李永辉
- 作品数：36 被引量：50H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 一种多功能加样盒
- 一种多功能加样盒，由多个部分组成，所述加样盒包括：加样盒体、盒体卡块、加样盒体密封卡槽、加样板、加样板卡块、加样孔、说明板、蓄冷剂、加样盒上盖和加样盒上盖密封卡钩，本实用新型的有益效果在于：通过所述多功能加样盒的结构组成...
- 黄赛于力冯聪黄治石金龙李永辉
- 文献传递
- miR-196a靶向调控HOXA9基因的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的:研究HOXA9基因的表观遗传学调控机制,筛选靶向调控HOXA9基因的microRNA。方法:利用Tar-getscan在线分析软件预测特异性靶向HOXA9基因3'端非编码区域(3’UTR)的microRNA,采用PCR方法从1例健康供者DNA中扩增HOXA9基因3’UTR序列,插入经XbaI和PstI双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-M,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶重组质粒及microRNA表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。构建miR-196a结合位点突变的HOXA9基因3’端非编码区域突变型荧光素酶报告载体,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶突变型重组质粒及miR-196a表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。miR-196amimics以脂质体Hiperfect转染至MV4-11细胞,实时定量PCR及Westernblot检测HOXA9mRNA及蛋白的表达。结果:成功构建了含有1628bp的HOXA9基因3’UTR序列的荧光素酶报告重组质粒pGL3-HOXA9-3’UTR,并通过酶切及基因测序方法的鉴定;荧光素酶报告实验提示miR-196a组荧光素酶活性明显低于对照组。成功构建了miR-196a的2个结合位点突变的HOXA9基因3’UTR序列的突变型荧光素酶报告重组质粒pGL3-HOXA9-mut3’UTR,并通过基因测序方法的鉴定。miR-196a可以下调野生型质粒的荧光素酶活性,不影响突变型质粒的荧光素酶活性。MV4-11细胞中过表达miR-196a,可以明显下调HOXA9mRNA及蛋白表达。结论:miR-196a通过靶向结合HOXA9基因3’UTR的结合位点特异调控HOXA9基因。
- 窦立萍李永辉王莉莉于力
- 关键词：MICRORNA白血病
- 全基因组CpG位点甲基化捕获测序检测急性髓系白血病预后标志物及临床意义分析
- [目的]急性髓系白血病(AML)是一组异质性高的血液系统恶性肿瘤.目前，临床及遗传学特征不能完全准确地评估预后.DNA甲基化具有预后意义，但其临床检测尚未深入研究.本文采用一种新的全基因组CpG位点甲基化捕获测序方法(M...
- 李艳吕娜李永辉于力
- 通过基因表达芯片数据库研究PRAM1基因表达特征及其临床意义
- 2018年
- 目的:研究PRAM1基因在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的临床表型及其预后价值。方法:以486例急性髓系白血病患者的基因表达芯片为研究平台,结合临床资料总结PRAM1基因在多种AML亚型中的表达特征。利用正常人干细胞表达芯片,研究PRAM1基因在各阶段血细胞分化过程中的表达规律。通过急性髓系白血病细胞系验证临床样本表达芯片结果,并找到可以上调PRAM1基因的药物。结果:首先发现PRAM1基因在inv(16)AML中表达最高,在t(15;17)M3中表达最低,在其他类型中表达基本一致。依据美国NCCN指南,利用基因突变分类,PRAM1基因在伴发CEBPAdm突变的AML(cytogenetically normal AML,CN-AML)中高表达,而且PRAM1基因的高低表达可以对CN-AML进一步分层,且无事件生存率(event-free survival,EFS)有统计学意义;其次PRAM1基因在成熟细胞和粒单祖细胞中表达较高。地西他滨和西达本胺可以上调PRAM1基因,其中西达本胺的效果较好。结论:PRAM1基因在急性髓系白血病中有一定表达规律,在t(15;17)M3中表达最低,PRAM1基因高表达是CN-AML预后较好的标志。PRAM1基因在成熟粒细胞中表达较高,而且西达本胺可以上调该基因的表达,因而可作为治疗靶点。
- 吕娜钱坤刘静王莉莉李永辉于力
- 关键词：急性髓系白血病西达本胺
- FLT3基因3′-非翻译区-荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定被引量：5
- 2010年
- 为分析FMS样酪氨酸激酶3(FMS-liketyrosine kinase3,FLT3)基因3′-非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)可能的微小RNA(miRNA)调控位点,构建FLT3基因3′-UTR-荧光素酶报告载体,与miRNA共转染293T细胞,分析miRNA对其调控作用。采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增FLT3基因3′-UTR区序列,插入经PstI和EcoRI双酶切的经过改造的荧光素酶报告载体pGL3-control(pGL3-control-m);通过Target Scan5.1软件预测可能与FLT3基因3′-UTR作用的miRNA;采用FuGENEHD转染试剂包裹荧光素酶报告重组子和miRNA真核表达载体共转染293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了含有804bp的FLT3基因3′-UTR序列的荧光素酶报告重组子,通过酶切和基因测序的方法鉴定正确;miRNA靶位点预测显示,FLT3基因3′-UTR可能是miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-16、miRNA-195、miRNA-424、miRNA-497的作用靶点;与对照组相比,miRNA-15a、15b、195可使荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低20%左右。结论:成功构建了FLT3基因3′-UTR-荧光素酶报告载体,而miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-195可抑制其荧光素酶活性。
- 高晓宁林季李永辉王莉莉于力
- 关键词：FLT3基因基因调控
- 一种全新的表观遗传学调控环路AML1-ETO/THAP10/miR-383促进了t(8;21)急性髓系白血病的发生机制
- 李永辉刘代红于力
- 自体外周造血干细胞移植治疗13例AML1/ETO(+)急性髓系白血病的疗效观察被引量：1
- 2014年
- 本研究分析自体外周造血干细胞移植治疗AML1/ETO(+)急性髓系白血病(AML)的疗效及定量监测融合基因AML1/ETO在治疗中的应用。对2007年8月-2012年11月在本院进行自体移植的AML1/ETO(+)AML患者13例进行回顾性分析,中位随访26(7.8-75.8)个月,计算总生存率(OS)、无白血病生存率(leukemiafree survival,LFS)和累积复发率(relapse rate,RR),并对生存情况进行单因素分析。结果表明,3年的总体存活率为(70.5±15.3)%,3年的无白血病存活率为(51.3±16.7)%,3年的累积复发率为48.7%。在5例复发患者中对4例进行了AML1/ETO定量监测,发现形态学复发前AML1/ETO表达量均明显升高。在单因素分析中,患者年龄、性别、初诊时白细胞数量、自确诊白血病到进行移植的时间间隔、回输MNC数量等对总体存活率的影响均差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:自体造血干细胞移植对AML1/ETO(+)AML患者具有良好疗效,定期定量监测AML1/ETO表达量可预知早期复发,中高危患者复发后采用异基因移植可再次获得长期生存机会。
- 张青宜黄文荣窦丽萍邓爱玲付林徐绎涵刘占祥李永辉王楠于力
- 关键词：外周血造血干细胞移植AML1急性髓系白血病
- 中国t(8;21)AML患者临床特征及预后分析:一项多中心回顾性研究被引量：7
- 2017年
- 目的:通过回顾性分析中国北方15个血液病研究中心的586例伴有t(8;21)的急性髓系白血病(AML)患者临床资料,总结其在外周血、免疫分型、融合基因、细胞遗传学改变等的临床特点。方法:用COX回归进行预后因素的单因素和多因素分析,探究能够影响t(8;21)AML患者预后生存的因素。结果:t(8;21)AML患者的免疫分型中以HLA-DR^+、CD117^+、CD34^+、MPO^+、CD38^+、CDl3^+、CD33^+多见(>95%),部分患者伴有CD19^+和CD56^+;最常见的伴随基因突变为C-KIT突变(37.8%);除t(8;21)异位外,最常见的伴随染色体异常为性染色体缺失(38.9%);单因素分析显示,初诊时WBC≤3.5×10~9/L、不伴随C-KIT突变、做过HSCT的成人t(8;21)AML患者在OS、PFS上均有明显优势(P<0.05),不伴有髓外浸润、CD19^+患者仅在OS上具有优势;多因素分析显示,WBC≤3.5×10~9/L的患者在OS、PFS上均优于WBC>3.5×10~9/L的患者(P<0.05)。结论:中国的t(8;21)AML患者临床特征与报道的国外人群基本相似,WBC≤3.5×10~9/L是t(8;21)AML的预后良好因素,C-KIT突变是t(8;21)AML的预后不良因素。
- 宫丹李薇胡亮钉罗建民沈建良方美云杨清明王恒湘克晓燕陈惠仁王昭刘辉刘峰马一盖王景文李红华王全顺靖彧高晓宁窦丽萍李永辉于力
- 关键词：急性髓系白血病AML1-ETO预后分析
- miRNA-663在不同的白血病细胞系的表达水平及其生物学功能的初步研究被引量：2
- 2011年
- 本研究通过5-氮杂胞苷(5-aza)处理K562细胞系,寻找去甲基化后表达上调的microRNA(miRNA),检测其在正常人、慢性髓系白血病(CML)病人和白血病细胞系的表达水平,探讨其对K562细胞系增殖的影响。采用miRNA芯片筛选5-aza处理后表达上调的miRNA,结合生物信息学在上调的芯片结果中选取miRNA前体上游带有CpG岛的miR-663、miR-638及miR-92b,通过荧光实时定量PCR的方法验证在芯片结果中这3个上调的miRNA,证实miR-663在去甲基化后表达上调。分别在K562细胞系、U937细胞系、Kasumi细胞系、初治CML患者外周血白细胞及正常人骨髓白细胞检测miR-663的表达水平。通过甲基化特异性PCR(MSP)的方法,在K562细胞系检测miR-663前体上游CpG岛是否存在甲基化。通过瞬时转染的方法在K562细胞系过表达合成的miR-663成熟体,观察其对K562细胞增殖的影响。结果表明:去甲基化后能在K562细胞系上调miR-663的表达水平,与正常人骨髓白细胞相比,初治CML病人的白细胞、白血病细胞系K562、U937及Kasumi的miR-663表达水平相对较低;MSP检测表明,在K562细胞系miR-663上游的CpG岛是甲基化的。体外K562细胞系过表达miR-663可以抑制K562细胞系的增殖。结论:在K562细胞系miR-663上游的CpG岛存在甲基化。与正常人相比,miRNA-663在CML病人、白血病细胞系K562、U937及Kasumi表达水平相对较低,5-aza可以上调miRNA-663在K562细胞系的表达,在K562细胞系过表达miRNA-663可抑制K562细胞的增殖,提示miRNA-663在白血病中可能具有抑癌作用。
- 杨洋王莉莉李永辉高晓宁于力
- 关键词：K562细胞系去甲基化白血病
- 去甲基化药物治疗MLL基因阳性难治复发急性白血病的分子机制
- 目的：伴有MLL基因异常(染色体11q23)的急性白血病多数预后不良,其中MLL-AF4阳性的急性淋巴细胞白血病属于预后最差的一类白血病,该类白血病出现t (4； 11) (q21； q23)染色体异常,形成MLL-AF...
- 窦立萍李永辉王莉莉于力
