀,PLGA-NPs表面带负电荷,经mPEG修饰后zeta电位接近电中性,壳聚糖包裹后表面荷正电。香豆素的荧光标记效率均>80%。4 h内香豆素-6纳米粒的泄漏百分率<5%。纳米粒在溶菌酶中基本稳定。结果显示,zeta电位近中性的mPEG-PLGA-NPs在鼻黏膜的转运能力显著高于带正电荷的CS-PLGA-NPs及带负电荷的PLGA-NPs(P<0.05),并且随着mPEG相对分子质量和覆盖密度的增加及粒径的增大,其在鼻黏膜的转运能力增强。mPEG-PLGA-NPs在大鼠鼻黏膜的转运能力与其表面亲水性、zeta电位及粒径大小密切相关。
- 王俊腾林东海秦利芳闻真郭桂萍
- 关键词：鼻黏膜黏液纳米粒转运激光共聚焦显微镜
- 艰难梭菌毒素AC端结构域在大肠杆菌中的可溶性表达与卵黄抗体的制备被引量：7
- 2013年
- 目的重组表达艰难梭菌毒素A的C端结构域,制备针对艰难梭菌毒素A C端结构域的卵黄抗体。方法将优化合成的艰难梭菌毒素A的C端结构域DNA片段克隆到表达载体pET32b(+)上,重组质粒转入大肠杆菌中诱导表达,经高亲和镍离子树脂纯化得到融合蛋白,凝血酶酶切后用高亲和镍离子树脂吸附多余多肽获得目的蛋白。检测目的蛋白的生物学活性,用目的蛋白免疫产蛋鸡制备针对艰难梭菌毒素A受体结合区的鸡卵黄抗体,分离纯化鸡卵黄抗体并用ELISA测定卵黄抗体的效价。结果获得了优化的艰难梭菌毒素A受体结合区的基因片段,继而制备了具有生物学活性的毒素A C端结构域重组蛋白。免疫产蛋鸡后获得了效价1∶50 000的抗艰难梭菌毒素A的卵黄抗体。结论获得了具有生物学活性的艰难梭菌毒素A C端结构域重组蛋白,为建立艰难梭菌基因工程疫苗打下了基础,并制备了针对艰难梭菌毒素蛋白A的卵黄抗体,可用于艰难梭菌相关性腹泻的诊断和治疗。
- 郭桂萍董创创戴洁李敏于锦丽马慧文林东海冯东晓
- 关键词：重组蛋白
- 细胞膜红色荧光探针PLGA纳米粒的制备及表征被引量：1
- 2013年
- 目的以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)和单甲氧基聚乙二醇聚乳酸-羟基乙酸共聚物(MePEG-PLGA)为材料,制备包载细胞膜红色荧光探针(DiI)的纳米粒,为后续的细胞实验奠定基础。方法采用自乳化溶剂扩散法制备纳米粒;超滤法分离纯化纳米粒,紫外可见分光光度法测定DiI的含量,并计算包封率。结果 DiI用量为0.5 mg,PLGA或MePEG-PLGA投入量为50 mg,PVA浓度为0.5%,可制得粒径较合适的纳米粒。DiI-PLGA-NP平均粒径为(280.7±3.6)nm,Zeta电位为(2.98±0.47)mV,包封率可达88.0%;DiI-MePEG-PLGA-NP平均粒径为(157.2±3.2)nm,Zeta电位为(-4.90±0.54)mV,包封率可达87.1%。结论 DiI作为脂溶性良好的示踪剂,用其制得的荧光素纳米粒可为后续的体外实验奠定良好的基础。
- 闻真郭桂萍谢鑫鑫王俊腾秦利芳林东海
- 关键词：紫外可见分光光度法
- 聚乙二醇化聚乳酸羟基乙酸纳米粒的制备及体外抗黏性能评价被引量：6
- 2012年
- 目的:制备单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸纳米粒(mPEG-PLGA-NP)并研究其理化性质及体外抗黏性能。方法:以不同mPEG分子量和含量的mPEG-PLGA为载体,采用自乳化溶剂扩散法制备纳米粒,并对其制备处方工艺进行单因素考察。以呋喃二烯为模型药考察纳米粒的载药性能,采用体外黏蛋白结合法评价纳米粒的抗黏性能。结果:确定自乳化溶剂扩散法制备mPEG-PLGA-NP的最佳处方,丙酮为有机溶剂,0.2%的聚山梨酯80为乳化剂,mPEG-PLGA的用量为25mg,有机相和水相的体积比为1∶15。纳米粒呈球形,外观规整,分布均匀。mPEG-PLGA-NP随着修饰的mPEG含量的增加粒径逐渐减小,Zeta电位的绝对值逐渐减小。载呋喃二烯的mPEG-PLGA-NP包封率为50%,载药量在10%左右。体外黏蛋白结合实验显示,经mPEG修饰的纳米粒抗黏性比未修饰的高6倍,并且随着修饰的mPEG相对分子质量和含量的增加,mPEG-PLGA-NP的抗黏性能逐渐增强。结论:本实验成功制备并表征了mPEG-PLGA-NP,并且mPEG-PLGA-NP具有良好的载药和抗黏性能。
- 谢鑫鑫王俊腾秦利芳闻真郭桂萍林东海
- 关键词：纳米粒呋喃二烯黏蛋白
- 聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒在Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运研究被引量：5
- 2013年
- 建立Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型,研究不同表面化学性质的PLGA纳米粒在覆盖黏液层的Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运能力。以聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,通过单甲氧基聚乙二醇(mPEG)及壳聚糖(chitosan)对其进行表面修饰,采用纳米沉淀法制备PLGA-NPs、mPEG-PLGA-NPs和壳聚糖包裹的PLGA-NPs,并测定其平均粒径及zeta电位。以香豆素-6(coumarin 6)为荧光标记物,通过激光共聚焦显微镜观察纳米粒的转运情况;以呋喃二烯(FDE)为模型药物,HPLC测定纳米粒的转运量。通过加入内吞阻断剂秋水仙素及诺可唑研究纳米粒的转运机制。采用免疫荧光法考察不同表面化学性质的纳米粒对细胞紧密连接蛋白ZO-1的影响。结果表明,纳米粒分散均匀,PLGA-NPs表面荷负电,经mPEG修饰后zeta电位近电中性,壳聚糖包裹后表面荷正电。呋喃二烯的包封率均>75%。mPEG-PLGA-NPs在Caco-2/HT29-MTX共培养细胞的转运能力高于PLGA-NPs和CS-PLGA-NPs,在秋水仙素及诺可唑作用下转运量明显降低,并影响ZO-1蛋白的分布。说明PLGA-NPs和mPEG-PLGA-NPs可能通过胞吞作用和细胞旁路途径进行转运,CS-PLGA-NPs主要以胞吞作用进行转运;mPEG-PLGA-NPs因其表面的亲水性及电荷近中性,具有较好的抗黏性能,能够快速穿过黏液层到达细胞并转运。
- 闻真李刚林东海王俊腾秦利芳郭桂萍
- 关键词：呋喃二烯CACO-2
- 人胃癌细胞HGC-27对PEG化聚乳酸羟基乙酸纳米粒的摄取
- 2013年
- 制备黏惰性纳米粒（mPEG-PLGA-NPs）以克服人胃癌HGC-27细胞周围黏液的黏附，研究mPEG-PLGA-NPs理化性质对纳米粒穿透黏液被HGC-27细胞摄取的影响。体外黏蛋白黏附实验证明，mPEG-PLGA-NPs具有良好的黏惰性；激光共聚焦显微镜及HPLC法考察HGC-27细胞对不同理化性质mPEG-PLGA-NPs的摄取。结果显示：HGC-27细胞对纳米粒的摄取与孵育时间（0-4 h）成依赖关系。同一孵育时间内，HGC-27细胞对纳米粒的摄取随着mPEG相对分子质量和修饰密度的增加而增加，10%PEG2000-PLGA-NPs的摄取量是PLGA-NPs的1.7-2.0倍，是荷正电荷CS-PLGA-NPs的摄取量的1.8-2.4倍，粒径400 nm 的纳米粒的摄取量仅为粒径120 nm的55.9%-70.3%。结果表明，亲水性且表面电荷接近中性、大小适宜的mPEG-PLGA-NPs对黏蛋白具有一定的黏惰性，能够快速穿透HGC-27细胞周围黏液被细胞摄取。mPEG-PLGA-NPs有望成为一种新型的载药系统用于胃黏液癌的治疗。
- 秦利芳林东海李刚王俊腾闻真郭桂萍
- 关键词：细胞摄取
