姬玲玲
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 婴儿双歧杆菌介导的sKDR原核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响被引量：1
- 2009年
- 目的构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响。方法PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒。EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4DNA连接酶将目的基因片段和载体连接。电穿孔法将连接反应物转染婴儿双歧杆菌。厌氧培养重组质粒转化菌,并将其处理液加入由VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养基中培养24h,MTT比色法测定细胞存活率。结果PCR、酶切鉴定及核酸测序结果表明,获得了含pET32a-sKDR重组质粒的婴儿双歧杆菌;RT-PCR及SDS-PAGE电泳结果证实sKDR在基因及蛋白水平成功表达。与空质粒对照组相比,重组质粒转化菌处理液可明显抑制HUVECs增殖(P<0.01)。结论成功构建了婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因转运系统,体外实验证实其可明显抑制血管内皮细胞的增殖。
- 毛淑华姬玲玲刘洪徐一洲黄煌黄英易成
- 关键词：婴儿双歧杆菌抗血管生成可溶性血管内皮生长因子受体血管内皮细胞
- sKDR真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的研究获取可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)基因构建sKDR的真核表达载体,观察sKDR对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响。方法提取HUVECs总RNA,利用RT-PCR方法扩增KDR胞外免疫球蛋白1～3区基因片段,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1中,测序鉴定基因序列正确后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-sKDR转染Lewis肺癌细胞;采用RT-PCR和SDS-PAGE方法检测sKDR在基因和蛋白水平上的表达情况;将转染重组质粒的细胞上清液加至血管内皮生长因子(VEGF)诱导的HUVECs培养基中,采用MTT法检测转染细胞上清液对VEGF诱导的HUVECs增殖的影响。结果经酶切鉴定及基因测序证实成功获得了重组质粒pcDNA3.1-sKDR;重组质粒成功转染Lewis肺癌细胞,经RT-PCR和SDS-PAGE方法证实sKDR在基因和蛋白水平上均获得了成功表达;转染的含sKDR的Lewis肺癌细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sKDR,sKDR在真核系统中获得了有效表达,且表达的蛋白对VEGF诱导的血管内皮细胞增殖有明显抑制作用。
- 刘洪毛淑华邓丽聪姬玲玲徐一洲黄英
- 关键词：抗血管生成真核表达内皮细胞
- 生长激素对急性胰腺炎大鼠胰腺微循环改变的影响被引量：3
- 2008年
- 目的观察急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺微循环功能的变化及重组人生长激素(rhGH)对其影响。方法采用ipE.coli复制大鼠AP模型,SD大鼠随机分为对照组(C组)、AP组及rhGH治疗组(T组)。C组仅ip生理盐水(15 ml.kg-1);AP组ipE.coli(1×1010CFU.L-1,15 ml.kg-1);T组于ipE.coli后,im rhGH2.25 U.kg-.1d-1。AP、T组又依观察时点再分为1、3 d两个亚组。采用异硫氰酸荧光素标记红细胞(FITC-RBC)技术及微循环观测系统观察胰腺微循环的变化。结果AP组大鼠胰腺微循环红细胞流量、血液流速、血管数及功能血管数均明显低于C组的水平,尤以1 d时最为明显;T组大鼠的均明显高于AP组的水平,尤以3 d时最为明显。结论rhGH可明显改善AP大鼠胰腺微循环功能的障碍。
- 张萌许士叶毛淑华姬玲玲黄英
- 关键词：微循环生长激素急性胰腺炎
- 可溶性血管内皮生长因子受体1真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响被引量：2
- 2010年
- 本研究旨在构建可溶性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体1(soluble fmslike tyosine kinase-1,sFlt-1)的真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,并观察sFlt-1对血管内皮细胞增殖的影响。提取人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)总RNA,扩增Flt-1基因胞外1-3结构域,构建真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,测序鉴定基因序列。将重组质粒转染Lewis肺癌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE检测sFlt-1在基因及蛋白水平的表达情况。MTT法检测sFlt-1对VEGF诱导的HUVECs生长的影响。结果显示:①插入片段序列正确;②sFlt-1在基因水平成功表达且转染后的Lewis肺癌细胞能分泌表达sFlt-1;③含sFlt-1的细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。本研究成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,sFlt-1,在基因和蛋白水平均获得有效表达,且表达的蛋白可明显抑制由VEGF诱导的血管内皮细胞增殖。
- 姬玲玲毛淑华刘洪许士叶杨雨易成黄英
- 关键词：血管内皮生长因子可溶性血管内皮生长因子受体1内皮细胞真核表达抗血管生成
- 重组人生长激素对大鼠急性胰腺炎的治疗作用被引量：2
- 2008年
- 目的观察重组人生长激素(rhGH)对大鼠急性胰腺炎(AP)的治疗并探讨其机制。方法ipE.coli复制大鼠AP模型。42只健康♀SD大鼠随机分为对照组(C组)、急性胰腺炎组(AP组)及rhGH治疗组(T组)。AP、T组再按观察时点分为1、3 d两个亚组。C组ip 15 m.lkg-1生理盐水;AP组ip 15 m.lkg-1E.coli(1×1010CFU.L-1)后立即im生理盐水;T组于ipE.coli后立即im 2.25 U.kg-.1d-1rhGH。观察胰腺的病变程度并进行评分,测定血清淀粉酶的活性,免疫组化检测胰腺组织中ICAM-1蛋白的表达及NF-κB核的阳性率。结果AP两亚组胰腺组织病理评分、血清淀粉酶活性、ICAM-1蛋白表达及NF-κB核阳性率均明显高于C组水平(P<0.05);rhGH治疗能明显降低上述指标水平,尤以T3d组降低最为显著。结论rh-GH治疗能明显减轻大鼠急性胰腺炎的损伤程度,其机制可能与降低NF-κB活化程度及ICAM-1蛋白的表达水平等有关。
- 许士叶张萌毛淑华姬玲玲黄英王树人
- 关键词：重组人生长激素急性胰腺炎淀粉酶细胞间黏附分子-1核因子-KAPPAB
- 5-Fu与TRAIL联用抗结肠癌细胞株HT-29效应的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联用对结肠癌细胞株HT-29体外生长增殖、凋亡的影响,评价其联用效果。方法体外培养HT-29细胞,采用磺基罗丹明B(SRB)法测定细胞的存活率,Webb系数法判断联用是否具协同作用,流式细胞FITC-AnnexinV/PI双染法检测细胞的凋亡。结果结肠癌细胞株HT-29对TRAIL不敏感(IC50>10μg·mL-1),对5-Fu敏感(IC50<10μg·mL-1);0.1、1、10μg·mL-1TRAIL分别与0.05、0.1、0.5μg·mL-15-Fu联用48h,除0.1μg·mL-1TRAIL与0.5μg·mL-15-Fu联用组外,其余联用组细胞存活率均明显低于TRAIL单用组或5-Fu单用组水平;0.1μg·mL-1TRAIL及0.5μg·mL-15-Fu单用或联用时,HT-29细胞凋亡率分别为8.6%、18.1%和30.8%。结论 5-Fu与TRAIL联用具有协同的细胞毒和细胞凋亡作用。
- 毛淑华于水静晏菊芳姬玲玲黄英
- 关键词：TRAIL5-氟尿嘧啶结肠癌
