付溪
- 作品数：10 被引量：31H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金卫生部临床学科重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 维甲酸诱导P19胚胎癌细胞向神经元分化过程中分化相关因子的表达
- 2013年
- 目的:探索维甲酸(RA)体外诱导P19胚胎癌细胞向神经元样细胞分化过程中分化相关因子的表达。方法:小鼠P19胚胎癌细胞随机分为对照组和实验组,实验组予RA添加培养,对照组予同体积的无RA溶解液无水乙醇代替,诱导4 d后,分化7 d。通过免疫荧光法鉴定细胞分化,实时定量PCR和Western blot检测分化相关指标SOX2、NESTIN、TUJ1、Neurod2的表达。结果:分化7 d后,在实验组观察到丰富的TUJ1的表达;对照组极少观察到TUJ1表达。实验组的SOX2呈波动高表达,对照组持续递减表达;NESTIN呈现迅猛上升,在诱导第4天时明显高于对照组,分化期间两组无显著性差异;Neurod2在诱导第2天有小量表达,迅速升高至分化第1天出现峰值。对照组中Neurod2和TUJ1显著性低表达,在实验组中均高表达。结论:RA体外诱导P19胚胎癌细胞向神经元样细胞分化可作为研究人类神经系统发育的体外模型;Neurod2可能促进神经前体细胞向神经元的分化和维持神经功能活性。
- 张文迪付溪高金枝谢雪梅罗小平
- 关键词：维甲酸神经元诱导分化
- 儿童药物性肝病临床特征及基因突变分析被引量：2
- 2015年
- 目的探讨儿童药物性肝病（DILD）的临床特点、肝组织病理改变及基因突变。方法回顾性分析4例DILD患儿的临床资料,并复习国内外相关文献。结果 4例患儿起病前均有相关用药病史,病程5~90 d,首诊症状多样,以黄疸、尿黄、肝功能异常、肝脏肿大就诊。2例患儿行肝穿刺活检术,肝组织病理主要表现为广泛水变性,出现灶状坏死,汇管区可见炎性细胞浸润;超微病理可见大量糖原累积、胆色素颗粒沉积及淋巴细胞浸润。2例患儿及其父母行药物性肝病相关基因检测,ABCB11基因测序显示1例患儿存在杂合突变,分别在第13号外显子13311 T〉C（V444A）及第21号外显子2594 C〉T（A865V）;另1例患儿基因检测无异常。检索国内外文献,国内药物性肝病临床分型以肝细胞为主,最常见药物为抗生素,而国外为解热镇痛药;目前已发现的ABCB11基因突变超过100多种,V444A为最常见突变位点。结论儿童药物性肝病首发症状多样,起病前有药物史、肝组织病理学检查及ABCB11基因的检测有助于诊断。
- 邓诗桦付溪刘艳黄志华
- 关键词：药物性肝病肝脏病理基因突变儿童
- 慢病毒介导的shRNA对大鼠脑纹状体GCDH蛋白的沉默效应研究
- 2014年
- 目的：利用已成功构建的慢病毒载体，检测慢病毒介导的GCDH基因沉默对大鼠脑纹状体GCDH蛋白表达下调的能力。方法：30只健康雄性刚断乳34周SD大鼠随机分为绿色荧光蛋白（GFP）对照病毒注射组（对照组）和GCDH慢病毒注射组（GCDH组）各15只。各组分别在脑立体定位仪下定位纹状体组织后单侧给予GFP对照病毒2耻L和GCDH慢病毒原液2灿。注射后14d及1、3月，分别处死大鼠，并取注射区域的脑纹状体组织蛋白质通过Westemblot及石蜡切片免疫组化法检测大鼠纹状体GCDH蛋白表达水平，同时测定肝。肾功能、血清有机酸及Rotarod行为学。结果：GCDH慢病毒注射14d及l、3月后，GCDH组可检测到注射区域GCDH蛋白在脑纹状体区域表达有明显降低，同对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），2组肝肾功能、血清有机酸及行为学未发现明显差异。结论：成功注射GCDH慢病毒到刚断乳34周SD大鼠脑纹状体，并在注射后不同时间均检测到GCDH蛋白的表达稳定下调。
- 付溪高洪杰娄丽萍高金枝张文迪罗小平
- 关键词：慢病毒载体纹状体
- 活化蛋白C在脂多糖诱导小胶质细胞活化中的作用被引量：1
- 2016年
- 目的探讨活化蛋白C在脂多糖诱导的小胶质细胞活化中的作用。方法取新生1日龄Sprague—Dawley大鼠，分离脑组织，原代培养小胶质细胞并进行分离纯化及鉴定。纯化小胶质细胞随机分成4组，分别为脂多糖组（1．0μg／ml脂多糖，12h后给予10μl磷酸盐缓冲液）、脂多糖＋活化蛋白C组（1．0μg／ml脂多糖，12h后给予0．1μg/ml活化蛋白C）、活化蛋白C组（10p1磷酸盐缓冲液，12h后给予0．1μg／ml活化蛋白C）和对照组（相应时间点各10μl磷酸盐缓冲液）。观察各组小胶质细胞形态变化，并通过免疫荧光标记技术检测肿瘤坏死因子-α及蛋白酶活化受体-1的表达情况。采用方差分析及LSD检验进行统计分析。结果成功培养小胶质细胞，且纯度≥99％。脂多糖组小胶质细胞形态出现活化，肿瘤坏死因子-α表达较对照组明显增强（2．11±0．35与1．38±0．28，LSD检验，P=0．002）；脂多糖＋活化蛋白C组脂多糖诱发的小胶质细胞形态学改变被逆转，肿瘤坏死因子-α的表达与对照组差异无统计学意义（1．35±0．36与1．38±0．28，LSD检验，P〉0．05）。脂多糖＋活化蛋白C组蛋白酶活化受体-1的表达明显高于对照组（4．60±0．84与2．64±0．41，LSD检验，P=0．008）和脂多糖组（2．44±0．86，LSD检验，P=0．002）；但活化蛋白C组和脂多糖组蛋白酶活化受体-1的表达与对照组差异均无统计学意义（2．62±0．69、2．44±0．86与2．64±O．41，LSD检验，P值均〉0．05）。结论活化蛋白C可通过上调小胶质细胞蛋白酶活化受体-1的表达，抑制脂多糖诱导的小胶质细胞活化及肿瘤坏死因子-α的表达，从而保护炎症诱发的脑组织损伤。
- 邓诗桦金圣娟付溪刘艳宁琴罗小平
- 关键词：小神经胶质细胞蛋白质C脂多糖类
- 伴硬皮病样改变的典型Hutchinson-Gilford早老综合征一例并文献复习被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨典型Hutchinson-Gilford早老综合征（HGPS）的临床特点及诊断.方法 回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科诊断的1例典型HGPS患儿,并复习相关文献,分析本病的临床表现、影像学特点、基因突变特点及诊疗方法.结果 患儿男,8月龄,身高65.6 cm,体重6.2 kg,前额突出,枕部秃发,头皮静脉显露,小颌畸形伴下颌纵向沟,胸部以下皮肤呈硬皮病样改变,双膝关节挛缩呈“骑马样站姿”,踝关节活动亦受限.血常规示血小板（416～490）×109/L;双下肢MRI发现皮下脂肪组织减少.家系外周血LMNA基因分析示患儿携带经典杂合突变：c.1824C＞T,（p.G608G）,其父母均正常.13月龄随访时X线检查示双手指骨及锁骨远端有骨质溶解改变.随访15个月后,患儿早老样外貌更明显.总结相关文献发现国内结合临床特征和基因分析明确诊断的典型HGPS有2例,其中1例有硬皮病样皮肤改变.结论 患儿呈典型HGPS表型;婴儿期皮肤出现硬皮病样改变,应考虑典型HGPS的可能,且LMNA基因分析有助于典型HGPS的早期确诊,避免其他不必要的检查.应对患儿长期进行随访,观察病情持续进展.
- 黄姗梁雁吴薇付溪廖立红罗小平
- 关键词：基因测定
- 多种氨基酸及葡萄糖对高浓度赖氨酸干预GCDH沉默纹状体神经元的神经毒性作用及机制研究
- 第一部分不同浓度的亮氨酸、酪氨酸、精氨酸、高精氨酸及葡萄糖分别与赖氨酸共孵育致原代大鼠纹状体神经元神经毒性的体外研究 目的分离培养高纯度的原代大鼠纹状体神经元,探讨不同浓度的亮氨酸、酪氨酸、精氨酸、高精氨酸及葡萄糖分别与...
- 付溪
- 关键词：纹状体神经元慢病毒载体NADH葡萄糖慢病毒载体纹状体
- 原代大鼠肝细胞分离及培养鉴定被引量：15
- 2012年
- 目的探讨原代大鼠肝细胞分离及培养的简易方法,并对其纯度及生物活性进行鉴定。方法采用改良原位两步非循环灌流法及多次过滤低速离心法分离原代大鼠肝细胞,常规DMEM高糖培养基培养原代大鼠肝细胞,锥虫蓝拒染法检测接种时肝细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝细胞形态变化。过碘酸-Schiff反应检测肝细胞糖原合成能力,并利用免疫细胞化学方法检测肝细胞角蛋白18(CK-18)的表达联合判断肝细胞纯度。结果每只大鼠可获取(1.38～1.74)×108个肝细胞,接种瞬时肝细胞活性>90%。倒置显微镜下观察肝细胞在接种后4 h基本完成贴壁,贴壁的细胞胞体变大变平,随后细胞相互靠拢呈岛状或条索状连接。糖原染色发现肝细胞内糖原被染成红色颗粒或片状。抗CK-18免疫细胞化学染色发现CK-18在肝细胞内均匀分布,被染成棕黄色。糖原染色及细胞CK-18联合鉴定肝细胞纯度达95%以上。结论用改良原位两步非循环灌注法及多次过滤低速离心法成功分离并培养原代大鼠肝细胞,可操作性强,所培养肝细胞数量、活力和纯度高,可在具备基本细胞培养条件的实验室推广。
- 叶娟王群付溪郑锐丹应艳琴罗小平
- 关键词：肝细胞原代细胞培养灌注法
- 特发性低促性腺激素性腺功能低下患者NR5A1基因突变分析被引量：1
- 2015年
- 目的 研究特发性低促性腺激素性腺功能低下（idiopathic hypogonadotropic hypogonadism,IHH）患者NR5A1基因新的突变位点.方法 收集病例组IHH患者61例,该组患者核型正常,头颅MRI扫描正常,同时排除其他内分泌疾病,正常对照组100名.提取两组实验对象外周血白细胞DNA,分别设计NR5A1基因2～7号外显子引物,聚合酶链式反应扩增其编码序列和剪接位点,采用双脱氧末段终止法测序.将测序结果与正常人基因组进行比对,同时对患者进行家系调查,收集临床资料,并对阳性患者基因型和临床表型进行分析.结果 61例IHH患者中6例患者出现了NR5A1基因的碱基改变.通过对100个种族及年龄匹配的对照组进行分析,没有发现NR5A1基因突变位点.结论 病例组NR5A1基因检测出1种有意义的碱基改变,该突变可能与核型正常同时肾上腺功能正常的IHH男性患者发病有关.
- 胡思翠应艳琴叶娟付溪黄姗宁琴罗小平
- 关键词：基因突变
- 进行性肌营养不良的糖皮质激素治疗现状及进展被引量：3
- 2015年
- 进行性肌营养不良发病常见于男性,主要包括Duchenne型肌营养不良（Duchenne muscular dystrophy,DMD）以及Becker型肌营养不良（Becker muscular dystrophy,BMD）.DMD是由抗肌萎缩蛋白（dystrophin）基因突变或缺失引起,占进行性肌营养不良的绝大部分,属于最常见的儿童神经肌肉性疾病.
- 高洪杰付溪罗小平
- 关键词：进行性肌营养不良DUCHENNE型肌营养不良BECKER型肌营养不良糖皮质抗肌萎缩蛋白
- 异戊酸血症2例患儿的临床研究并文献复习被引量：6
- 2014年
- 目的 探讨异戊酸血症（IVA）患儿的临床特点和诊治经验,以及异戊酰辅酶A脱氢酶（IVD）基因突变情况,以提高认识,更好地预防和治疗该病.方法 分析2例IVA同胞患儿的临床病史及实验室检查,并对患儿及双亲IVD基因12个外显子及内含子进行扩增,聚合酶链反应（PCR）产物直接测序,分析基因突变结果并进行相关文献复习.结果 2例同胞患儿均诊断为IVA,哥哥新生儿期急性起病,伴高氨血症,低钙血症,全血细胞减少;弟弟无明显临床症状但血氨升高,2例患儿尿有机酸分析均显示尿中检出大量异戊酰甘氨酸.哥哥因脓毒症及出血于新生儿期夭折;弟弟治疗及时并随访2年病情控制佳.IVD基因测序显示,在第10号外显子上,2例患儿及母亲存在杂合突变：c.1016G＞ A（C339Y）,该突变以往未见报道,父亲以及50例健康对照组未见突变.国内详细报道的总共15例IVA患儿中有11例新生儿期发病,12例呈现典型IVA表现,12例表现出特殊体味,9例全血细胞减少,5例高氨血症,6例低钙血症,6例报道死亡,5例通过饮食控制病情有不同程度的好转,存活患儿仅2例随访超过2年.结论 新报道2例IVA患儿,同时发现1个新的IVD基因突变,即C339Y突变,该突变可能引起IVD蛋白结构和功能的改变.同时,直接基因测序不能识别出所有的IVA患者,基因诊断的漏诊需要引起临床医师的注意.IVA近年来报道有增多的趋势.
- 付溪高洪杰吴婷婷张文迪廖丽红罗小平
- 关键词：突变气相色谱-质谱联用
