殷霄
- 作品数：14 被引量：32H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人冠状病毒HKU1血清学检测方法的建立及其初步应用被引量：2
- 2010年
- 目的 表达HCoV-HKU1的壳蛋白（N蛋白）及棘突蛋白（S蛋白）,建立检测血清中相应抗体的方法.方法 使用原核表达系统表达纯化HCoV-HKU1的N蛋白,转膜制条建立基于蛋白印迹的N抗体检测方法.构建HCoV-HKU1 S蛋白的真核表达质粒,转染细胞后,用间接免疫荧光（IFA）建立S抗体检测方法.利用已建立的N抗体和S抗体检测方法,检测了100份正常成人血清.结果 经Western Blot检测,S和N蛋白表达正确;利用已建立的血清学检测方法分析100份正常成人血清,其中HCoV-HKU1 S抗体的阳性率为47%,N抗体的阳性率为48哂,S抗体和N抗体均阳性的占总数的21%,双抗体均阴性的占总数的22%.S抗体和N抗体共同检测可获得74%的阳性检出率.结论 所建立的方法可用于HCoV-HKU1血清学分析,共同检测HCoV-HKU1 S抗体和N抗体可获得较好的检测结果.在正常成年中HCoV-HKU1抗体阳性检出率较高.
- 周为民王文玲谭文杰张陵林殷霄陆柔剑王慧娟
- 关键词：冠状病毒属病毒蛋白质类血清学
- 融合表达DEC 205单链抗体和NS3蛋白的HCV DNA疫苗的免疫原性研究被引量：2
- 2011年
- 为研发新型HCV DNA疫苗并探讨优化其免疫原性的策略,我们分析靶向树突状细胞(Dendritic cells,DC)的分子对HCV DNA疫苗免疫原性的影响。我们基于抗小鼠DC细胞表面分子DEC205/CD205的单克隆抗体DEC205的单链分子,构建可单独表达DEC205单链抗体或者与HCV非结构蛋白NS3融合表达的DNA表达质粒,并构建单独表达HCV非结构蛋白NS3的DNA表达质粒;经瞬时转染法鉴定HCV NS3及其与DEC205单链抗体融合蛋白的表达;随后采用注射结合电转的方式免疫Balb/C小鼠并研究各疫苗的体液(NS3特异性IgG抗体)与细胞免疫(IFN-γELISPOT)效果。结果表明:DEC205单链抗体基因与HCV NS3编码基因的融合可显著增强NS3特异的免疫应答;采用皮内注射加卡钳电极电转的方式可以产生最强的NS3特异性抗体和T细胞免疫反应。因此,通过DEC205单链抗体与HCV DNA疫苗靶抗原融合可明显增强免疫应答效果。该策略为HCV及其他类似病原的新型DNA疫苗研制提供重要依据。
- 殷霄王文谭文杰邓瑶管洁文波陈红阮力
- 关键词：DNA疫苗NS3抗原
- 基于丙型肝炎病毒结构基因的DNA疫苗初免重组腺病毒疫苗加强免疫小鼠后可诱导交叉保护被引量：1
- 2016年
- 目的 探索基于HCV多个靶抗原的新型T细胞疫苗研发策略.方法 用表达HCV河北株（1b亚型）结构蛋白（Core,E1,E2）的DNA疫苗与重组腺病毒载体疫苗联合免疫小鼠,并采用ELISPOT与胞内细胞因子染色分析（ICS）方法分析了特异性T细胞免疫应答特点与交叉保护效果.结果 DNA疫苗与重组腺病毒疫苗联合免疫小鼠后,针对Core、E1、E2都可产生较强细胞免疫应答;ELISPOT结果表明：联合免疫针对E1的反应最强,明显高于DNA疫苗同源免疫;ICS结果显示：针对E1抗原特异的CD4＋T细胞分泌的TNF-α水平与CD8＋T细胞分泌的IFN-γ水平以及E2抗原特异的CD4＋T细胞与CD8＋T细胞分泌的IFN-γ水平均高于三针DNA疫苗免疫组.在表达2a亚型HCV（JFH1）全长ORF的重组痘苗病毒替代攻击小鼠模型中,复制型DNA疫苗与重组腺病毒联合免疫可表现出交叉保护效应.结论 本研究为HCV新型疫苗研制及免疫保护机制研究提供了一定参考.
- 邓瑶管洁殷霄蓝佳明陈红王文谭文杰
- 关键词：T细胞应答联合免疫
- 含乙型肝炎病毒S-PreS1基因的DNA疫苗与蛋白颗粒疫苗联合免疫可增强免疫应答被引量：6
- 2011年
- 为研制新型有效的HBV治疗性疫苗,构建了含PreS1与S融合基因的HBV DNA疫苗,即pVRC-HBSS1(PreS121–47 aa融合在S抗原1–223 aa的羧基端),并制备了CHO表达相同结构的蛋白颗粒亚单位疫苗HBSS1。在Balb/C小鼠中采用不同的DNA免疫方式(即肌肉注射、皮内注射加电转)初免3次,蛋白颗粒亚单位疫苗(不同佐剂)肌肉注射加强免疫1次,然后我们分析比较了各组疫苗所引起的免疫应答特点。抗体检测结果表明:皮内注射结合电转初免组产生的PreS1与S特异性抗体水平皆高于肌肉直接注射组。进一步还发现DNA疫苗与蛋白颗粒亚单位疫苗两种疫苗联合应用后S抗原特异的细胞免疫应答(IFN-γELISpot分析)明显高于DNA疫苗或蛋白颗粒亚单位单独应用,其中皮内注射+电转结合蛋白颗粒亚单位疫苗联合免疫组可产生最强的细胞免疫应答。这些研究为新型HBV治疗性疫苗的优化设计与合理应用提供了依据。
- 陈红邓瑶谭文杰王文管洁文波殷霄阮力
- 关键词：DNA疫苗联合免疫
- 表达人高致病性禽流感病毒H5N1(安徽株)结构基因的DNA疫苗在小鼠中诱导的免疫应答分析被引量：4
- 2010年
- 本研究旨在研发经济、高效的人高致病性禽流感病毒H5N1实验疫苗并优化免疫方案。首先优化并合成H5N1(安徽株)的血凝素基因(HAop)和神经氨酸酶基因(NAop)并证实其正确表达,再构建含有H5N1(安徽株)结构基因的多个单顺反子(HAwt、HAop和NAop)和双顺反子(HAop/M2和NAop/M1)DNA疫苗质粒。随后,采用不同途径的体内电转法在第0周和第3周2次免疫Balb/C小鼠,初步分析了抗原特异性体液免疫(HA血凝抑制抗体,NA特异性抗体,中和抗体)和细胞免疫应答(IFN-γELISpot)的特点。结果表明:含有优化血凝素基因(HAop)和优化神经氨酸酶基因(NAop)的DNA疫苗可以快速激发较强的免疫应答,尤其是细胞免疫应答;皮内电转所激发的体液免疫应答强于肌肉电转。本研究为新型H5N1疫苗的研发以及免疫方案的优化奠定了基础。
- 王文陈红谭文杰邓瑶王敏刘源殷霄张柯管洁周剑芳舒跃龙阮力
- 关键词：H5N1DNA疫苗
- 表达丙型肝炎病毒NS3和Core融合蛋白基因的DNA疫苗免疫方案优化被引量：8
- 2010年
- 目的本研究旨在构建一种包含丙型肝炎病毒（HCV）保守区基因的新型DNA疫苗，并在小鼠模型中使用电转技术优化其免疫原性。方法首先，我们构建了包含HCV非结构蛋白NS3和核心蛋白Core部分基因序列的DNA疫苗，并证实了其表达；然后采用不同的体内电转方式于第0、4周分别免疫BALB／c小鼠，比较分析不同免疫方案的体液免疫（特异性IgG与抗体亚类）与细胞免疫应答（IFN-γ ELISPOT）的效果。结果使用电转技术可显著增强新型DNA疫苗免疫原性，采用皮内注射加卡钳电极电转的方式产生最强NS3特异性T细胞免疫反应。结论包含HCV保守区基因的新型DNA疫苗可通过优化电转技术增强免疫应答效果。这为我们下一步优化HCVDNA疫苗的免疫方案提供了依据。
- 殷霄鲁健谭文杰邓瑶管洁田瑞光王文陈红毕胜利阮力
- 关键词：丙型肝炎病毒DNA疫苗
- HCVE2-gAD融合DNA疫苗的构建及其细胞免疫效果评价
- 2010年
- 目的 将丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）包膜糖蛋白E_2与脂联素球部结构域（gAD）进行基因融合后构建DNA疫苗,并通过免疫小鼠评价其所诱发的HCV E_2特异性细胞免疫应答.方法 根据E_2与gAD的基因序列设计引物,分别扩增出不含跨膜区的E_2基因和添加连接肽的gAD基因,再利用重叠PCR将二者融合,以pVRC为载体构建DNA疫苗质粒,经体外转染293T细胞并用Western Blot证实其表达后,采用皮内注射加卡钳电极电转的方式于0、3、6周免疫BALB/c小鼠,取脾细胞进行ELISPOT检测分析其所诱发的E_2特异性T细胞免疫应答水平.结果 成功构建了能有效表达E_2-gAD融合蛋白的新型DNA疫苗,经皮内电转方式免疫小鼠后可获得比单独E_2疫苗更强的HCV特异性T细胞免疫应答.结论 gAD基因的融入可在一定程度上增强疫苗的免疫原性,为新型HCV DNA疫苗的进一步发展和优化莫定基础.
- 文波邓瑶谭文杰殷霄高基民阮力
- 关键词：肝炎病毒脂联素病毒包膜蛋白质类
- 含H5N1多个结构抗原的DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗联合免疫小鼠可明显增强免疫原性
- 2011年
- 本研究旨在研发经济、高效的人高致病性禽流感病毒H5N1实验疫苗并优化免疫方案。利用本实验室前期构建的含有H5N1(安徽株)结构基因的多个单顺反子(HAop和NAop)和双顺反子(HAop/M2和NAop/M1)DNA疫苗及重组痘苗病毒(天坛株)疫苗,采用不同方案(单独或联合)免疫BALB/c小鼠,初步分析了抗原特异性体液免疫(HA血凝抑制抗体,NA特异性抗体,中和抗体及M1与M2特异性抗体)和细胞免疫应答(IFN-γELIS-pot)的特点。结果表明:DNA疫苗与重组痘苗病毒(天坛株)疫苗联合免疫可以激发较强的多个抗原特异的免疫应答,尤其是体液免疫应答,明显优于DNA疫苗或重组痘苗病毒(天坛株)疫苗单独免疫;联合免疫方案中DNA疫苗初免所激发的HA与NA特异的体液免疫应答强于重组痘苗病毒(天坛株)疫苗初免,然而M1与M2特异的体液免疫应答则反之。本研究为新型H5N1疫苗的研发及免疫方案的优化奠定了基础。
- 王文陈红邓瑶杨扬殷霄王敏周剑芳舒跃龙阮力谭文杰
- 关键词：H5N1DNA疫苗联合免疫
- 不同佐剂对含S+PreS1融合抗原的乙型肝炎病毒颗粒疫苗免疫原性的影响被引量：8
- 2010年
- 本研究在前期工作基础上，用CHO细胞表达的含PreSI＋S融合抗原的新型基因工程HBV颗粒疫苗（HBSS1）与AI（OH）3、CpG及CpG＋Al（OH）3等佐剂配伍，在Balb／C小鼠模型上研究不同佐剂对HBV颗粒疫苗肌肉注射后免疫应答的影响，主要包括抗体滴度、抗体亚型分类及特异性细胞免疫（Y．IFNELISpot检测。结果表明：CpG佐剂结合HBSS1颗粒疫苗可快速诱导（单针免疫）高水平的抗PreS1及S抗体，IgG2a／IgG1比率〉1，同时可诱导较高抗原特异的细胞免疫应答；Al（OH）3＋CpG双佐剂组一次免疫后可诱导产生最高的抗S抗体滴度（1：105），其产生的抗体亚类包括IgG1、IgG2a与IgG2b；在S抗原N端（13～49aa）存在优势CTL表位。结论：CpG佐剂结合HBSS1颗粒疫苗应是发展新型治疗性乙肝疫苗的较佳选项。
- 陈红邓瑶谭文杰王文殷霄管洁王文玲阮力
- 关键词：乙型肝炎病毒病毒颗粒
- 乙型肝炎病毒DNA疫苗电转加强含S-PreS1颗粒的蛋白疫苗在小鼠中免疫效果的研究被引量：2
- 2010年
- 目的探索新型有效的HBV治疗性疫苗研制的策略。方法构建含S与PreS1融合基因的HBVDNA疫苗，采用两次蛋白疫苗（含不同佐剂）肌内注射初免，一次DNA疫苗皮内电转免疫加强的联合免疫方式，在小鼠中分析比较了各疫苗所引起的体液与细胞免疫应答。结果HBVDNA疫苗皮内注射加电转可明显增强表面抗原（s）特异的细胞免疫应答（IFN-γ ELISpot分析）及PreS1特异性抗体水平，并以蛋白疫苗加铝佐剂初免组细胞免疫增强效果最明显。结论HBSS1 DNA疫苗结合皮内注射＋电转方式可明显加强含S-PreS1颗粒的蛋白疫苗在小鼠中免疫效果，明显高于蛋白疫苗单独应用。这些研究结果为新型HBV治疗性疫苗的研制与应用提供了依据。
- 陈红张陵林谭文杰邓瑶王文殷霄文波管洁阮力
- 关键词：肝炎病毒乙型疫苗免疫接种
