张福顺
- 作品数：18 被引量：54H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项中国疾病预防控制中心青年科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肠道病毒71型VP1蛋白粘膜免疫效果研究
- 手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease, HFMD）又名发疹性水泡口腔炎,引起HFMD的病原体主要为小核糖核酸病毒科（Picornaviridae）肠道病毒属的柯萨奇病毒（Coxsackie virus...
- 张福顺
- 关键词：EV71病毒粘膜免疫疫苗VP1蛋白
- 人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明提供了利用噬菌体表面展示技术筛选获得的人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体HBIgG03(轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示)和HBIgG12(轻链和重链可变区的氨基...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 文献传递
- 柯萨奇病毒A组16型病毒样颗粒免疫原性的初步研究
- 2014年
- 目的 研究柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A16,CA16）病毒样颗粒（Virus-like particles,VLPs）的免疫原性.方法 利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统共表达3CD及P1蛋白,制备CA16病毒样颗粒,通过SDS-PAGE及透射电镜等方法对VLPs进行鉴定,以氢氧化铝佐剂免疫ICR小鼠,并对乳鼠经颅腔攻毒.对病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果进行评价.结果 将重组CA163CD及P1蛋白的杆状病毒转染SF9细胞,可以产生类似CA16病毒颗粒的大小为27 ～ 30 nm的VLPs.小鼠免疫试验结果显示CA16 VLPs可以刺激产生较高水平的抗CA16病毒的特异性IgG抗体及中和抗体,乳鼠攻毒试验结果显示,母传抗体保护率高达90％.结论 CA16 VLPs可以刺激小鼠产生较高水平的体液免疫反应,并且母传抗体可以保护乳鼠抵御经颅腔的病毒攻击.
- 张福顺郝春生宋敬东张硕李阿茜刘林李川张全福梁米芳李秀玲李德新
- 关键词：柯萨奇病毒感染病毒样颗粒免疫遗传学
- 登革2型病毒ZS01/01株病毒样颗粒免疫原性研究被引量：3
- 2014年
- 目的 研究登革2型病毒（Dengue virus type 2,DENV-2）病毒样颗粒（virus-Like particles,VLPs）的免疫原性.方法 利用已构建的DENV-2 ZS01/01株病毒样颗粒的表达质粒转染293T细胞,对分泌型VLPs进行大量培养并通过蔗糖密度梯度离心法对其进行纯化.纯化的VLPs经Western Blot及透射电镜观察等方法鉴定后免疫BALB/c小鼠.利用ELISA及中和试验等方法对体液免疫反应进行检测,ELISPOT法测定细胞免疫水平.结果 登革2型病毒样颗粒表达质粒转染哺乳动物细胞所得上清经蔗糖密度梯度离心后,电镜下可观察到类似于天然登革病毒的大小在45～55nm之间的病毒样颗粒.体液及细胞免疫检测结果显示登革2型VLPs可以刺激小鼠产生较高水平的登革E蛋白特异性抗体及一定水平的中和抗体,免疫小鼠脾淋巴细胞经体外刺激后IFN-γ水平显著升高.结论 登革2型病毒病毒样颗粒免疫BALB/c小鼠后可引起一定水平的细胞免疫及体液免疫反应,该研究结果为四价登革病毒样颗粒疫苗的研制奠定了基础.
- 张硕张福顺李川李建东梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒病毒样颗粒免疫遗传学
- 一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明公开了一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用。本发明运用噬菌体表面呈现技术，采集乙肝疫苗免疫后具有高滴度表面抗体者的外周血淋巴细胞，通过基因工程手段构建了人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体文库，并...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 文献传递
- 人类肠道病毒71型亚单位疫苗壳聚糖佐剂作用的研究被引量：2
- 2014年
- 为了解人类肠道病毒71型(EV71)重组保护性衣壳蛋白(rVP1)亚单位疫苗壳聚糖佐剂的作用,本研究利用rVP1蛋白与壳聚糖佐剂制备的疫苗口服免疫新西兰白兔,通过ELISA方法检测兔血清、粘膜洗液(小肠、鼻腔和肺)及粪便中特异性IgG、IgA抗体水平,中和试验检测血清中和抗体滴度,并通过抗原刺激体外培养的兔脾淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平评价rVP1口服免疫效果。结果显示,单纯口服rVP1蛋白仅可诱导产生较低水平的血清IgG和粘膜IgA抗体,而含佐剂疫苗组与单纯抗原免疫组差异显著,并可诱导产生中和抗体。细胞免疫检测结果显示rVP1含佐剂组兔脾淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4水平明显高于未加佐剂组。本研究为研制EV71VP1口服疫苗奠定了基础。
- 张硕张福顺李阿茜刘林芜为李川张全福梁米芳李德新
- 关键词：肠道病毒71型VP1蛋白壳聚糖口服疫苗免疫原性
- 人源抗EV71病毒基因工程抗体的研究被引量：5
- 2011年
- 目的 研制人源抗EV71病毒基因工程抗体.方法 采集多个患儿外周血淋巴细胞,构建人源抗EV71单链（scFv）噬菌体抗体基因文库.用纯化的EV71 VPI蛋白对抗体库进行筛选,将筛出抗体的轻链和重链通过序列测定确定抗体轻重链型别后分别克隆入全抗体表达载体pAC-LCH3R后转染昆虫Sf9细胞,利用杆状病毒/昆虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达.结果 成功地获得了1株抗EV71病毒VPI蛋白的人源单克隆抗体,利用ELISA、IFA对所获人源单克隆抗体的功能特性进行鉴定,表达成分泌型IgG全抗体在体外与A型及C4亚型EV71病毒的中和反应结果 显示为阴性.结论 从免疫库中获得了1株人源非中和单抗,为EV71病毒引起的手足口病的鉴别诊断奠定了基础.
- 孙丽娜张黎张福顺李川张全福李德新梁米芳
- 关键词：肠道病毒属肽库
- TRIzol（或TriPure）试剂结合QIAamp Viral RNA Mini试剂盒用于血标本中病毒RNA提取的研究被引量：3
- 2014年
- 目的 建立一种安全、简便、可靠的适用于血标本中有包膜RNA病毒核酸提取的方法,保证埃博拉病毒核酸筛查的实验室安全,提高标本的核酸检测效率.方法 根据已发表可完全灭活埃博拉病毒的方法,通过实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）方法,比较分析QIAamp Viral RNA Mini试剂盒、TRIzol（或TriPure）试剂裂解样本并用或不用氯仿萃取后结合QIAamp Viral RNA Mini试剂盒等3种方法提取核酸的效率,优化反应步骤,建立一种安全、简便的血标本中病毒RNA提取方法.结果 血标本经TRIzol（或TriPure）试剂处理后,不经氯仿萃取,与QIAamp Viral RNA Mini试剂盒结合,提取病毒RNA,RNA提取效率优于QIAamp Viral RNA Mini试剂盒和美国CDC推荐的方法.结论 采用TRIzol（或TriPure）试剂裂解病毒,结合QIAamp Viral RNAMini试剂盒提取病毒RNA的方法简便、可靠,可用于埃博拉出血热相关标本的核酸检测.
- 李伟红李建东李阿茜曲靖王芹张福顺芜为孙丽娜张硕李川张全福梁米芳李德新
- 关键词：逆转录聚合酶链反应埃博拉病毒
- 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒结构和非结构蛋白表达研究被引量：25
- 2011年
- 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)是我国2010年新发现的新布尼亚病毒,可导致人类严重发热伴血小板减少综合征。SFTS新布尼亚病毒全基因组已解析,但病毒分子生物学结构蛋白特征及功能尚需更多研究。本文通过蔗糖密度梯度离心确定发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(HB29株)病毒颗粒的沉降密度及超离纯化条件,得出该病毒颗粒在蔗糖中的沉降密度为1.135g/mL。利用PCR方法扩增SFTSV病毒株HB29株病毒RNA聚合酶(RdRp)、糖蛋白前体蛋白(M)、包膜糖蛋白(Gn)、包膜糖蛋白(Gc)、核蛋白(NP)及非结构蛋白(NSs)的编码区基因片段,分别克隆入真核表达载体pcDNA5/FRT或VR1012,在293T细胞上获得上述基因表达。通过SDS-PAGE分析纯化病毒颗粒和重组蛋白,并通过免疫印迹(Western blotting)和间接免疫荧光(IFA)确定蛋白活性和分子量。本研究结果将有利于对新布尼亚病毒分子生物学特征的认识,为后期研究提供基础。
- 卢静李川张福顺芜为张全福张黎王涛王芹仇佩虹梁米芳李德新
- 关键词：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒蛋白表达
- 人源抗乙肝表面抗原基因工程抗体的研究被引量：1
- 2012年
- 目的研制人源抗乙肝表面抗原（HBsAg）基因工程抗体。方法采集多个HBsAg加强免疫后表面抗体阳性（HBsAb＋）志愿者的外周血，分离淋巴细胞，构建人源抗HBsAgFab噬菌体抗体基因文库。用纯化的HBsAg对抗体库进行富集筛选，经过序列测定确定抗体轻重链型别，分别克隆入真核细胞表达载体pAc—FcR和HL51—14，转染昆虫Sf9细胞和293T细胞，利用杆状病毒／昆虫细胞系统和哺乳动物细胞系统实现全抗体的分泌型表达。结果成功筛选出20株抗HBsAg的人源Fab抗体并制备出其中6株的IgG全抗体，竞争性ELISA结果显示6株全抗体针对的是HBsAg3个不同表位。结论成功筛选并获得了6株针对3个不同表位的抗HBsAg的IgG全抗体，为治疗性抗体和新疫苗的研制奠定了基础。
- 刘洋孙丽娜李川张福顺梁米芳李德新
- 关键词：细菌噬菌体免疫球蛋白G
