兰风华
- 作品数：344 被引量：496H指数：10
- 供职机构：中国人民解放军更多>>
- 发文基金：福建省重点科技计划项目南京军区“十一五”医药卫生科研基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学政治法律更多>>
- 脊肌萎缩症家系运动神经元生存基因微小突变的鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的建立一套运动神经元生存（SMN）基因微小突变检测体系，以评价其用于脊肌萎缩症（SMA）家系的价值。方法采用RNA水平和基因组DNA水平双途径检测策略，用PCR一限制性片段长度多态性（RFLP）、位点特异性PCR、多重连接依赖性探针扩增（MLPA）和T克隆测序技术对2个SMA家系共7个成员行SMN基因微小突变分析。结果用MLPA和T克隆测序技术检测家系A的SMA患者有1个拷贝的SMN1基因，其第228位密码子上存在1个无义突变L228X，该突变来源于患者父亲；家系B的SMA患者父亲有2个SMN1基因，其中1个SMN1基因存在移码突变22_23insA。其余家系成员均为有1个SMN1基因拷贝的SMA携带者。结论建立的SMN微小突变检测体系成功鉴定了2个SMN微小突变，为SMA家系的遗传咨询提供了可靠依据。
- 曾健林炎鸿严爱贞兰风华
- 关键词：系谱运动神经元
- 恶性疟原虫RNA组分的分离
- 1994年
- 恶性疟原虫ＲＮＡ组分的分离南京军区福州总医院检验中心第一军医大学疟疾免疫研究室福州３５０００１兰风华，林来兴妹，赵雨田，毕惠祥，彭一兵，李英杰为了研究恶性疟原虫的ＲＮＡ，综合文献报道的多种方法，建立了从同批虫体中分离多个不同ＲＮＡ组分的方法，效果良好...
- 兰风华林来兴妹赵雨田毕惠祥彭一兵李英杰
- 关键词：恶性疟原虫疟原虫RNA
- 表面增强拉曼光谱技术在肿瘤病理中的应用被引量：4
- 2012年
- 表面增强拉曼散射(Surface-enhanced Raman Scattering,SERS)技术作为鉴定生物分子种类最有力的分析工具之一,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好及检测条件温和等优点。目前,SERS技术在肿瘤病理领域的应用尚处于起步阶段,但已显现出良好的应用前景和发展空间。该文简要介绍了SERS的机理、特性及活性基底,并对SERS技术在肿瘤病理的研究进展、局限性及潜在应用价值方面做较为全面的综述。
- 陈燕坪陈刚郑雄伟冯尚源王静席刚琴兰风华陈荣
- 关键词：肿瘤病理
- 脆性X综合征致病基因FMR1一个新型隐匿外显子发现及其鉴定
- 2013年
- 目的分析脆性X智力障碍1基因(FMR1基因)可变剪接表达类型。方法采用克隆-测序技术,从RNA途径分析人FMR1基因的可变剪接表达。结果构建健康人外周血cDNA53个T克隆,测序结果显示4个T克隆均有140bp大小的插入片段(NG_007529:21452-21591),为FMR1内含子9的一部分,生物信息学比对显示该片段上下游具有4个经典的剪接信号,可能为新的隐匿外显子。巢式PCR显示健康人多种组织cDNA中普遍存在该片段。杂种小基因剪接试验显示该片段可通过可变剪接,与上游的外显子9和下游的外显子10同时出现在体外培养真核细胞的成熟mRNA中。结论该研究发现人FMR1基因的新型隐匿外显子,丰富了人FMR1基因可变剪接的内容,也为进一步研究可变剪接与脆性X综合征发病机制之间的关系和脆性X智力障碍1蛋白的功能奠定了基础。
- 郭小艳富显果严爱贞廖娟张朵柯龙凤兰风华
- 关键词：FMR1基因可变剪接脆性X综合征
- 一例精神运动发育迟滞患儿的遗传学分析
- ＜正＞目的:对1例临床表现为精神运动发育迟滞的患儿进行遗传学检测以明确病因。方法:采集患儿外周血,通过新一代测序技术（NGS）,分别进行染色体非整倍体、100 k以上染色体缺失/重复检测,以及四千种单基因遗传病基因突变分...
- 王志红林炎鸿曾健兰风华
- 文献传递
- 中国肾上腺脑白质营养不良患者中一个新的ABCD1基因突变的鉴定被引量：6
- 2005年
- 目的鉴定并分析1个新的肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变类型和位点。方法采用长链RT-PCR技术,从外周血提取总RNA并合成cDNA,以cDNA为模板,分4个片段扩增致病基因编码区,将纯化后的PCR产物直接测序,找出基因突变的位点。同时应用限制性酶切分析的方法,分析发病家系所有成员的基因组DNA,以证实所发现的突变。结果患者肾上腺脑白质营养不良基因外显子2上的第343位密码子发生了GGC→GTC改变,使原来编码的甘氨酸被缬氨酸(G343V)取代;患者母亲为G343V突变携带者,患者哥哥的基因型和患者完全相同,其父亲为正常基因型。结论在中国人肾上腺脑白质营养不良患者中发现一个新的ABCD1基因突变,即G343V突变。
- 黄梁浒辛娜杨渤生兰风华
- 关键词：肾上腺脑白质营养不良基因突变类型直接测序外显子2患者母亲病家系
- MEKK2基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEKK2的表达抑制被引量：1
- 2012年
- 设计并合成针对人MEKK2基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,将合成的互补片段退火后克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,并使其在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组。将经鉴定正确的重组腺病毒质粒转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEKK2-siRNA重组腺病毒。病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞,Western blot印迹法检测其对MEKK2表达的抑制。经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEKK2-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误。Western blot印迹检测结果显示,重组腺病毒表达载体可抑制MEKK2基因的表达,以pAd-MEKK2-siRNA2(针对MEKK2 cDNA 992-1 010的片段)抑制效果为最佳,pAd-MEKK2-siRNA1(针对MEKK2 cDNA 1 456-1 474的片段)和pAd-MEKK2-siRNA3(针对MEKK2 cDNA 1 351-1 369的片段)则未见明显的抑制效果。DNA Ladder和细胞存活测定结果表明,敲减MEKK2的表达后,AGS细胞接受H2O2刺激后的凋亡受到较强抑制、细胞存活数增加,明显高于野生型细胞和转导siRNA阴性对照腺病毒细胞接受H2O2刺激后的,差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。该研究成功地构建了针对MEKK2基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEKK2基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础。
- 钱凤英兰风华董荔红黄俏佳
- 关键词：腺病毒载体RNA干扰H2O2细胞凋亡
- 正常人血清中IgG类抗角蛋白自身抗体的免疫印迹分析
- 1999年
- 目的了解作为正常人天然自身抗体一部分的抗角蛋白自身抗体群的免疫化学特性。方法用一组角蛋白对正常人血清IgG抗角蛋白抗体进行了免疫印迹分析。结果所分析的21份正常人血清均可识别至少一种角蛋白成分，可区分出14种反应性模式。3份合并血清的匣应性模式高度均一。结论血清抗角蛋白抗体普遍存在，但对角蛋白的反应性在人群中呈高度异质性。不同个体血清可互补。角蛋白一抗角蛋白系统可能是天然自身抗体研究的一个理想摸式系统。
- 兰风华刘玉峰陈苏民
- 关键词：抗角蛋白抗体正常人人血清免疫印迹分析天然自身抗体
- 一种新的NADH-细胞色素b5还原酶基因点突变的发现和基因诊断
- 1999年
- 为了查明中国人遗传性高铁血红蛋白血症(RaVl)患者的NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)基因突变类型,探讨RCM发生的分子机制,从已报道的1例RCM I型患者的外周血白细胞中提取RNA.应用反转录PCR法扩增了b5R cDNA,分析了b5R cDNA的全部编码序列的921bp片段.结果显示,b5RcDNA基因的第203位密码子存在(TGC→TAC)Cys→Try的错义突变.经基因组PCR-RFLP分析证实该突变并非PCR反应过程中的错配,而是一种新的基因突变类型.由于此突变减少了一个对酶功能至关重要的带巯基的半胱氨酸,而引入了一个带酚侧链的氨基酸,致使酶的稳定性及活性下降.
- 王瑶吴玉水郑培蒸兰风华朱忠勇唐玉钗杨文西方国安
- 关键词：基因突变类型基因诊断点突变细胞色素B5错义突变
- siRNA表达载体稳定沉默肺癌A549细胞MEKK3基因的细胞株建立被引量：1
- 2010年
- 目的构建人MEKK3基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体并建立稳定沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株。方法设计并合成针对人MEKK3基因4个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列，以BamHI及Hindm酶切位点分别克隆入pSilencer4．1-CMVhygro载体，测序鉴定后以脂质体分别转染入A549细胞，Western印迹检测它们对MEKK3表达的抑制，并选择抑制效率最高的表达载体转染入A549细胞，潮霉素筛选后获得含该载体的抗性细胞克隆株，荧光实时定量PCR检测该细胞克隆株中MEKK3表达抑制。结果测序鉴定表明4个MEKK3siRNA表达载体正确无误；Western印迹结果显示对MEKK3的表达有抑制作用，其中pSilencer4．1-MEKK3siRNA2的抑制率达84％；荧光实时定量PCR结果表明，pSilencer4．1-MEKK3siRNA2可稳定沉默MEKK3mRNA的表达，有效率达83％。结论成功地构建了针对人MEKK3基因的siRNA表达载体，并成功地建立了能高效且稳定地沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株。
- 沈瑞明兰风华钱凤英董荔红黄俏佳
- 关键词：肺癌A549细胞株基因表达荧光实时定量PCR
