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原代大鼠肝细胞分离及培养鉴定被引量：15: 2012年; 目的探讨原代大鼠肝细胞分离及培养的简易方法,并对其纯度及生物活性进行鉴定。方法采用改良原位两步非循环灌流法及多次过滤低速离心法分离原代大鼠肝细胞,常规DMEM高糖培养基培养原代大鼠肝细胞,锥虫蓝拒染法检测接种时肝细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝细胞形态变化。过碘酸-Schiff反应检测肝细胞糖原合成能力,并利用免疫细胞化学方法检测肝细胞角蛋白18(CK-18)的表达联合判断肝细胞纯度。结果每只大鼠可获取(1.38～1.74)×108个肝细胞,接种瞬时肝细胞活性>90%。倒置显微镜下观察肝细胞在接种后4 h基本完成贴壁,贴壁的细胞胞体变大变平,随后细胞相互靠拢呈岛状或条索状连接。糖原染色发现肝细胞内糖原被染成红色颗粒或片状。抗CK-18免疫细胞化学染色发现CK-18在肝细胞内均匀分布,被染成棕黄色。糖原染色及细胞CK-18联合鉴定肝细胞纯度达95%以上。结论用改良原位两步非循环灌注法及多次过滤低速离心法成功分离并培养原代大鼠肝细胞,可操作性强,所培养肝细胞数量、活力和纯度高,可在具备基本细胞培养条件的实验室推广。; 叶娟王群付溪郑锐丹应艳琴罗小平; 关键词：肝细胞原代细胞培养灌注法

生长追赶宫内发育迟缓大鼠肝细胞细胞因子信号转导抑制因子3表达与胰岛素抵抗的发生机制被引量：3: 2012年; 目的研究生长追赶宫内发育迟缓(CG-IUGR)大鼠肝细胞中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)以及胰岛素信号转导途径中关键分子胰岛素受体底物1(IRS1)和胰岛素受体底物2(IRS2)的表达变化,探讨CG-IUGR大鼠发生胰岛素抵抗的机制。方法采用孕期全程限食及缩减每产子鼠数量的方法建立CG-IUGR大鼠模型。正常摄食孕鼠所产子鼠设为正常对照组(AGA组)。运用改良原位两步非循环灌流法分离并培养原代大鼠肝细胞;用实时定量PCR和Western blot法检测胰岛素抵抗CG-IUGR大鼠肝细胞于基础状态和胰岛素刺激状态下SOCS3、IRS1和IRS2分子mRNA和蛋白水平表达变化。结果 CG-IUGR大鼠肝细胞在基础状态和胰岛素刺激状态下,SOCS3 mRNA和蛋白水平表达量均较AGA组高(Pa<0.05),IRS1 mRNA和蛋白水平表达量均较AGA组低(Pa<0.05),而IRS2 mRNA和蛋白水平表达量与AGA组比较均无统计学差异(Pa>0.05)。结论 CG-IUGR大鼠肝细胞中SOCS3表达量增加,并通过负性调节下调IRS1表达,这可能是CG-IUGR大鼠发生以胰岛素抵抗为核心的疾病分子机制之一。; 叶娟王群郑瑞丹王成斌应艳琴罗小平; 关键词：宫内发育迟缓胰岛素抵抗细胞因子信号转导抑制因子3 胰岛素受体底物肝细胞

特发性低促性腺激素性腺功能低下患者NR5A1基因突变分析被引量：1: 2015年; 目的研究特发性低促性腺激素性腺功能低下（idiopathic hypogonadotropic hypogonadism,IHH）患者NR5A1基因新的突变位点.方法收集病例组IHH患者61例,该组患者核型正常,头颅MRI扫描正常,同时排除其他内分泌疾病,正常对照组100名.提取两组实验对象外周血白细胞DNA,分别设计NR5A1基因2～7号外显子引物,聚合酶链式反应扩增其编码序列和剪接位点,采用双脱氧末段终止法测序.将测序结果与正常人基因组进行比对,同时对患者进行家系调查,收集临床资料,并对阳性患者基因型和临床表型进行分析.结果 61例IHH患者中6例患者出现了NR5A1基因的碱基改变.通过对100个种族及年龄匹配的对照组进行分析,没有发现NR5A1基因突变位点.结论病例组NR5A1基因检测出1种有意义的碱基改变,该突变可能与核型正常同时肾上腺功能正常的IHH男性患者发病有关.; 胡思翠应艳琴叶娟付溪黄姗宁琴罗小平; 关键词：基因突变

生长追赶宫内发育迟缓大鼠脂肪组织中巨噬细胞浸润及TNF-α/IL-6分泌水平被引量：1: 2013年; 目的研究生长追赶宫内发育迟缓(CG-IUGR)大鼠脂肪组织中巨噬细胞浸润及分泌炎症细胞因子水平改变,以探讨CG-IUGR大鼠脂肪组织炎症反应与胰岛素抵抗的关系。方法 SD大鼠怀孕期间全程给予正常孕鼠食量的30%以限制饮食,并通过增加仔鼠哺乳期营养摄入建立CG-IUGR大鼠模型。以8周龄雄性CG-IUGR仔鼠为研究对象,取附睾脂肪组织做石蜡切片,通过免疫组化染色鉴定脂肪组织中浸润的巨噬细胞。大鼠原代成熟脂肪细胞和巨噬细胞用Transwell系统行共培养,ELISA法测定细胞培养液上清中炎症因子IL-6和TNF-α表达水平。结果 8周龄CG-IUGR仔鼠体质量、体质指数均高于对照组(P均<0.01);脂肪组织中巨噬细胞浸润较对照组大鼠增多;细胞共培养体系培养液中IL-6、TNF-α水平较对照组增高(P均<0.01)。结论 CG-IUGR大鼠脂肪组织存在巨噬细胞浸润和慢性炎症反应,参与机体胰岛素抵抗的形成。; 王群侯凌叶娟高金枝应艳琴罗小平; 关键词：宫内发育迟缓脂肪细胞

胰岛素受体底物在生长追赶宫内发育迟缓新生大鼠脂肪细胞中的表达被引量：6: 2014年; 目的研究胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2在生长追赶宫内发育迟缓新生大鼠脂肪细胞中的时序性表达及其与胰岛素抵抗的关联。方法通过母鼠孕期全程饲料限制建立宫内发育迟缓模型,相对增加哺乳期子鼠营养摄入实现生长追赶。于4周龄时心脏采血测定空腹血糖、胰岛素和三酰甘油,计算胰岛素抵抗指数。测定1、3、5、7周龄SD大鼠的成熟脂肪细胞及前脂肪细胞分化的成熟脂肪细胞的IRS-1和IRS-2 m RNA以及蛋白水平的变化。结果生长追赶的宫内发育迟缓新生大鼠原代培养的成熟脂肪细胞IRS-1和IRS-2 m RNA表达分别于生后第5周和第7周显著下调,差异有统计学意义(P<0.05);前脂肪细胞分化的成熟脂肪细胞IRS-1和IRS-2 m RNA表达均于生后第5周显著下调,差异有统计学意义(P<0.05);两种成熟脂肪细胞IRS-1和IRS-2蛋白水平均于生后第1周开始显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论生长追赶的宫内发育迟缓新生大鼠脂肪细胞IRS-1和IRS-2的基因表达发生相对下调,可能与其生后远期的胰岛素抵抗密切相关。; 王成斌郑锐丹高金枝廖立红叶娟应艳琴宁琴罗小平; 关键词：胰岛素受体底物宫内发育迟缓胰岛素抵抗

宫内生长受限大鼠肝组织胰岛素样生长因子-2与过氧化物酶体增殖物激活受体-γ辅激活因子-1α表达的相关性被引量：3: 2013年; 目的探讨胎儿生长受限（fetal growth restriction,FGR）仔鼠生后追赶生长导致成年期代谢综合征的发生机制.方法孕Sprague Dawley大鼠随机分为正常饮食组和限制饮食组,各10只.限制饮食组孕鼠摄食量为正常饮食组孕鼠摄食量的30％,建立FGR仔鼠模型.限制饮食组和正常饮食组孕鼠妊娠19d时,取胎盘和胎鼠肝组织.限制饮食组新生仔鼠体重低于正常饮食组仔鼠体重平均值2个标准差者定义为FGR仔鼠.取新生仔鼠、4及8周龄完成追赶生长的仔鼠的肝组织,采用实时荧光定量-聚合酶链反应及Western印迹技术检测胎盘及不同周龄仔鼠肝组织胰岛素样生长因子-2（insulin-like growth factor-2,IGF-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3-K）、蛋白激酶（serine/threonine protein kinases,AKT2）、磷酸化AKT2 （phosphorylation of AKT2,AKT2-P）和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ辅激活因子-1α（peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator 1α,PGC-1α）mRNA及蛋白表达水平.测定8周龄完成追赶生长的FGR仔鼠和对照组仔鼠血浆甘油三酯浓度,并取新鲜肝组织,HE染色和油红O染色观察肝组织病理改变.采用t检验和Pearson直线相关分析进行统计学分析.结果 FGR仔鼠胎盘、胎肝、新生肝、4周肝组织中IGF 2 mRNA的表达水平分别为0.665±0.210、7.855±0.354、6.714±0.744和（4.510±0.490）×10-4,均低于对照组[分别为1.608±0.464、9.548±0.416、13.053±1.415和（22.800±0.060）×101]（t分别为4.535、7.175、9.713和4.580,P均＜0.01）.FGR仔鼠胎盘、胎肝、新生肝组织中PI3-K、AKT2、AKT2 P和PGC-1α的蛋白表达水平均分别较对照组显著降低（P均＜0.01）.8周龄仔鼠肝组织内IGF-2 mRNA表达检测不出,但PI3-K、AKT2、PGC hα mRNA的表达水平分别为0.380±0.150、1.020±0.019和0.280±0.160,均显著低于对照组（分别为1.510±0.220、2.360±0.360和0.680±0.350）（t分别为14.700、12.876和3.; 张美慧廖立红谢雪梅周秀云叶娟应艳琴宁琴罗小平; 关键词：胎儿生长迟缓胰岛素样生长因子2

新生儿期甲状腺功能异常相关诊疗问题被引量：8: 2012年; 甲状腺正常的结构功能对新生儿中枢神经系统发育至关重要，甲状腺激素是参与能量代谢、营养素及无机碘代谢、促进组织生长和分化的重要激素。现就新生儿期先天性甲状腺功能减低症（简称甲低）和甲状腺功能亢进症（简称甲亢）的临床特点、诊疗进展以及国内外相关热点问题进行阐述。; 叶娟罗小平; 关键词：甲状腺功能异常新生儿期先天性甲状腺功能减低症诊疗中枢神经系统发育甲状腺功能亢进症

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叶娟

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